1. Забір матеріалу. Характер матеріалу залежить від первинної або вторинної локалізації мікроба-збудника. Якщо матеріалом служать випорожнення, що найчастіше буває, то їх беруть до початку або після добової перерви в антибактеріальної терапії. Матеріал краще забирати ректальної трубкою, тампоном зі стерильною пелюшки або стерильною пергаментного паперу, спеціальним пристроєм для забору фекалій (ні в якому разі не допускаючи його контакту з дезінфектанатамі). Якщо матеріалом служить кров, то забирають 10,0 мл крові з вени ліктьового згину.
2. Транспортування матеріалу здійснюється в системі «скло, метал» протягом не більше трьох годин після його забору або в консерванті з супроводжуючими документами медичним працівником.
3. Живильні середовища, використовувані для бактеріологічного дослідження можна поділити на три групи: а) середовища збагачення. створюють умови переважного розмноження виділяється збудника і засновані або на принципі наявності в середовищі факторів активації росту даного мікроба, або на принципі придушення зростання супутніх мікробів-антагоністів. Першій групі відповідне середовище Раппопорта, другий - селенітовий, магнієва, Мюллера, з пеніциліном і т.д .; б) середовища диференційно-діагностичні. Це щільні поживні середовища, що містять диференціює вуглевод - лактозу і індикатор. Кишкові палички, які розкладають лактозу (лактозоположітель-ні), ростуть у вигляді забарвлених колоній в залежності від типу середовища в червоний і помаранчевий (середа Ендо, Плоскірєва) або фіолетовий (середа Левіна) колір. Клебсієли пневмонії розкладають лактозу в середовищі з індикатором бромтимоловим синім і утворюють колонії жовтого кольору, в той час як колонії лактозоотріцательних биоваров формують колонії кольору середовища. Сальмонели і шигели на середовищах Ендо, Левіна, Плоскірєва також розкладають лактозу і дають безбарвні колонії; в) середовища накопичення чистої культури. Найчастіше застосовується середу Олькеницкого (скошений агар): вона складається з стовпчика, скошеної частини і включає лактозу, глюкозу і сахарозу, індикатор, реагенти для визначення сірководню і уреази. Посів роблять уколом в стовпчик і штрихом по поверхні скошеної частини. При зростанні бактерій глюкоза краще розкладається в стовпчику, лактоза - на схилі, в результаті чого диференційовано змінюється колір середовища, при утворенні газу - формуються бульбашки і розриви в середовищі, при продукції сірководню - почорніння по ходу уколу, а - уреази - зміна кольору середовища на помаранчевий.
4. Ідентифікація виділених культур заснована на визначенні:
* Загального для сімейства ознаки - морфології бактерій (гр / -палочкі), оксідазоотріцательние, наявності капсули (у клебсієл);
* Кольору колоній на чашкових середовищах;
* Рухливості (сальмонели і ешерихії рухливі, шигели та клебсієли нерухомі);
* Чутливості до антибактеріальних препаратів;
* Чутливості до бактеріофагів.
Визначення антигенної структури засноване на попередньому встановленні серогрупи, частіше з монорецепторними адсорбованими сироватками, а потім серовара теж з адсорбованими сироватками.
Серологічна діагностика починається з отримання сироваток від хворих. У них виявляються антитіла в реакції аглютинації, гемаглютинації або РСК. Діагноз заснований на виявленні антитіл в діагностичному титрі або наростанні титру антитіл в динаміці хвороби.
Діагностика кишкових ешеріхіозов (коліентеритів).
Мета: виділення чистої культури ешерихій і відмінність її від умовно-патогенних представників нормальної мікрофлори кишечника.
Матеріал для дослідження: фекальні маси.
