Приготування фіксованих препаратів
з культур мікробних клітин
Для виявлення морфологічних і структурних особливостей, кількісного і видового обліку мікроорганізмів, перевірки чистоти культури і ряду інших цілей готують фіксовані пофарбовані препарати, які можуть зберігатися тривалий час.
Приготування фіксованих забарвлених препаратів включає кілька етапів: приготування мазка, висушування, фіксація і фарбування.
На знежирене предметне скло наносять маленьку краплю стерильної водопровідної води або стерильного фізіологічного розчину і бактеріологічною петлею переносять в неї невелика кількість досліджуваного матеріалу. Отриману суспензію рівномірно розмазують тонким шаром на площі 1 - 2 см петлею. Мазок повинен бути тонким, щоб клітини в ньому розташовувалися в один шар і він висихав на повітрі відразу ж після приготування. Мазок слід готувати легкими обертальними рухами, не докладаючи зусиль, щоб не порушити природного розташування клітин і не пошкодити їх (не обірвалася джгутики, не порвати ланцюжка стрептобацилл, стрептококів і ін.).
Після висихання мікропрепарату (на повітрі або при легкому підігріванні) мазок обов'язково повинен бути підданий фіксації.
Фіксація препарату переслідує кілька цілей: вбити мікроорганізми, тобто зробити безпечним подальше поводження з ними, забезпечити краще прилипання клітин до скла, зробити мазок більш сприйнятливим до фарбування (убиті клітини фарбуються краще, ніж живі). Найпоширенішим способом фіксації є термічна обробка. Для цього препарат тричі проводять через найбільш гарячу частину полум'я пальника, тримаючи предметне скло мазком догори. Не слід перегрівати мазок, так як при цьому можуть відбутися грубі зміни клітинних структур, а іноді і зовнішнього вигляду клітин (зморщування і ін.).
Для дослідження тонкої будови клітини, вдаються до фіксації хімічними речовинами. В цьому випадку фіксуючу рідину або наливають на мазок, або препарат на певний час поміщають в посудину з фіксатором. Найчастіше в якості рідких фіксаторів використовують етиловий спирт (час фіксації 12 - 20 хвилин), метиловий спирт (час фіксації 3 - 5 хвилин), суміш Нікіфорова (суміш 1: 1 етилового спирту і ефіру, час фіксації 15 - 20 хвилин). Існують і інші фіксатори.
Після закінчення фіксації препарат відмивають від фіксатора, обережно обливаючи його проточною водою.