ЛФ, ФІУ, ПФ. Заняття № 5
5А. Основні положення
Методи створення анаеробних умов для культивування бактерій.
Залежно від способу створення безповітряному середовища, все методи створення анаеробних умов для культивування бактерій ділять на фізичні (наприклад, використання анаеростатах), хімічні (наприклад, видалення кисню в замкнутому об'ємі за допомогою хімічної реакції) і біологічні (спільне культивування в замкнутому просторі культур аеробного і анаеробного мікроорганізму); осібно стоїть метод Китта-Тароцці, що поєднує в собі фізичні, хімічні і біологічні способи створення безповітряному середовища проживання мікроорганізмів: бактерії культивуються в пробірці з глюкозним МПБ, залитим маслом і з шматочками печінки на дні.
Принципова схема культурального методу дослідження.
Всі види бактерій виділяються і ідентифікуються за єдиним алгоритмом, що складається з трьох етапів: отримання ізольованого росту, накопичення чистої культури, остаточної ідентифікації чистої культури; при виділенні спороносних бактерій (бацил і клостридій) проводиться прогрів посівного матеріалу на попередньому етапі для знищення вегетативних форм бактерій.
Культуральні ознаки бактерій.
До культуральним ознаками бактерій відносяться поживні потреби, оптимальна живильне середовище, температура культивування, умови аерації, швидкість росту, характер росту на рідких і щільних поживних середовищах.
Прилади автоматичної ідентифікації бактеріальних культур і особливості роботи з ними.
При використанні приладів автоматичної ідентифікації бактеріальних культур (наприклад, як гемокультіватора BACTEC) лікар-бактеріолог звільняється від проведення багатьох одноманітних і вимагають великих затрат часу процедур, однак, і в цьому випадку принцип проведення культурального методу дослідження повністю збігається з викладеним в цьому розділі, лише другий і третій етапи здійснюються без участі людини - вони практично повністю автоматизовані.
Вивчення біохімічних властивостей бактерій (на прикладі ентеробактерій).
Біохімічні властивості ентеробактерій починають вивчати одночасно з виділенням культури, засіваючи матеріал на диференційно-діагностичні поживні середовища Ендо, Левіна, Плоскірєва (для визначення здатності бактерій утилізувати лактозу), після чого чиста культура накопичується на середовищах накопичення та первинної диференціації (Рассела, Кліглера, Олькеницкого) , на яких, крім утилізації лактози, визначається здатність бактерій утилізувати глюкозу, сечовину і продукувати сірководень; на третьому етапі на середовищах Гісса оцінюється сахаролитической активність, а за здатністю розріджувати желатин - протеолітична активність; крім того, на останньому етапі проводять проби на наявність у ідентифікованої культури готельних ферментів.
Визначення терміна «бактеріофаг».
Бактеріофаг - це вірус, що вражає бактеріальну клітину.
Відкриття бактеріофага.
Бактеріофаг відкрив д'Ерелль.
Номенклатура бактеріофага.
Номенклатура фагів заснована на видовому найменуванні господаря.
Структура бактеріофага.
Структура бактеріофага може бути в принципі описана як нуклеїнова кислота, оточена білковою оболонкою, як і у всіх вірусів, в складі бактеріофага може бути тільки один тип нуклеїнової кислоти - або ДНК або РНК.
Морфологічні типи бактеріофагів.
Залежно від наявності та характеру основних структурних компонентів - головки і відростка - бактеріофаги поділяються на морфологічні типи, в межах яких, в свою чергу, можливі різні варіанти.
Класифікації бактеріофагів по спектру дії.
Бактеріофаги, що вражають кілька видів бактерій, називаються полифагами, один вид бактерій - монофагов (видовим фагами), один варіант бактерій всередині виду -типові фагами.
Класифікація бактеріофагів в залежності від ефекту дії на бактеріальну клітину.
За особливостями взаємодії з чутливою клітиною виділяють отруйний (лизирует клітку з виходом великої кількості фагових частинок) і помірний (впроваджуються в геном бактерії, тобто лізогенізіруя її) бактеріофаги; крім цього, бактеріофаг може повністю або частково замінювати свій геном на ділянку генома бактеріальної клітини - господаря: такі бактеріофаги називаються дефектними.
Взаємодія фага з бактеріальною клітиною.