Схема: 1 - посів на середовище Ендо (Левіна)
2а - виявлення забарвлених колоній, мікроскопія їх по Граму
2б - попередня диференціація патогенних ешерихій від умовно-патогенних: постановка РА на склі з сумішшю сироваток до патогенних серогрупи
2в - позитивно реагує в реакції аглютинації колонія відсівається на середу Олькеницкого
3а - облік зміни середовища Олькеницкого: посиніння і розрив всього середовища
3б - визначення чистоти виділеної культури
3в - визначення серовара патогенної ешерихії (шляхом постановки р. Аглютинації з окремими ОК-сироватками на склі і в пробірках) з живою (визначення К-антигену) і убитої шляхом кип'ятіння (визначення О-антигену) культурою
3г - проба на індол, рухливість і чутливість до антибіотиків
Серологічний метод - постановка реакції аглютинації з сироваткою хворого (на 2-му тижні захворювання).
ДІАГНОСТИКА ЧЕРЕВНОГО тифу, паратифів А І В сальмонельоз.
Матеріал для дослідження см. Вище.
Схема роботи (виділення гемокультури):
1 - посів 10 мл венозної крові в середу Раппопорта;
2а - облік середовища Раппопорта: почервоніння середовища без газу в поплавці - збудник черевного тифу, почервоніння з газом в поплавці - збудники паратифів або сальмонеллезов;
2б - мікроскопія зростання;
2в - пересівши на середовища Левіна або Плоскірєва;
3а - виявлення безбарвних колоній на цих середовищах;
3б - мікроскопія колоній;
3в - пересівши на середу Олькеницкого;
4а - облік зростання на середовищі Олькеницкого (див. Вище);
4б - визначення чистоти виділеної культури;
4в - встановлення антигенної структури: спочатку в РА на склі з монорецепторними сироватками до О-антигенів: для групи А - О2, групи В - О4, 5; Д - Н-О9. Потім в такій же реакції з сироватками до специфічних антигенів (в межах даної групи);
4г - визначення додаткових біохімічних і морфологічних властивостей (розлив-ються індолу, рухливість);
4д - визначення чутливості до полівалентним видоспецифічні бактріофагам;
4е - визначення чутливості до антибіотиків.
ЛАБОРАТОРНА ДІАГНОСТИКА кишкового єрсиніозу
Для захворювань, що викликаються Yersinia enterocolitica, характерно клінічне різноманітність. Найбільш часто зустрічається кишкова форма, значно рідше - захворювання з симптомами апендициту, ще рідше - септична форма.
Кишкова форма протікає у вигляді ентеритів, ентероколітів і гастроентероколітів. Специфічні симптоми часто відсутні, тому по клінічній картині без виділення збудника її важко відрізнити від сальмонельозу, дизентерії, ентероколітів іншого походження.
Бактеріологічний метод дослідження.
Матеріал для дослідження: при кишковій формі збудник виділяють з випорожнень; при аппендикулярной - з мезентеріальних лімфатичних вузлів і крові; при септичній - з випорожнень і крові.
I етап - матеріал засівають петлею або тампоном на одну з щільних елективних середовищ (Ендо, Плоскірєва, вісмутсульфітагар). Посіви інкубують протягом 24 годин при 37 5о 0С, а потім додатково 24 години при 20-22 5о 0С.
Одночасно випорожнення засівають в одну із середовищ накопичення (МПБ або пептонную воду). Кров засівають в співвідношенні 1:10 тільки в середовища накопичення. Посіви поміщають при 4-5 5о 0С і витримують до 30 діб, періодично висіваючи через кожні 3-5 днів на щільні елективні середовища. Y. enterocolitica при низькій температурі розмножуються в цих середовищах, в той час як сальмонели, шигели, кишкова паличка, протей не розмножуються.
II етап - Переглядають посіви на щільних середовищах і відбирають підозрілі колонії (округлі, величиною від 0,5 до 2 мм в діаметрі, сіруватого кольору на Ендо і Плоскірєва і коричневого на вісмутсульфітагаре). З колоній роблять мазки за Грамом і при наявності грам- паличок відсіваються на середу Ресселя.
III етап - при зміні кольору стовпчика на середовищі Ресселя з росту на ній роблять мазок за Грамом на чистоту і вивчають такі тести: