ТЕМА: МІКРОБІОЛОГІЧНА ДІАГНОСТИКА ЧЕРЕВНОГО тифу і паратифу.
Мета: вивчити бактеріологічний метод дослідження черевного тифу і паратифів на 1-му тижні захворювання.
Черевний тиф, паратифи А і В - гострі інфекційні захворювання, схожі за своїми клінічними проявами, патогенезу, біологічними властивостями, що характеризуються ураженням лімфатичного апарату тонкого кишечника, бактериемией, протікають з вираженою інтоксикацією, збільшенням печінки, селезінки, часто з розеолезной висипом. Тому їх розглядають разом. Але це самостійні захворювання. Збудник черевного тифу Salmonella typhi (паличка Еберта-Гаффкі), паратифів А - S.paratyphi А (паличка Бріоні-Кайзера); збудник паратифу B - S. рaratyphi В (паличка Шотмюллер) відносяться до роду Salmonella сімейства Enterobactericeae. Назва роду дано на честь американського вченого Д. Салмона.
Це дрібні палички з закругленими кінцями, перитрихи, суперечка і капсул не утворюють, грамнегативні.
Сальмонели черевного тифу і паратифів - факультативні анаероби. Оптимальна температура росту для них 37ºС. На МПА утворюють круглі, куполоподібні, вологі, гладкі S-форми колонії. S.paratyphi B (паличка Шоттмюллера) можуть виростати в вигляді великих колоній зі слизових валиком по периферії. На диференційно-діагностичних середовищах Ендо і Левіна колонії сальмонел безбарвні, з блакитним відтінком, на середовищі Вільсон-Блера (вісмут-сульфіт агар) в результаті відновлення сульфіту натрію до сірчистого натрію - чорні або коричнево-зелені; викликають рівномірне помутніння МПБ. У короткому ряду Гисса сальмонели черевного тифу розкладають глюкозу, мальтозу, маніт до кислоти без газу, а паратіфозние палички - до кислоти і газу.
Сальмонели черевного тифу і паратифів А подкисляют, а паратифу В щелочат лакмусовое молоко. Желатину НЕ розріджують, індолу не утворюють, продукують Н2 S.
Сальмонели містять соматичний термостабільний О-антиген, жгутиковий, термолабільних Н-антиген. Спільність антигенної структури призводить до того, що сальмонели черевного тифу і паратифів агглютинируются не тільки в гомологичной, але і в родинних Антисироватка. Для того, щоб виключити перехресне групову агглютинацию, готують імонорецепторние сироватки, що містять антитіла проти специфічних фракцій сальмонел. Збудники черевного тифу і партіфов А і В знаходять за антигенними властивостями за схемою Кауфмана-Уайта.
Джерело захворювання - хворі люди і носії.
Механізм передачі інфекції: фекально-оральний. Переважає водний шлях передачі, рідше зустрічається харчовий і контактно-побутовий шляхи.
Таблиця 3
Схема патогенезу черевного тифу
Повне одужання;
Ускладнення, пов'язані з розвитком виразок-прориву, кишкові кровотечі.
Перехід в бактеріоносійство.
Інкубаційний період при черевному тифі в середньому дорівнює 14 дням. Початок захворювання характеризується поступовим підйомом температури при явищах наростаючої отруєння ендотоксинів, позначається в загальній слабкості, головного болю, затьмаренням свідомості, безсонні, бреде. До кінця першого тижня захворювання температура тіла досягає 40-41 ° С. На другому тижні захворювання на шкірі живота з'являється розеолезная висип, виражені симптоми ентероколіту. У видільної-алергічної фазі лімфоїдна тканина фолікулів і бляшок піддається некрозу, що може привести надалі до перфорації кишечника, перитоніту і смерті (3-4 тижні захворювання). Можливі ускладнення: пневмонія, міокардит, інфекційно-токсичний шок.
Досліджуваний матеріал в залежності від стадії патогенезу (вказано в таблиці 3).
Живильні середовища: жовчний бульйон, середа Рапопорта (жовчний бульйон, глюкоза або маніт, індикатор Андреде). Жовч є для сальмонел сприятливим середовищем. Диференційно-діагностичні середовища Плоскірєва, Ендо, Левіна.
Залежно від фази розвитку захворювання, методи діагностики різні. На першому тижні захворювання для дослідження беруть кров і виділяють гемокультуру. На другому тижні захворювання, коли в крові з'являються антитіла, ставлять реакцію Відаля - розгорнуту реакцію аглютинації за визначенням антитіл в сироватці крові хворого. На третьому тижні захворювання - для підтвердження діагнозу на дослідження беруть випорожнення або сечу і виділяють копрокультури або урінокультуру.Самостійна робота студентів
Вивчити схему бактеріологічного дослідження крові хворого на черевний тиф (схема №2).
Провести посів крові хворого на черевний тиф на жовчний бульйон або на середу Рапопорта.
Пересіяти культуру з середи Рапопорта на середовище Ендо.
З безбарвних колоній на середовищі Ендо приготувати мазок, забарвити за Грамом, промікроскопувати, замалювати. Пересіяти безбарвні колонії на середу Ресселя або скошений МПА.
Вивчити чистоту культури на середовищі Ресселя або на скошеному МПА. Провести посіви на МПА для визначення чутливості культури до антибіотиків методом паперових дисків, на середовища Гіссен або МТС-12Е, на МПБ для визначення біохімічних та протеолітичних властивостей.
Провести реакцію аглютинації на склі чистої культури з полівалентними і монорецепторними сироватками.
Провести облік «строкатого ряду» або МТС-5 - 12Е (на демонстраційному матеріалі). Облік антибіотикограми.
Скласти протокол бактеріологічного дослідження крові хворого з підозрою на черевний тиф і дати висновок.
Скласти схему бактеріологічного дослідження випорожнень хворого з підозрою на черевний тиф.
Вказівки до самостійної роботи
Бактеріологічні дослідження черевного тифу на першому тижні захворювання проходять у декілька етапів.
1-й день - 5-10 мл крові, взятої стерильно з вени хворого у ліжку посіяти в 50-100 мл жовчного бульйону або в середу Рапопорта. Посіви помістити в термостат на добу при температурі 37 ° С.
Середа Рапопорта складається з м'ясо-пептонного бульйону, 10% жовчі, 2% глюкози або 1% маніту і 1% індикатора Андреде. При зростанні S. typhi на середовищі Рапопорта відзначається помутніння, почервоніння, газу немає. При зростанні. S.paratyphi А і В, середа почервоніє, в результаті утворення газу спливає поплавок.
2-й день. З середи Рапопорта пересівають на середовище Ендо і поміщають в термостат на добу при температурі 37 °.
3-й день. На середовищі Ендо виростають безбарвні колонії (тому що вони лактозу розкладають), які пересівають на середовище Ресселя для виділення чистої культури.
4-й день. Проводять облік посівів на середовищі Ресселя, визначають чистоту культури. На середовищі Ресселя лактоза не розкладається (середа червона), глюкоза розкладається (середа синя). Культура чиста. Готують мазки, фарбують за Грамом, микроскопируют, визначають рухливість. В мазках грамнегативні палички середньої величини з закругленими кінцями, рухливі, перитрихи.
З чистою культурою ставлять орієнтовну реакцію аглютинації з діагностичними аглютинативна сироватками черевного тифу, паратифів А і В. З сироваткою, що дала позитивну реакцію аглютинації, ставлять розгорнуту. Чисту культуру висівають на середовища Гіссен або МТС-5У для визначення біохімічних властивостей, на мясопептонний бульйон - протеолітичних властивостей, на МПА - для визначення чутливості до антибіотиків і визначення ставлення до черевнотифозні бактеріофагу.
На середовищах Гіссен розкладаються глюкоза, мальтоза і маніт до кислоти без газу. Лактоза і сахароза не розкладаються. На МПБ виділяється сірководень. Культура чутлива до певних антибіотиків і лизируется під дією черевнотифозними бактеріофага. Розгорнута реакція аглютинації позитивна з сироваткою черевного тифу.
Препарати для специфічної терапії та профілактики черевного тифу і паратифів А і В
Показання до застосування
Бактеріофаги - фільтрат фаголізатов сальмонел черевного тифу
Для лікування та екстреної профілактики
Імунітету не створює, механізм дії - специфічний лізис бактерій вірусами
Назвіть збудників черевного тифу і паратифів.
Чим відрізняються сальмонели черевного тифу від сальмонел паратифів А і В за біохімічними властивостями?
Яка антигенна структура збудника черевного тифу?
Особливості патогенезу черевного тифу (стадії захворювання).
Який матеріал береться у хворого для ранньої діагностики черевного тифу і як цей матеріал досліджується?
Який склад середовища Рапопорта?
Який матеріал береться для бактеріологічного дослідження у хворого з підозрою на черевний тиф на 3-4 тижнях захворювання?
заняття 3
ТЕМА: МІКРОБІОЛОГІЧНА ДІАГНОСТИКА ЧЕРЕВНОГО тифу (ПРОДОВЖЕННЯ). СЕРОЛОГІЧНА ДІАГНОСТИКА ЧЕРЕВНОГО тифу. Для серологічного дослідження реконвалесцентов і виявлення бактеріоносіїв використовують реакцію пасивної Vi-гемаглютинації для визначення Vi-антитіл в сироватці крові. Діагностичне значення має титр пасивної Vi-гемаглютинації 1:40 і вище.
Самостійна робота студентів
Скласти схему реакції Відаля.
Поставити реакцію аглютинації Відаля для діагностики черевного тифу і паратифів.
Провести облік реакції Відаля по демонстраційного матеріалу, дати висновок.