Фаг адсорбується на поверхні бактерії, всередину останньої проникає лише нуклеїнова кислота фага, яка взаємодіє з геномом бактеріальної клітини, в результаті чого клітина починає продукувати білки і нуклеїнові кислоти фага, після чого вони збираються в фагів частинки і виходять з клітини (в разі вирулентного фага - продуктивна інфекція) або нуклеїнова кислота фага інтегрується в ДНК бактерії, репліціруясь в її складі при кожному діленні клітини (в разі помірного фага - лизогенизации).
Практичне застосування бактеріофагів.
Фаги використовуються в діагностиці (при ідентифікації виділеної бактерії), терапії (завжди місцево, спроваджували парентерально бактеріофаг знищується виробленими проти нього антитілами) і профілактиці (застосування per os, наприклад, дизентерійного і черевнотифозними бактеріофагів).
Виділення бактеріофага.
Матеріал, їх якого виділяється бактеріофаг (об'єкт зовнішнього середовища або бактеріальна культура), фільтрують через бактеріальний фільтр, фільтрат поміщають в рідку живильне середовище, куди засівають чутливу до його виділяє фагу бактеріальну культуру, після термостатування проводять облік досвіду: зростання бактерії свідчить про відсутність в досліджуваному матеріалі шуканого бактеріофага, відсутність росту бактерій свідчить, що шуканий бактеріофаг в досліджуваному матеріалі присутній.
Фагоіндікація.
Видовий фаг використовується для ідентифікація виду бактерії: після засіву ідентифікованої культури газоном на чашку Петрі на її поверхню крапають видовий бактеріофаг - якщо в місці нанесення краплі зростання бактерії не спостерігається, то бактерія відноситься до даного виду.
Методи титрування фага.
Титрування (тобто визначення його кількості в досліджуваному матеріалі) бактеріофага виробляють або на рідкому середовищі (метод Аппельмана) або на щільному середовищі (метод Граціа).
Фаготіпірованіе бактерій.
Тіпіруемий штам засівають газоном на пластинчастий агар, потім на засіяну поверхню капають краплі типових бактеріофагів, чашку з посівом инкубируют в термостаті і враховують досвід, реєструючи «стерильні плями» або «бляшки» - місця відсутності зростання в місці нанесення краплі бактеріофага, до якого чутливий даний варіант бактеріального виду.
5Б. лекційний курс
5В. теоретичний матеріал
8. Розмноження бактерій і принципи їх культивування
^ 8. Розмноження бактерій І ПРИНЦИПИ ЇХ культивування
8.7. Методи створення анаеробних умов для культивування бактерій
Залежно від способу створення безповітряному середовища, все методи створення анаеробних умов для культивування бактерій ділять на фізичні, хімічні та біологічні. Окремо стоїть метод Китта-Тароцці, що поєднує в собі фізичні, хімічні і біологічні способи створення безповітряному середовища проживання мікроорганізмів.
А. Повітря, точніше кисень повітря, можна видалити з середовища культивування бактерій фізичними методами.
1. Можна використовувати анаеростатах - посудина з герметичною кришкою, з якого відсмоктують повітря насосом. У такій посудину поміщають чашки Петрі з посівами і після відкачування повітря ставлять (якщо він за своїми розмірами дозволяє це зробити - такі невеликі анаеростатах називаються мікроанаеростатамі) в термостат, де відбувається культивування бактерій.
2. Існують, по суті, різновиди анаеростатах, в яких віддалений повітря заміщається якимось інертним газом, наприклад - в апараті Кіпа - воднем.
3. Один з найбільш поширених способів створення анаеробних умов при культивуванні бактерій використовується в так званих трубках Віньяль-Війона. Цей метод простий у виконанні і не вимагає якоїсь особливої апаратури. В трубках Віньяль-Війона здійснюється глибинне культивування бактерій. Для цього бактеріальна культура розлучається в розплавленої та охолодженої живильному середовищі (в пробірках або піпетках - звідси і назва «трубки») з таким розрахунком, щоб бактеріальні клітини знаходилися на значній відстані одна від одної. При застиганні живильного середовища бактеріальні клітини виявляються «замурованими» в її товщі і при культивуванні кожна з них формує окрему колонію (природно, без доступу кисню повітря).
4. Анаеробні умови для культивування бактерії создадются і в разі їх засіву уколом в високий стовпчик напіврідкого агару. Місце уколу тут же затягується і бактерії ростуть в товщі живильного середовища.
