Для отримання тонких (до 6 мкм) гістологічних зрізів необхідно фіксований і промитий матеріал залити в щільну середу, попередньо просочивши нею шматочки тканин. Залежно від способу розчинення все заливальні середовища поділяються на розчинні в органічних розчинниках і водорозчинні. До перших відносяться парафін, пластичні полімери на основі парафіну, целлоидин, до других - желатин, поліетиленгліколі, поліефіри, деякі метакрилати.
Парафін - суміш високомолекулярних насичених вуглеводнів, продукт перегонки нафти; розчиняється в аніліні, бензолі, бергамотне маслі, целозольви, хлороформі, декалін, діоксані, бутанолі, пропанолі, толуолі, тріхлоріетілене, ксилоле. Кожен з цих розчинників можна використовувати в якості проміжного середовища між спиртом і парафіном.
Температура плавлення різних парафінів знаходиться в діапазоні від 27 до 62˚С. У гістологічної техніки застосовують парафін з температурою плавлення 56˚С.
Ряд зарубіжних фірм виробляють спеціальний парафін для гістологічних досліджень, що містить різні пластичні полімери, такі як диметилсульфоксид ( «Парапласт», «Гістопласт С», «Гістозес»). Окремо слід виділити нову гомогенізований парафінову середу для заливки Histomix®, що містить в своєму складі натуральний віск і синтетичні полімерні добавки.
З точки зору гістологічної техніки умови затвердіння парафіну при заливці об'єкта дуже важливі. Коли розплавлений парафін починає укріпляти, на його поверхні виникає плівка у вигляді пластівчастого хмари, а потім починають утворюватися кристали, з яких складається твердий парафін. Ця зміна стану парафіну тягне за собою зменшення його обсягу приблизно на 5-10%, що обумовлює константні деформації забитої в парафін тканини. Кристали парафіну мають форму пластинок або голок більш-менш тонких, в залежності від охолодження. Чим охолодження повільніше, тим тонше кристали. Слід зазначити, що кристали, що випадають в тканинних просторах при укладанні об'єкта в парафін, не роблять деформуючого впливу через своїх невеликих розмірів. Коли парафін починає укріпляти - він непрозорий, потім стає прозорим, з блискучою поверхнею. У цей момент стиснення парафіну припиняється.
Дуже важливу роль в затвердінні парафіну грає розчинений в ньому повітря. При охолодженні певного обсягу парафіну спершу твердне його поверхневий шар. Оскільки розчинність повітря в застигаючому парафіні знижена, в місці зіткнення рідкого парафіну і затвердевающего шару виділяється повітря. Частина цього повітря розчиняється в більш теплою і ще рідкої центральної масі, а інша частина залишається в газоподібному стані між кристалами парафіну. Таким чином можуть створюватися порожнини, заповнені повітрям. Це обумовлює зернистий вид в центрі блоку після його затвердіння. Щоб уникнути подібної грануляції парафіну в ході закладення об'єкта, можна застосовувати різні засоби. Невеликі шматочки тканини (2-3 мм) можна закладати на годинному склі в малій кількості парафіну, який повільно наливають піпеткою. При більших об'єктах хороші результати дає заливка в глибокому і вузькому посудині; при цьому затвердіння парафіну починається в глибині і поширюється догори, а звільняється повітря виділяється на поверхні.
Для заливки в парафін об'єкт необхідно спершу збезводнити, потім провести через проміжну середу, розчинну як в парафіні, так і в спирті.
Таким чином, в процесі заливки об'єкта в парафін виділяють чотири основні етапи:
- зневоднення спиртом,
- просочування проміжним середовищем (ксилол, толуол, бензол і ін.),
- просочування парафіном,
- остаточний висновок в парафін.
Целлоидин - добре розчиняється в ефірі нітроклітковини. У гістологічної практиці застосовують 2%, 4% і 8% розчини целлоидин, які готують з целлоідінових пластин або відмитої від емульсії і висушеної рентгенівської плівки.
Заливка тканини в целлоидин в даний час менш популярна, ніж парафінова, та її застосовують головним чином для заливки труднорежущіхся тканин і об'єктів великих розмірів, з яких важко отримати хороші парафінові зрізи. Целлоідіновую заливку використовують також в тих випадках, коли необхідно уникнути впливу на досліджуваний матеріал високих температур. Крім того, заливка матеріалу в целлоидин дозволяє отримати кращі результати при наявності в об'єктах великих порожнин, лакун і шарів різної консистенції.
Ефір і сухий целлоидин вогненебезпечні, тому при роботі з ними слід дотримуватися обережності.
Заливка в целлоидин-парафін рекомендується для обробки об'єктів, які легко стискуються при парафінової заливки, наприклад органів кровотворення, мезенхимной тканини, а також органів і тканин, що мають багатошарову будову (трахея, шкіра та ін.). При цьому використовуються вигідні сторони обох методів.
Заливка в желатин знаходить широке застосування при вивченні об'єктів, легко розпадаються при різанні на кріо-мікротому, при виготовленні зрізів з органів, багатих сполучною тканиною, вивченні ембріональних об'єктів, а також жирових і ліпоїдних включень. Використовують кристалічний прозорий харчовий желатин, з якого готують 25% і 12.5% розчини.
Заливка в водораствормие пластмаси добре зарекомендувала себе в гистохимии, особливо для виявлення ліпідів і ферментів. Використовуються синтетичні пластмаси - поліетиленгліколь, полівакс, метилметакрилат і ін.