Експрес-діагностика чуми

Експрес-діагностика чуми. Збудник чуми був відкритий в 1894 році в Гонконгу А.Іерсеном і в його честь був названий Yersinia pestis.

До роду иерсиний відносяться також Y. pseudotuberculosis і Y. enterocolitica, що викликають септичні гастроентероколіти або ієрсиніози. Чума особливо небезпечна, дуже важка кров'яна інфекція, схильна до широкого поширення і дає високий відсоток смертності від 20 до 100. Це зоонозних трансмісивна природно-осередкова інфекція. Джерела - пацюки, ховрахи, піщанки, полівки, бабаки, мишоподібні гризуни.

Переносники - кровоссальні комахи. У складі бактерій чуми міститься понад півтора десятка специфічних і групових антигенів. Після хвороби виникає довічний, стійкий імунітет фагоцитарного характеру. Матеріал для дослідження вміст бубонної, відокремлюване виразок, харкотиння, кров, випорожнення. Метод паперових індикаторних систем. Класичні методи посів на середовища Гіссен громіздкі, вимагають багато часу і великої кількості поживних середовищ, що мають обмежений термін придатності.

В даний час ці методи не задовольняють запитам протичумної системи. В даний час найбільш перспективним методом визначення ферментативної активності штамів збудника чуми з метою ідентифікації виділених культур і вивчення їх властивостей можна вважати метод вуглеводно-паперових дисків, запропонований В.М.Нікітіним і С.В.Плугару. Як середовище краще використовувати бульйон Хоттингера, тому що він дає найбільш швидку ферментацію 3 години. Доцільно застосовувати БІС в польових умовах, так як набори компактні і можуть тривалий час зберігатися при кімнатній температурі.

Фаготіпірованіе. 1. Внесення бактеріофага в досліджуваний матеріал у момент його посіву на агар з генціанвіолетом дозволяє виявити під мікроскопом негативні колонії фага або доріжку в перші години, коли зростання бактерій ще майже не помітний через 2,5 3 години. Метод простий, доступний і дає хороші результати при високій концентрації чумного мікроба і при відносно великій зміст сторонніх мікроорганізмів. 2. Визначення наростання титру чумного фага, внесеного в досліджуваний матеріал, де в разі наявності збудника фаг починає розмножуватися вже через 30-40 хвилин.

У рідкий досліджуваний матеріал 25-50-100 мл і в контрольну рідину додають стільки фага, щоб отримати його розведення 150 1100 ставлять проби в термостатах при 370C на 45-60 хвилин. Після інкубації беруть 0,5 мл рідини з кожної проби і розводять бульйоном в 10 разів з цього першого розведення фага готують серію послідовних 10-кратних розведень до 10-10 10-11. За 0,5 мл рідини з кожного розведення досліджуваного і контрольного рядів додають до 2,5 мл напіврідкого агару 0,1, попередньо розплавленого і потім охолодженого до 48-500С. Тут же до агару додають 0,1 0,2 мл суспензії 1 2 добової індикаторної культури вакцинний штам чумного мікроба, що містить 15-20 млрд мікробів в 1 мл. Вміст пробірок ретельно перемішують і виливають на чашки Петрі з 2 агаром Хоттингера.

Після того, як напіврідкий агар застигне, чашки перевертають дном догори і ставлять в термостат при 370С. Облік результатів проводять через 3-4 години. На тлі суцільного зростання індикаторної культури видно стерильні плями негативні колонії фага, кількість яких на чашках з досліджуваним матеріалом може перевершувати в 100-1000 і більше разів число негативних колоній на контрольних чашках.

Завдяки хорошій дифузії фагів частинок і бактеріальних клітин через напіврідкий агар двошаровий метод дає стерильні плями більшого розміру, ніж при розмазування досліджуваної маси шпателем по поверхні агару.

Підрахунок колоній ведуть в лічильної камері. А також РИФ, РПГА і ін.

Схожі статті