Винахід відноситься до галузі медицини, зокрема до онкології, і може бути використано для точного передбачення чутливості або резистентності пухлини до хіміотерапії у хворих на рак молочної залози. Сутністю способу є внутрішньовенне введення розчину бромдіоксіурідіна за 1 год до дослідження, отримання ділянки пухлини для дослідження, фіксування в розчині формаліну і оцінка проліферативної активності в препараті після проведення хіміотерапії в неоад'ювантному режимі. При показниках індексу БДУ нижче 8%, Ki-67 нижче 24%, зміни диференціювання пухлини від низької до більш високої, ступеня злоякісності від високої до низької доцільно проведення хіміотерапії за тією ж схемою, більш високі показники БДУ і Ki-67, відсутність вищевказаної тенденції до зміни диференціювання і ступеня злоякісності пухлини дозволяють змінити схему хіміотерапії, яка призначається в ад'ювантному режимі. Технічним результатом є підвищення точності оцінки чутливості пухлини до проведеної хіміотерапії та передбачення ефективності проведеного лікування.
Аналіз попередніх методик показав, що, незважаючи на досить глибокі знання про прогностичних факторах, що впливають на віддалені результати і виживання хворих на РМЗ, оцінити їх "пророкує" значення з метою оцінки ефективності хіміотерапії виявилося скрутним через низьку відтворюваності результатів з вищевказаними тестами (Ki -67, PCNA, p53, HER-2 / new). Основна причина цього полягає у відсутності специфічних маркерів, достовірно пророкують чутливість пухлини до планованої хіміотерапії.
Технічний результат заявляється способу полягає в підвищенні точності оцінки чутливості пухлини до проведеної хіміотерапії та передбачення ефективності як неоадьювантной (передопераційної), так і ад'ювантної (післяопераційної) хіміотерапії у жінок, хворих на рак молочної залози. Цей результат досягається за рахунок комплексної оцінки проліферативної активності пухлинних клітин високочутливим методом з використанням препарату бромдіоксіурідіна (БДУ) і маркера Ki-67, а також знань про кореляцію ступеня злоякісності і диференціювання пухлини до і після проведеного хіміотерапевтичного лікування.
Аналіз відомого рівня науки і техніки показав новизну методу, тому що до теперішнього часу оцінка ефективності проведеного лікування здійснювалася лише при багаторічному динамічному спостереженні хворих. Тривала безрецидивная і загальна виживаність свідчила про ефективність проведеного лікування. Відповідно раннє виникнення рецидиву захворювання і поява метастазів розцінювалося як низька чутливість пухлини до проведеного лікування. Використовуючи нашу методику, ми можемо не тільки оцінити ефект доопераційного (неоадьювантной) лікування, а й передбачити доцільність проведення тієї чи іншої схеми хіміотерапії в Адьювантная режимі.
Сутність нашого способу полягає в комплексному підході до вирішення поставленого завдання, а саме: На першому етапі нами було оцінено проліферативна активність пухлинних клітин у хворих на РМЗ з використанням оригінальної бромдіоксіурідіновой проби. У 65 пацієнтів з обумовленими вогнищами раку молочної залози в / в за 1 годину до дослідження вводився розчин бромдіоксіурідіна (БДУ) з розрахунку 200 мг / м. кв. в 250 мл ізотонічного розчину. Потім після виконання діагностичної процедури (трепанбиопсия) пухлини матеріал фіксувався в 10% розчині формаліну тривалістю від 12 до 24 годин і заливався парафіном. Після стандартного приготування препарату ми оцінювали проліферативну активність в препараті імуногістохімічним методом за допомогою моноклональних антитіл за маркерами: БДУ, Ki-67. Таким чином, на першому етапі нами була оцінена проліферативна активність клітин пухлини високочутливим методом із застосуванням БДУ, який характеризує активність клітини в G / S фазу, і Ki-67, який маркує клітини у всіх фазах розподілу. При дослідженні первинних пухлин у хворих на РМЗ індекс маркера БДУ коливався від 1,9 до 26,9%. Індекс маркера Ki-67 коливався від 2,6 до 65,2% (медіана 24%).
В іншому дослідженні нами була оцінена ступінь злоякісності пухлини по Ellis і характер зміни цього показника від проведеної доопераційної (неоадьювантной) хіміотерапії. Ми оцінили зміна ступеня злоякісності і диференціювання пухлини на підставі дослідження частини пухлини, отриманої методом трепанбиопсия до і після лікування. Відповідь пухлини на проведене лікування був оцінений за стандартними критеріями ВООЗ і EORTC (повну відповідь, часткову відповідь, стабілізація, прогресування). Нами була знайдена тенденція до зміни диференціювання пухлини від нижчої до вищої в групах хворих з повним і частковим регресом пухлини після проведеного неоадьювантной лікування. Відповідно ступінь злоякісності змінювалася від високої до низької в цих же групах.
