РІД CORONAVIRUS - коронавірус ВЕЛИКОЇ РОГАТОЇ ХУДОБИ
Коронавірусних патологія - це типова інфекція слизових оболонок людини і тварин, яка реєструється практично у всіх країнах світу. Особливістю інфекційного процесу є те, що збудник здатний тривалий час Персіс-тировать в організмі перехворілих тварин на тлі тканинного і гуморального імунітету без втрати основних біологічних властивостей і індукувати інфекцію інтактних особин. Персистирование коронавірусів у тварин при безсимптомному перебігу патологічного процесу служить поясненням способу їх переживання в природі.
Коронавірус ВРХ відноситься до другої антигенної групі і серологічно пов'язаний з коронавірусами людини, індичок, щурів і мишей. Вірус відрізняється стійкістю в об'єктах зовнішнього середовища і успішно розмножується в епітелії легенів, носової порожнини, трахеї, тонкому і товстому кишечнику.
Для культивування коронавируса використовують перещеплюваних культури клітин. Найбільш успішно коронавірус адаптується до перещеплюваних культурах клітин MDBK і Vera.
Мал. 34. Морфологія негативно (а) і змішано (б) контрастували віріонів коронавируса ВРХ, репродукованого в монослойной культурі клітин Vero. х 90000.
Для таких складно влаштованих вірусів спостереження конформаційних змін з виявленням полярних ділянок у структурі віріонів представляє досить важке завдання. Слід вважати удачею отримання знімків змішано контрастували віріонів коронавируса ВРХ (рис. 346). Наслідком впливу поляризований плівки-підкладки є зміна форми віріонів, в структурі яких відносно слабко або майже не проглядається корона, і наявність позитивно контрастіруемого ділянки. На підставі даних електронної мікроскопії можливо зробити висновок, що вірусні частинки найімовірніше відносяться до "м'яким" Диполь, так як електричну дипольні структуру у них індукує зовнішнє електричне поле. А процес впливу завжди є трансформація або передача енергії, наслідком чого є конформаційні зміни в структурі віріонів. В цьому випадку віріони знаходяться вже не в основному, а в одному з порушених станів - полярному або, в даному випадку, функціонально активному по відношенню до контрастує анионам ФВК. Наявність запасу енергії в вирионах говорить про те, що вони знаходяться в напруженому, нерівноважному стані по відношенню до середовища.
Мал. 35. Морфологія і концентрація Варіон короноваріуса в препараті, що використовується для ІЕМ (а). Характерні імунні мікропреціпітати вірусних частинок, обробленої імунною сироваткою молозива ВРХ (б). х 50000
Таким чином, загальна розрахункова кратність концентрування становила 1/400. Електронна мікроскопія вмісту отриманого концентрату показала досить високу морфологічну стійкість вірусних частинок при переведенні їх з рідини в тверду фазу в формі гелеобразной плівки. Свідченням тому є більш виражена гомогенність: в концентраті переважали віріони сферичної або овальної форми з майже повністю збереженою короною. При цьому концентрація віріонів досягала 10 частинок / мл. Концентровані препарати використовували в якості референс-препарату при проведенні імммунной електронної мікроскопії і для інших цілей. Вірусний концентрат розфасовували на окремі аліквоти, які заморожували при температурі -196 ° С і зберігали при -20 ° С до моменту використання.
Імунна електронна мікроскопія коронавируса ВРХ. Для більшості завдань, що вирішуються методом ІЕМ, використовуються сироватки крові лабораторних тварин (кролики, морські свинки) і сироватки реконвалес-центів, що містять специфічні антитіла. Як відомо, антитіла в силу їх строго вираженою специфічності є ідеальну модель біологічно активного білка, яку з успіхом застосовують в якості специфічної мітки.
При активності вихідних сироваток молозива 1:84 і 1: 256, які визначаються в реакції гальмування гемаглютинації (РГГА), і їх розведенні 1: 100 для ІЕМ комплекси утворювалися в обох випадках, вільних віріонів не виявляється. Відмінність полягала в тому, що з більш активної сироваткою до складу комплексу включалося набагато більше число віріонів, і фон був більш забруднений білковими макромолекулами. У контрольних зразках при використанні сироватки від невакціні-рова корів специфічних імунних комплексів не виявлено.