5. Випустити повітря, розчинений в рідкому поживному середовищі, можна за допомогою кип'ятіння. При нагріванні рідини розчинений в ній повітря виходить в атмосферу, що ми і спостерігаємо у вигляді «бурління». Такий процес називається регенерацією живильного середовища. Щоб згодом при повільному охолодженні повітря знов не розчинився в живильному бульйоні, його охолоджують дуже швидко (наприклад, під струменем холодної води).
6. Щоб звести до мінімуму дифузію атмосферного повітря в живильне середовище, її поверхню покривають шаром рідкого масла (наприклад, вазелінового). У цьому випадку говорять про «культивуванні під шаром масла».
7. При глибинному культивуванні буває важко отримати доступ до потрібної колонії і витягти її з товщі живильного середовища. Полегшує це завдання метод Перетца. в чашку Петрі заливається розплавлена і охолоджена живильна щільних среда, змішана з бактеріальною культурою, на поверхню якої обережно поміщається предметне скло, яке злегка вдавлюють в живильний агар. Ті колонії, які виростають безпосередньо під цим склом, після зняття останнього стають легко доступними.
Б. Хімічні методи створення анаеробних умов для культивування бактерій діляться на дві групи.
1. Для зв'язування кисню повітря можна провести в замкнутому просторі (наприклад, в ексикаторі з притертою кришкою) хімічну реакцію, яка протікає з поглинанням повітря.
а. У методі Арістовского з цією метою використовуються сипучі інгредієнти. У розвиток цього методу сучасна мікробіологічна промисловість випускає спеціальні набори, за допомогою яких можна створити газову суміш, як з повною відсутністю кисню, так і з присутністю його, а також вуглекислого газу та азоту, в певних концентраціях, необхідних для культивування бактерій з «нестандартними» вимогами до умов аерації.
б. У методі Омелянського з цією метою використовуються рідкі інгредієнти (пирогаллол і їдке калі).
2. Можна додати в рідку живильне середовище речовини, що зв'язують кисень. Такі речовини називаються редукуючими. До них відноситься, наприклад, глюкоза, тиогликолевая кислота і ряд інших.
В. Як біологічного методу створення анаеробних умов для культивування бактерій найбільш поширений (в різних модифікаціях) метод Фортнера. Принцип його полягає в тому, що в замкнутому просторі (наприклад, в парафинированной чашці Петрі) одночасно культивуються анаероби і так званий «жадібний аероб» - вид бактерій, посилено поглинає при своєму зростанні кисень. В якості останнього найчастіше використовується ентеробактерій Serracia marcescens. Аероб знищує весь кисень замкнутого обсягу, створюючи тим самим умови для зростання анаероба.
Г. ^ Метод Китта-Тароцці полягає в використанні для культивування анаеробів однойменної живильного середовища. Середовищі Кітта-Тароцці складається з мясопептонного бульйону, що містить глюкозу (як редукує речовини), регенерованого і залитого шаром масла, на дно пробірки поміщають шматочки паренхиматозного органу (частіше - печінки) для адсорбції розчиненої в мясопептонном бульйоні повітря.
А. Основні положення Морфологічні ознаки бактерій
До морфологічними ознаками бактерій відносяться: забарвлення за Грамом, форма, розмір, наявність спор, наявність капсул, рухливість, розташування.
Групи антибіотиків. Класифікація
Генеральна класифікація антибіотиків ділить їх на два основних «табору»: препарати широкого спектра дії високоефективні к.
Проект Федерального закону "Про спеціальну оцінці умов праці" (підготовлений Мінпраці Росії)
Цей Закон встановлює правові та організаційні засади проведення спеціальної оцінки умов праці, порядок.
Методичні вказівки StatusBar панель стану
Придбання навичок створення екранних форм Visual Basic і створення на них різних елементів управління
Інструкція щодо заповнення форми звіту про проведення спеціальної оцінки умов праці
Звіт про проведення спеціальної оцінки умов праці, форма якого передбачена додатком №3 (далі - Звіт), оформляється організацією.
Практичне заняття №12
Мета: Вивчити методику створення і використання мелкомасштабной карти і методику створення і використання рекомендаційної карти
попередніх дисциплін
Змістовний модуль: Набуті вади серця. Класифікація. Діагностика. Показання до хірургічного лікування і його методи.