ЗНЕВОДНЕННЯ МАТЕРІАЛУ
Після фіксації, для якої застосовувався формалін, шматочки промивають протягом 6,12 або 24 год в проточній воді: на водопровідний кран надягають гумову трубку, кінець якої опускають в широкогорлую банку, закриту марлею. Для промивання зручно використовувати ексикатори різних розмірів, забезпечені краном: в отвір кришки ексикатора опускають шланг, по кото-рому подають воду, а через кран ексикатора її зливають.
У тому випадку, якщо до складу фіксатора входила пікринова кислота, матеріал слід промити в декількох змінах 70% спирту, після фіксації з використанням сулеми -в йодована 70% спирті. Матеріал, фіксований для деяких гістохімічних реакцій, електронно-мікроскопічного та імуноцитохімічного досліджень, відмивають від фіксаторів в різних буферних сумішах.
У разі необхідності шматочки тканин перед зневодненням можна зменшити, підрівняти. Якщо матеріал після фіксації не відразу підлягає проведенню, то його можна залишити в 70-80% спирті.
СПОСОБИ зневоднення тканин
Перед заливанням матеріалу в парафін пли целлоидин його необхідно збезводнити. Існує кілька традиційних способів зневоднення. Найпоширенішим є зневоднення в спиртах висхідної концентрації, починаючи з 70%. Зазвичай застосовують батарею спиртів, що складається з двох порцій 96% і двох - 100% спирту. Тривалість процесу зневоднення в спиртах в середньому 48 год в залежності від якості матеріалу (вмісту жиру в тканини) і розміру шматочків, а також від їх кількості. При використанні автомата для заливки кількість спиртів збільшують, а при проведенні шматочків по спиртової батареї вручну їх обережно промокають фільтрувальної папером або серветкою з марлі, що дозволяє рідше міняти спирти в батареї.
Процес зневоднення можна прискорити, періодично струшуючи шматочки в банках зі спиртами або помістивши їх в термостат при 37 ° С. Спирти в батареї необхідно своєчасно замінювати. Контролювати придатність спирту дозволяє проба з водою. У відлита з банки невелику кількість спирту додають 1 краплю води. Помутніння розчину свідчить про необхідність заміни спирту в батареї.
Абсолютний спирт можна приготувати з 96%. Для цього застосовують сульфат міді, ко
торий поміщають в ступку і прожарюють на спиртівці або в термостаті, періодично розтираючи і розмішуючи до консистенції пилу і блідо-блакитного кольору. Потім сульфат міді (1 частина) засипають в банку з 96% спиртом (4 або 6 частин), щільно закривають її кришкою, збовтують і залишаючи-ють на кілька днів, періодично струшуючи. Сульфат міді адсорбує воду зі спирту і знову набуває синього забарвлення. Перед використанням абсолютного спирту проводять його контроль спиртометром або в пробірку з невеликою кількістю ксилолу (4-5 мл) додають краплю приготованого спирту (розчин мутніє, якщо спирт недостатньо зневоднений). Хорошим адсор-бенту води зі спирту є також силікагель після предва-рительного просушування його в термостаті.
При відсутності 100% спирту в батарею включають ще одну порцію 96% спирту. Однак в цьому випадку завжди є небез-ність недостатнього зневоднення і виникнення труднос-тей при отриманні зрізів.
З метою прискорення зневоднення застосовують ацетон без домішок (ЧДА), попередньо додавши в нього силікагель для видалення залишків води або дистильований ацетон. Зневоднення проводять в 2-3 змінах ацетону від декількох годин до 1 доби в залежності від величини об'єктів. Зневоднення тканин можливо за допомогою 99% ізопропілового спирту, який безпосередньо змішується з пара-фином без проміжних розчинників (ксилол, хлороформ та ін.). Таким же властивістю володіє діоксан, проте в зв'язку з високою токсичністю він не знайшов широкого застосування в патогістологічної техніці
Для зневоднення гліцерином [Беккер Г.М. 1958; Wolf J. 1939 и др.] Шматочки тканини послідовно поміщають в 60%, 80% і 100% гліцерин на 3-4 ч, а потім в суміш, що складається з рівних частин 100% гліцерину і ксилолу.
Виражений вплив на швидкість зневоднення надає мікрохвильове випромінювання. Об'єкти в 70% спирті поміщають на 20 з в мікрохвильову піч (2,5 Гц / 500 В), а потім дообезвожівают в абсолютному спирті протягом 30-60 хв.
Секційний і біопснйний матеріал часто зневоднюють в апаратах типу АТ-5 та ін. З наступним просоченням толу-олом, хлороформом або їх сумішшю з парафіном. При цьому при-міняють дві порції 96% спирту і дві - 100%. Загальна продол-жительность зневоднення 48 ч. Перевага використання апаратів полягає в тому, що в них матеріал постійно переме-Шива і знаходиться в підвішеному стані. Однак апарат не включається автоматично після раптового перепаду на-напруги в електричній мережі, що може привести до Перес-Шивані великої кількості матеріалу.