Бактеріологічне дослідження води
Вода є одним з основних факторів зовнішнього середовища.
Вона необхідна для побудови клітин організму. Без води в клітинах не можуть нормально протікати хімічні та фізіологічні процеси. Без води неможливе проводити заходи по санітарному благоустрою населених пунктів, підтримувати чистоту в оселях, готувати їжу та ін.
Поряд з цим вода може з'явитися фактором передачі збудників інфекційних хвороб.
Забруднена вода може зіграти певну роль у виникненні і поширенні кишкових інфекцій, туляремії, інфекційного гепатиту, Ку-лихоманки, амебіазу, мікозів.
Вода не повинна містити патогенних мікроорганізмів.
Для оцінки якості питної води використовуються такі кількісні показники як коли - титр, колі - індекс, загальне мікробне число.
За бактеріологічними показниками питна вода має відповідати наступним вимогам: загальна кількість бактерій в 1 мл нерозбавленою води не більше 100, коли - індекс (кількість бактерій групи кишкової палички в 1 л води) не більше з3 особин, коли - титр (кількість води, що містить 1 бактеріальну клітину кишкової палички) - 300 мл.
Колі - титр в питній воді визначається методом мембранних фільтрів і двох-або трифазним бродильним методом.
Вибір методу визначається кількістю і якістю досліджуваної води.
При дослідженні чистої, добре фільтрується води, зручніше використовувати метод мембранних фільтрів.
При дослідженні води, що містить колоїдні речовини і сторонні домішки, що утрудняють фільтрацію, користуються бродильним методом.
При визначенні титру кишкової палички методом мембранних фільтрів необхідно виконати три етапи: підготувати мембранні фільтри, підготувати фільтрувальний апарат, провести фільтрування і виростити посіви.
1. Підготовка мембранних фільтрів. Для фільтрування води відбираються дрібнопористі нітроцелюлозні мембранні фільтри №3 (без вад) і поміщаються в хімічний вогнетривкий склянку з підігрітою до 50 - 60 градусів за Цельсієм дистильованою водою. Після цього воду в склянці необхідно нагрівати на слабкому вогні до її закипання. Кип'ятіння фільтрів проводиться тричі по 15 хвилин. Після першого і другого кип'ятіння вода зі склянки зливається і замінюється свіжою. Після останнього кип'ятіння вода не зливається і фільтри залишаються в ній до вживання.
2. Підготовка фільтрувального апарату. Воронку і столик фільтрувального апарат Зейтца стерилізують кип'ятінням або обпаленням. На охолоджений столик апарату, прожареним на вогні і охолоджені пінцетом з гладкими кінчиками, поміщають мембранний фільтр. На столик з фільтром встановлюють і закріплюють верхню частину приладу - воронку.
3. Фільтрування води і вирощування посівів. У воронку фільтрувального апарату стерильно наливають досліджуваний об'єм води і за допомогою насоса створюють вакуум в приймальному посудині.
Бактерії, що знаходяться в пробі води, затримуються на фільтрі.
Після закінчення фільтрації знімають воронку фільтру, обережно стерильним пінцетом знімається фільтр і переноситься в чашку Петрі з живильним середовищем.
Вирощування фільтра на тій чи іншій живильному середовищі дозволяє виділити певну групу мікроорганізмів.
Для виявлення ешерихій фільтр накладається на агар Ендо або на інше середовище (середа Плоскірєва), використовувану для виявлення мікробів цієї групи.
Чашки Петрі кришками вниз поміщаються в термостат на 24 години при 37 градусах за Цельсієм. Після закінчення вирощування фільтри переглядають під лупою.
Результат вважається негативним, якщо на агарі Ендо відсутні яскраво - червоні колонії - це значить, що кишкової палички в даному об'ємі води немає.
При наявності червоних колоній з металевим блиском (характерним для колоній кишкової палички) з колоній роблять мазки і фарбують їх по методу Грама.
