Прижиттєві (вітальних) Фарбування МИКРООРГАНИЗМОВ
Фарбування живих мікроорганізмів дозволяє вивчити характер і ступінь їх рухливості. Застосування цих методів обмежується слабкою сприйнятливістю живих клітин до аніліновим барвників і нестійкої забарвленням препаратів. Слід також врахувати, що при таких методах окра-скі мікроби зберігають життєздатність, і препарати можуть яв-ляться інфекційним матеріалом.
Забарвлення метиленовим синім
Техніка. Чисте предметне скло змочують киплячим насиченим водним розчином метиленового синього. Коли фарба на склі висохне, його протирають сухою ганчіркою до ніжно-блакитного забарвлення. На підготовлене таким чином скло наносять краплю досліджуваної культури, покривають покрив-ним склом і проводять мікроскопію.
Мікроскопічна картина. Мікроби поступово фарбуючи-ються в блідо-блакитний колір.
Забарвлення нейтральним червоним
Приготування барвника: насичений на хо-ЛОДР водний розчин нейтральрота розводять фізіологічним розчином хлористого натрію 1: 100.
Техніка. Краплю досліджуваного матеріалу змішують на предметному склі з краплею розведеного нейтральрота. Препарат покривають по-кровним склом і проводять мікроскопію з иммерсией.
Мікроскопічна картина. Мікроби поступово фарбуючи-ються в рожевий колір.
Негативний спосіб забарвлення живих бактерій
Для забарвлення використовують туш, негрозін, конго крас-ний. Туш креслярську розводять дистильованою водою в соот-носінні 1:10. Конго червоний використовують у вигляді 3% водного розчину.
Техніка. Краплю досліджуваної культури змішують на пред-Метн склі з краплею туші, потім за допомогою іншого скла, поставленого до першого під кутом в 45, роблять тон-кий мазок за принципом приготування мазків з крові. Мазок висушують на повітрі і проводять мікроскопію нефіксованим.
При використанні розчину конго рот після висушуючи-ня мазок обробляють 1% розчином соляної кислоти в аб-солютном алкоголі, потім висушують і проводять мікроскопію.
Мікроскопічна картина: на пофарбованому тлі ясно видно незабарвлені світлі мікробні клітини.
Забарвлення фіксованих препаратів мікроорганізмів
У мікробіологічної роботі найбільш споживані способи забарвлення фіксованих мікроскопічних препаратів, кото-які в основному можна розділити на дві групи: оріентіровоч-ні, або прості, і диференціальні, що виявляють хімічні і структурні особливості того чи іншого виду мікроорганізму.
Прості методи забарвлення бактерій
Прості методи забарвлення препаратів припускають використання одного анілінового барвника і дозволяють вивчити такі морфологічні ознаки мікроорганізму, як форму, розміри, розташування в мазку. Для цих цілей використовується ряд барвників: метил-вий синій, фуксин та ін.
Забарвлення спиртово-водним розчином метиленового синього
Приготування розчину: барвника 1 г, 95% спирту 10 мл, дистильованої води 100 мл.
Техніка. Нанести на фіксований мазок на 3-5 хвилин.
Мікроскопічна картина. Всі клітини фарбуються в синій колір.
Забарвлення водним розчином метиленового синього
Приготування розчину: барвника 1 г, дистильованої води 1000 мол.
Техніка. Нанести на фіксований мазок на 5-10 хвилин.
Мікроскопічна картина. Забарвлення дає ніжні виразні препа-рати клітин, забарвлених в синій колір.
Забарвлення лужним метиленовим синім (синім Леф-флеру)
Приготування лужного розчину метиленового синього: дистильованої води 100 мл, 10% розчину їдкого калію 2 краплі, насиченого (7%) розчину метиленового синього 30 мл або 2) метиленового синього 3 г, 95% спирту 20 мл, 1% розчину їдкого калію 1 мл , дистилят-рова води 100 мл. Це стійкий і добре фарбувальний розчин.
Техніка. Нанести на фіксований мазок на 3-10 хвилин.
Мікроскопічна картина. Дає забарвлення в синій колір різної інтенсивності для різних видів мікроорганізмів і тканинних елементів (рис.13).