1. Вивчення мазка хворого лепри, пофарбованого за Цілем-Нільсеном (замалювати)
У мазку, приготовленому з зіскрібка слизової носа і пофарбованому за методом Циля-Нільсена, видно у великій кількості палички прокази, пофарбовані в малиново-червоний колір у вигляді характерних утворень: куль, "зв'язок сигар", розташованих внутрішньоклітинно. Клітинні елементи пофарбовані в синій колір, ядро клітини відтиснуто до периферії.
2. Вивчення схеми діагностики лепри (замалювати)
Збудник лепри викликає у людини первинно хронічне гранулематозное захворювання - проказу. Паличка прокази володіє цітохромоксідазной, фосфатазной і фенолоксідазной активністю. Багаторазові спроби виділити чисту культуру на штучних поживних середовищах виявилися безуспішними. Розмноження паличок лепри можна спостерігати при зараженні мишей в подушечку лапки або девятіпоясний броненосців.
Методи мікробіологічної діагностики
- лепроміновая проба
Бактеріоскопічний. При підозрі на лепру основним методом лабораторного дослідження є бактериоскопический. Матеріалом для дослідження служать: зішкріб слизової оболонки носа, скаріфікатов ураженої ділянки шкіри, пунктат лімфатичних вузлів. Зішкріб зі слизової оболонки носа проводять обережно стерильною паличкою або зондом до появи сукровиця. мазки
роблять на декількох стеклах. Для взяття скаріфікатов, шкіру на підозрілому ділянці обробляють настоянкою йоду, стерильним скальпелем роблять невеликий розріз шкіри. З усією поверхні розрізу, особливо в глибині, виробляють легкий зішкріб, що виділяється тканинну рідину наносять на чисті предметні скельця. Пунктат лімфатичних вузлів (зазвичай пахового і стегнового) беруть асептично і готують тонкі мазки на чистих стеклах. Після висушування на повітрі мазки фіксують у полум'ї пальника, після чого фарбують за методом Циля-Нільсена.
Мікобактерії лепри фарбуються в яскраво-малиновий колір, клітинні елементи - в синій. У лепрозних ураженнях є характерні "лепрозні" клітини овальні або круглі, наповнені кислотостійкими мікобактеріями, характерно розташованими у вигляді скупчень. Ядро клітини відтиснуто до периферії. Великі, сильно роздуті клітини з бактеріями звуться лепрозних куль. Лепрозні мікобактерії потрібно диференціювати з мікобактеріями туберкульозу. Мікобактерії лепри легше фарбуються фуксином і легше знебарвлюються кислотою. Позитивні знахідки підкріплюють клінічний діагноз. Негативний результат мікроскопії не може служити критерієм для виключення діагнозу лепри. У таких випадках роблять біопсію підозрілих ділянок і проводять гістологічне дослідження препаратів.
Біопроба. Біопробу на білих мишах застосовують для накопичення мікобактерій лепри. Для цього гомогенізований матеріалом заражають білих мишей в подушечку задньої лапки. Попередньо миші отримують імунодепресанти. В позитивних випадках на місці введення через кілька місяців розвивається інфільтрат, що містить гранульоми, в яких міститься невелика кількість внутрішньоклітинно лежать бактерій лепри. Більша кількість клітин отримують при зараженні матеріалом девятіпоясний броненосців, у яких виникає генерализуется-ванна інфекція.
Алергодіагностика. Лепроминовая проба. Внутрішньошкірної проби з лепромін застосовують для диференціації клінічних форм лепри. Лепромін є гомогенат шкірних поразок при лепроматозной формі, оброблений в автоклаві. Його вводять під шкіру в обсязі 0,1 мл. Через 48 годин на місці введення може з'явитися пляма або папула (позитивна реакція Фернандеса), а через 2-4 тижні - горбок, нерідко з некрозом (реакція Міцуда), що вказує на сприятливий прогноз і характерний для туберкулоидной форми прокази, а також для здорових людей. Негативна проба з лепромін характерна для хворих з лепроматозной формою.