При наявності грамнегативних паличок середніх розмірів, що не утворюють спори, з колоній виробляють відсів в пробірки в пробірки з глюкозопептонной середовищем Ейкман. Посіви поміщають в термостат на 24 години при 43 градусах (температура, при якій проростають особини, які виділяються теплокровними).
Помутніння живильного середовища і наявність газоутворення свідчить про присутність кишкової палички в даному обсязі досліджуваної води.
Визначення коли - титру бродильним методом проводиться в три етапи.
У перший день в залежності від ступеня забруднення проводять посів різних обсягів досліджуваної води на середу Буліра з поплавками.
Обсяги води обернено пропорційні ступеня її забруднення.
Як правило засівають чотири десятикратно зменшуються обсягу води (наприклад: 1; 0,1; 0,01; 0,001 мл).
Посіви витримують 24 години при 43 градусах за Цельсієм.
На другий день після вилучення посівів з термостата відбирають ті колби, в яких змінився колір індикатора в середовищі Буліра, а в поплавцях скупчився утворився газ. З цих колб роблять відсів в чашки Петрі з агаром Ендо. Посіви поміщають в термостат на 24 години при 37 градусах.
На третій день посіви витягують з термостата і макроскопічно досліджують виросли колонії. Наявність яскраво червоних колоній з металевим блиском вказує на присутність в даному об'ємі води кишкової палички.
Для підтвердження з відібраної колонії роблять мазок і виробляють відсів в пробірку з середовищем Буліра.
Мазок забарвлюють по Граму і проводять мікроскопію, а пробірку з посівом ставлять в термостат на 24 години при 43 градусах.
Наявність в мікропрепараті грамнегативних паличок, зміна забарвлення середовища Буліра і наявність газу в поплавці є доказом присутності кишкової палички.
При визначенні мікробного числа стерильними піпетками відбирають і засівають в чашки Петрі з МПА 1 мл; 0,1 мл (або ще більше розведення) досліджуваної води.
Отримання різних обсягів досягається розведенням досліджуваної води стерильною водою. Із однієї проби роблять посів не менше двох розведень. При цьому кожен обсяг води відбирається окремої стерильною піпеткою.
Посіви поміщають в термостат при 37 градусах на 24 години. Потім проводять підрахунок колоній, що виросли на живильному середовищі в чашці. Колонії підраховуються за допомогою лупи на чорному тлі. Для того, щоб отримати число колоній в 1 мл води, отримане число необхідно помножити на розведення. Всі отримані результати сумуються і виводиться середня арифметична величина.
При вивченні бактеріальної флори в відкритих водоймах з метою виявлення впливу будь - яких забруднювачів може бути застосований метод пластинок обростання.
Метод заснований на властивості мікроорганізмів прикріплятися до поверхні скла. Цей метод дозволяє отримати відомості про екологічні взаємовідносини мікроорганізмів, їх реакцію на зміни у зовнішньому середовищі.
Для отримання пластинок обростання, ретельно знежирені предметні скельця прикріплюють будь - яким способом через певні проміжки на тросі. Трос, що несе скла, з вантажем на нижньому кінці і поплавком на верхньому опускають у водойму.
Скло повинні бути пронумеровані, а в журналі необхідно записати якісь номери стекол якого горизонту відповідають.
Установку зі склом у водоймі витримують 3 4 діб, після чого її витягують з води і акуратно виймають скла. Скло висушують і фіксують сумішшю Нікіфорова (рівні обсяги етилового спирту і ефіру) або метиловим спиртом, фарбують по Граму, а також іншими складними методами забарвлення для виявлення залізо і серобактерий та інших видів мікроорганізмів.
Мікропрепарати вивчають за допомогою иммерсионного мікроскопа, що дає можливість характеризувати видовий склад мікрофлори на різних горизонтах водойми.
При обліку бактерій за фізіологічними групами виробляючи посіви на поживні середовища для виявлення Десульфуруючі бактерій, бактерій беруть участь в процесах аммонификации, нітрифікації і денітрифікації. Проводять посіви для виявлення облігатних аеробів і анаеробів, що беруть участь в фіксації азоту і розкладанні клітковини.