Одним з кращих, але в той же час найбільш трудомістким є метод діагностики хламідій шляхом ізоляції збудника на культурі клітин, оброблених різними антиметаболитами ( "золотий стандарт"). Для цієї мети зазвичай використовують чутливу культуру клітин, оброблену циклогексимідом. Чутливість культурального методу в порівнянні з ПЛР становить 70-80%, але в той же час він перевершує молекулярно-біологічні методи діагностики по специфічності. У літературі описані випадки виявлення хламідії трахоматис методом ПЛР при негативних результатах культурального тесту і навпаки.
- Вагітність з обтяженим акушерським анамнезом.
- Оцінка ефективності проведеного антибактеріального лікування.
- Виявлення чутливості та резистентності до антибактеріальних препаратів.
- Виявлення хламідій у ВІЛ-інфікованих або осіб з вторинними імунодефіцитними станами (онкологічні хворі після проведених курсів променевої та хіміотерапії, трансплантації кісткового мозку; особи, які отримують імунодепресанти; хворі на вірусний гепатит і туберкульоз).
- Безпліддя неясного генезу.
- Встановлення етіології хронічного інфекційного процесу урогенітального тракту.
Культуральні посів є референс-методом при оцінці ефективності антибактеріального лікування. При дослідженні біопроб методом ПЛР після курсу хіміотерапії в деяких випадках можна отримати "хибнопозитивні з клінічної точки зору" результати. Це пов'язано з тим, що неможливо однозначно оцінити життєздатність і патогенність мікробної клітини на підставі виявлення фрагмента її генома, використовуючи тільки дані молекулярно-біологічних методів. В цьому випадку при дослідженні клінічного матеріалу за допомогою культурального посіву мікробні клітини, що втратили ці важливі з клінічної точки зору властивості, не дадуть зростання в клітинній культурі.
Для транспортування і зберігання клінічного матеріалу використовують спеціальні ПС (транспортна середа). Вона розливається в Пеніцилінові флакони по 1 мл і зберігається при температурі + 4 0 C (в загальній камері побутового холодильника) протягом 2-х місяців. Склад транспортного середовища: середа МЕМ з додаванням 10% сироватки великої рогатої худоби і антибіотика гентаміцину концентрації 50 мкг / мл.
Клінічний матеріал після перенесення в транспортну середу зберігається в загальній камері холодильника при температурі + 4 0 С і, протягом двох діб повинен бути доставлений в лабораторію.
процедура посіву- Обробка одноденної клітинної культури McCoy 1% розчином ДЕАЕ декстраном протягом 30 хвилин.
- Зараження оброблених клітин матеріалом, отриманим від хворих.
- Центрифугування заражених клітин при 2500 g протягом 45 хвилин.
- Відмивання клітин живильним середовищем.
- Додавання до клітин ростової середовища, одержали циклогексимид.
- Інкубування клітин протягом двох діб при +36 0 C.
- Виявлення хламідій в клітинах методом прямої імунофлюоресценції або ПЛР.
Реальний термін отримання результатів цим методом - сім днів.
В даний час в літературі зростає кількість повідомлень про випадки резистентності хламідій до антибактеріальних препаратів (еритроміцину, тетрацикліну, доксицикліну, фторхинолонам). Цінність культурального методу полягає в тому, що він є поки єдиним методом, що дозволяє вибрати антибактеріальний препарат для лікування хламідійної інфекції і оцінити ефективність антибактеріальної терапії.
Схема методу виявлення стійкості Chlamydia trachomatis до антибактеріальних препаратів- Хламідійним изолятом, виділеним від хворого при посіві заражають чутливі клітини.
- До зараженим клітинам додають ростові середу, що містить антибіотик.
- Заражені клітини інкубують 5 днів при температурі + 36 0 C.
Чутливість хламідій до антибіотика визначається з придушення інфекції в заражених клітинах. Процедура тривала, займає за часом два тижні.