Кольорові реакції на білки
Присутність білків в біологічних об'єктах або розчинах можна визначити за допомогою кольорових реакцій, протікання яких обумовлено наявністю в білку специфічних груп і пептидних зв'язків.
Реактиви: водний розчин яєчного білка (білок одного курячого яйця відокремлюють від жовтка, розчиняють в 15-20-кратному обсязі дистильованої води, потім розчин фільтрують через марлю, складену в 3-4 шари, і зберігають в холодильнику; 10% -й розчин гідроксиду натрію; 30% -й розчин гідроксиду натрію; 1% -ний розчин сульфату міді; 1% -й розчин ацетату свинцю; концентрована азотна кислота, 0,5% -й розчин нингидрина.
Обладнання: пробірки; водяна баня або спиртівка.
Завдання 1. Біуретова реакція.
У лужному середовищі білки, а також продукти їх гідролізу - пептиди дають фіолетове або червоно-фіолетове забарвлення з солями міді. Реакція зобов'язана наявності пептидних зв'язків в білках:
Інтенсивність забарвлення залежить від довжини поліпептиду.
- У пробірку налийте 5 крапель розчину яєчного білка, потім 10 крапель 10% -го розчину лугу.
- Додайте 1-2 краплі розчину сульфату міді, суміш перемішайте. З'являється червоно-фіолетове забарвлення.
Завдання 2. Ксантопротеиновая реакція.
Реакція характерна для деяких ароматичних амінокислот (фенілаланіну, тирозину, триптофану), а також для пептидів, що їх містять. При дії азотної кислоти утворюється нітросполуками жовтого кольору. Далі нітропохідні можуть реагувати з лугом з утворенням натрієвої солі, що має жовто-оранжеве забарвлення:
Дану роботу необхідно виконувати у витяжній шафі, дотримуючись особливої обережності!
- У пробірку налийте 5 крапель розчину яєчного білка і ОБЕРЕЖНО по стінці додайте 3-4 краплі концентрованої азотної кислоти.
- Суміш обережно нагрійте. Випадає осад, який забарвлюється в жовтий колір.
- Після охолодження в пробірку ОБЕРЕЖНО по стінці прилейте 10 крапель 30% -го розчину NaOH, жовте забарвлення переходить в помаранчеву.
Завдання 3. Реакція на серусодержащие амінокислоти (реак ція Фоля).
У залишках серусодержащих амінокислот цистеїну і цистину сірка при лужному гідролізі відщеплюється, утворюючи сульфіди. Сульфіди, взаємодіючи з ацетатом свинцю, утворюють осад сульфіду свинцю чорного або буро-чорного кольору.
- У пробірці змішайте 5 крапель розчину яєчного білка, 5 крапель 30% -го розчину лугу і 2 краплі розчину ацетату свинцю.
- Суміш обережно нагрійте на спиртівці до кипіння і кип'ятіть. Через деякий час з'являється буро-чорне або чорне забарвлення.
Реакція характерна для аміногруп в α-положенні і обумовлена наявністю α-амінокислот в молекулі білка. При нагріванні білка з водним розчином нингидрина амінокислоти окислюються і розпадаються, утворюючи двоокис вуглецю, аміак і відповідний альдегід. Відновлений нингидрин конденсується з аміаком і окисленої молекулою нингидрина, утворюючи з'єднання фіолетово-синього кольору:
В пробірку вносять 5 крапель 1% -го розчину яєчного білка, додають по 3 краплі 0,5% -го розчину нингидрина і нагрівають до кипіння. Через 2-3 хвилини з'являється рожеве, червоне, а потім синьо-фіолетове забарвлення.
Оформіть проведені дослідження у вигляді таблиці.