реакція плазмокоагуляции

Принцип. Під дією ферменту плазмокоагулази активізується природна система згортання крові (плазміногенротромбін).

Приготування свіжої плазми. Стерильно взяту з серця кров кролика в кількості 3 мл вносять в пробірку з 2 мл стерильного 5% розчину лімоннокіслого натрію, змішують і центрифугують для осадження формених елементів крові протягом 10 хвилин при 1500 об / хв.

Плазму відсмоктують, розводять в 5 разів стерильним фізіологічним розчином і розливають в стерильні пробірки по 0,5 мл.

Хід дослідження. У пробірку вносять 1 петлю добової агарної культури досліджуваного штаму, яку суспензії в плазмі. Штатив з колбою поміщають в термостат при 37 ° С і реєструють результати через 1, 2, 4 і 18 годин інкубації.

Оцінка результатів. Поява на дні пробірки драглистоподібного згустку будь-якого розміру вважається позитивним результатом реакції. Відсутність згортання плазми протягом 18 годин розцінюється як негативний результат. В якості контролю рекомендується ставити реакцію зі свідомо коагулююча і некоагулірующім штамами, а також залишати одну пробірку з плазмою незасіяної.

Остаточна ідентифікація S. aureus вимагає постановки ще двох тестів. На першому етапі визначають наявність у штамів плазмокоагулази. Якщо після цього штам ідентифікувати не вдається, додатково визначають один з двох наступних ознак: наявність ДНК-ази (що краще) або здатність ферментувати маніт в анаеробних умовах.

При наявності позитивного результату в реакції плазмокоагуляции і хоча б в одному з двох попередніх тестів (пігмент лецитиназа) досліджуваний штам може бути віднесений до виду S. aureus (варіанти 2-3).

Відсутність плазмокоагулази і хоча б одного з двох перших ознак дає підставу вважати, що штам не належить до S. aureus (варіанти 5-7).

Розбіжності між результатами реакції плазмокоагуляции, з одного боку, і двох попередніх тестів - з іншого (варіанти 4 та 8), вимагає постановки одного з двох додаткових тестів (ДНК-ази або ферментації маніту в анаеробних умовах). У разі збігу результатів додаткового тесту з результатами реакції плазмокоагуляции штам вважається або належать до виду S. aureus при позитивних результатах (варіанти 4а і 4в), або не належать до нього (при негативних, варіанти 8б і 8г), або негативних (приналежність до інших видам, варіанти 4б і 4г) результатів.

Проводити ідентифікацію S. aureus лише на підставі результату одного тесту не рекомендується.

Схожі статті