1. Висолювання білків сульфатом амонію.
Важливим фактором стійкості білків в розчині є наявність близько частинок білка гідратної оболонки. Якщо до розчину білка додати сіль, наприклад (NH4) 2 SO4. Na2 SO4. NaCl та ін. То внаслідок руйнування водних оболонок частки білка зазвичай злипаються один з одним, укрупнюються і випадають в осад. Різні білки висаліваются при неоднакових концентраціях одних і тих же солей. Глобуліни, наприклад, осідають в напівнасиченому розчині сірчанокислого амонію, тоді як альбуміни - в насиченому розчині цієї солі. Висолювання білків є оборотною реакцією. Денатурації білків при цьому не відбувається.
Хід роботи. Наливають в пробірку 1-1,5 мл розчину білка, додають рівний об'єм насиченого розчину сульфату амонію. Спостерігають випадання білого пластівчасті осаду глобулінів. Каламутну рідину фільтрують через сухий складчастий фільтр. До фільтрату додають при перемішуванні надлишок сульфату амонію в порошку до припинення його розчинення. З'являється муть або пластівці випадають в осад альбумінів. До осаду додають 2-3 кратне за обсягом кількість води і переконуються у спроможності осаду до розчинення.
2. Осадження білків спиртом.
Спирт дегідратірующая білки, внаслідок чого відбувається їх коагуляція, агрегація і осадження. Реакція осадження білків спиртом при нетривалому контакті його з білком оборотна.
Хід роботи. У пробірку наливають близько 2 мл розчину білка, додають кілька кристаликів NaCl і по краплях етиловий спирт до утворення пластівців. Після осідання пластівців білка, зливають рідину над ними, до осаду доливають воду, спостерігаючи розчинення білка.
3. Осадження білків солями важких металів.
Солі важких металів, наприклад СuSO4. HgCl2. (CH3 COOH) 2 Pb ін. Осаджують білки з розчинів необоротно, що пов'язано з освітою білково-металевих нерозчинних у воді комплексних сполук. При цьому білки денатурують. Структури білка (крім первинної) повністю руйнуються. Такий білок втрачає здатність виконання властивої йому функції. Змінюються при цьому і фізико-хімічні його властивості, білок втрачає свою розчинність. Процес денатурації, як правило, є незворотнім.
Хід роботи: У пробірку наливають близько 2 мл розчину білка і додають повільно по краплях розчин солі важкого металу (1% -ного розчину сульфату міді або 5% -ного розчину ацетату свинцю).
Спостерігають коагуляцію білка. Випали пластівці від додавання води не розчиняються.
4. Осадження білків органічними кислотами.
Трихлоруксусная кислота є специфічним реактивом на білок. Вона тримає в облозі тільки білки і не тримає в облозі продукти розпаду білка і амінокислоти, тому нею користуються для повного видалення білків з біологічних рідин (наприклад, сироватки крові, молока). У цих умовах продукти розпаду білків залишаються в розчині.
Хід роботи: У пробірку наливають 2-3 мл розчину білка і додають кілька крапель 5% -ного розчину трихлороцтової кислоти. Спостерігають випадання осаду білка.
5. Осадження білків при нагріванні.
При нагріванні білки денатурують. Денатурація супроводжується зміною структури білкових молекул з порушенням співвідношення гідрофільних і гідрофобних груп у бік збільшення останніх. Така зміна структури молекул призводить до втрати нативних властивостей білка, в тому числі до втрати його розчинності.
У пробірку наливають 3-5 мл розчину яєчного білка, вставляють в неї термометр і розчин нагрівають до утворення пластівців. Помічають, при якій температурі утворилися пластівці. Перевіряють реакцію на оборотність.
Білок не випадає в осад, якщо середовище, в якій він розчинений, буде сильнокислая або сильнощелочной. Білкова молекула буде нести певний заряд - позитивний в кислому середовищі і негативний - в лужному середовищі. При цьому стійкість білка підвищується в результаті електростатичних сил відштовхування, і білок не випадає в осад.
Хід роботи: В чотири пробірки налити розчин білка. У другу додати кілька крапель розведеної оцтової кислоти, в третю - міцної крижаної оцтової кислоти, в четверту - кілька крапель лугу. Всі чотири пробірки прокип'ятити. Відзначити зміни.
Пробірку з міцної оцтової кислотою обережно нейтралізувати лугом, зазначивши зміни.