Поставити РПГА (РНГА) - реакцію пасивної (непрямий) гемаглютинації з еритроцитарних діагностикумів.
Провести облік РПГА, дати висновок.
Вказівки до самостійної роботи
Для постановки реакції Відаля беруть кров з пальця разової голкою або з ліктьової вени в кількості не менше 1-1,5 мл на початку другого тижня захворювання. Кров збирають в стерильну пробірку, яку поміщають в термостат на 30-60 хвилин. Згусток відокремлюють від стінок пробірки пастерівською піпеткою, пробірку поміщають в холодильник. Після відстоювання сироватку відсмоктують і використовують для постановки реакції.
Досліджувану сироватку розводять стерильним фізіологічним розчином від 1:50 до 1: 800. В реакції використовують 2 контролю: в першому контролі - контроль антигену (КА) міститься фізіологічний розчин (1 мл) і діагностикумів (2 краплі); другий контроль - контроль сироватки (КС) містить 1 мл досліджуваної сироватки в розведенні 1:50. Контроль повинен бути абсолютно прозорим.
Таблиця 5
Схема постановки реакції Відаля
Після додавання діагностикумів пробірки струшують і поміщають в термостат на добу при температурі 37 ° С.
Реакція оцінюється по їх +. ++++ - різко позитивна, +++ - позитивна, ++ - сумнівна, - негативна.
Висота титру аглютинінів не може бути доказом наявності захворювання. Достовірні результати реакції аглютинації досягаються при повторних випробуваннях сироватки крові з інтервалами 5-7 днів. Очевидне наростання титру аглютинінів говорить про наявність інфекції.
Для виявлення бактеріоносіїв реконвалесцентов використовують реакцію пасивної Vi-гемаглютинації, за допомогою якої визначають Vi-антитіла в сироватці крові. В якості антигену використовують еритроцитарний Vi-діагностикум, який представляє собою суспензію еритроцитів людини I (0) групи, оброблених формаліном і сенсибілізованих Vi-антигеном черевнотифозних бактерій.
З пальця беруть 1 мл крові. Перед постановкою реакції досліджувані сироватки нагрівають при температурі 56 ° 30 хвилин для руйнування групових агглютінінов.
Схема реакції пасивної гемаглютинації
В термостаті при температурі 37 ° С на 2 години.
Примітка. титр гемаглютиніну в сироватці 1:80.
Реакцію ставлять в агглютінаціонние пробірках або в полістиролових пластинах з лунками. Сироватку розводять від 1:10 до 1: 160 - 1: 320. Еритроцитарний диагностикум необхідно ретельно збовтати і додавати в кожну лунку по 0,5 мл. Пробірки і півмісяці поміщають в термостат на півтори-дві години при температурі 37 °. Облік реакції проводять не раніше моменту осадження еритроцитів в контрольних пробірках (через 2 години) і вдруге через 24 години стояння при кімнатній температурі.
Постановка реакції з адсорбированной монорецепторними Vi-сироваткою. Реакція повинна бути позитивною до граничного титру сироватки, зазначеного на етикетці ампули.
Постановка реакції з О-сироваткою і фізіологічним розчином. Результати повинні бути негативними.
Позитивна реакція гемаглютинації характеризується осадом еритроцитів на дні ямочки або пробірки у вигляді «парасольки» з зазубреними кінцями. При негативній реакції, як і в контролях, еритроцити осідають компактно і осад має вигляд диска з рівними краями і гладкою поверхнею ( «гудзика») (табл.6). Діагностичне значення має титр пасивної Vi-гемаглютинації з 1:40 і вище.
Питання для самоконтролю
На якому тижні захворювання на черевний тиф ставиться реакція Відаля?
Чому при серологічної діагностиці черевного тифу використовується О-і Н-антигени?
Що таке анамнестический, інфекційний, щеплення Відаль?
Вкажіть методи діагностики черевнотифозними бактеріоносійство.
Назвіть препарати, які використовуються для специфічної профілактики черевного тифу.
Програма підготовки до іспитів по медичній мікробіології і вірусології.
Л. Пастер основоположник мікробіології як науки. Вплив робіт Пастера на розвиток медичної мікробіології
Методичні вказівки до лабораторних занять з загальної мікробіології.
Лабораторні заняття з мікробіології, вірусології та імунології починаються з ознайомлення студентів з організацією мікробіоло-логічної.
Природжений токсоплазмоз і його попередження (на допомогу лектору)
Доцент кафедри мікробіології, імунології та вірусології ДДМА Саїдов М. С. доцент кафедри ОМЗ і озд ДДПУ Рабаданова П. М. асистент.
Російської Федерації
Шевченко А. А. доктор ветеринарних наук, професор, завідувач кафедри мікробіології, епізоотології і вірусології Кубанського державного.
Особливості перебігу і терапії мікробної екземи у жителів Архангельської області
Робота виконана на кафедрах шкірних і венеричних хвороб і мікробіології вірусології та імунології гоу впо