Для кращого розуміння сутності наводимо приклади конкретної реалізації способу. У хворої Б. після проведеного стандартного обстеження (трепанбиопсия, визначення індексу БДУ, Ki-67, диференціювання і ступеня злоякісності пухлини) була виявлена низкодифференцированная пухлина високого ступеня злоякісності з показниками БДУ 4% і Ki-67 18%. Було призначено лікування - хіміотерапія за схемою CMF. Після проведених 2-х курсів відзначений частковий регрес пухлини за стандартними критеріями. Після операції і виконання остаточного гістологічного дослідження високий ступінь злоякісності змінилася на низьку, а диференціювання пухлини з низькою придбала високу. Дані зміни в сукупності з "сприятливими" показниками БДУ і Ki-67, а також об'єктивним відповіддю пухлини на передопераційне лікування були підставою для продовження хіміотерапії в колишньому режимі. При обстеженні через 5 років і 7 місяців хвора жива без ознак рецидиву захворювання.
У хворої А. після проведеного стандартного обстеження (трепанбиопсия, визначення індексу БДУ, Ki-67, диференціювання і ступеня злоякісності пухлини) була виявлена низкодифференцированная пухлина високого ступеня злоякісності з показники БДУ 7% і Ki-67 20%. Було призначено лікування - хіміотерапія за схемою CMF. Після проведених 2-х курсів не відзначалося зміна розмірів пухлини. Була констатована стабілізація процесу. Після операції і виконання остаточного гістологічного дослідження не було виявлено змін ступеня злоякісності і диференціювання пухлини. Даний відповідь пухлини на проведене лікування в сукупності з показниками БДУ і Ki-67 змусив нас змінити схему лікування і призначити хіміотерапію за схемою FAC в Адьювантная, тобто післяопераційному, режимі в кількості 6 курсів з інтервалом у три тижні. При обстеженні через 5 років і 2 місяці хвора жива, без ознак рецидиву захворювання.
Приклади ефективності комплексної оцінки проведеного лікування можуть бути доповнені більш об'ємним і багаторічним спостереженням. В умовах проспективного вивчення і тривалого спостереження за хворими виявилося, що прогноз і показники виживаності виявилися сприятливішими у хворих на РМЗ з більш низькими індексами БДУ (нижче 8%) і Кi-67 (нижче 24%) у порівнянні з високими рівнями БДУ і Ki-67 (тобто вище рівнів медіан). 5-річна загальна виживаність відповідно дорівнювала 92% проти 68%, а безрецидивної виживаність 90% проти 61% (р = 0.01).
Вивчення ефективності адьювантной хіміотерапії в залежності від величини маркера БДУ і Ki-67 показало, що при рівнях мітки БДУ нижче медіани (<8%) и метки Ki-67 (ниже 24%) отдаленные результаты лечения высокие (5-летняя общая выживаемость до 87-90%) безотносительно того, получали больные адьювантную (послеоперационную) химиотерапию или нет. В группах же больных с высокими индексами метки (БДУ выше 8%, Ki-67 выше 24%) проведение адьювантной химиотерапии по схеме FAC повышало показатели 5-летней общей выживаемости на 18% по сравнению с больными, не получавшими химиотерапии (5-летние показатели общей выживаемости равнялись соответственно 68% и 50% - Р<0.05).
Спосіб комплексної оцінки чутливості пухлини при раку молочної залози до хіміотерапії шляхом оцінки реакції пухлини на проведене лікування на підставі дослідження показників маркера Ki-67, який відрізняється тим, що за одну годину до дослідження в / в вводять розчин бромдіоксіурідіна з розрахунку 200 мг / м 2 в 250 мл ізотонічного розчину, методом трепанобиопсии отримують ділянку пухлини для дослідження, фіксують в розчині формаліну протягом 12-24 год, заливають парафіном, після чого оцінюють проліферативну активність в препараті і після провед ня хіміотерапії в неоад'ювантному режимі оцінюють зміна диференціювання і ступеня злоякісності пухлини, при показниках індексу БДУ нижче 8%, Ki-67 нижче 24%, зміни диференціювання пухлини від низької до більш високої, ступеня злоякісності від високої до низької, а також оцінки об'єктивної відповіді пухлини на проведене лікування свідчать про доцільність проведення хіміотерапії за тією ж схемою, відповідно більш високі показники БДУ і Ki-67, відсутність вищевказаної тенденції до зміни діффернціровкі і ступеня з окачественності пухлини, а також відсутність об'єктивної відповіді пухлини на лікування дозволяє змінити схему хіміотерапії, яка призначається в ад'ювантному режимі.