Мета заняття. Дати загальне уявлення про патологічної фізіології, її значення в підготовці ветеринарного лікаря. Навчити основним принципам підготовки піддослідних тварин до експерименту, елементам ведення досвіду та обробці отриманих даних.
Завдання 1. Відпрацювати методику введення різних препаратів піддослідним тваринам.
Оснащення. шприци з голками; клітини для кроликів; верстати для собак; клітини для щурів; клітини для мишей; вигнуті ножиці; зонди стравоходу для кролика; посудину Дьюара на 200 мл; 0,65% -ний розчин натрію хлориду (300 мл); 0,9% -ний розчин натрію хлориду (500 мл); 70% -ний розчин етилового спирту (100 мл); піддослідні тварини: жаби, пацюки, миші, кролики, кури, собаки.
Постановка досвіду: Лягушке підшкірно ін'еціруют рідина в спинний лімфатичний мішок. Для цього жабу до голови обмотують марлевою серветкою, беруть її в ліву руку, в правій тримають шприц, і, працюючи голку під шкіру голови жаби в каудальному напрямку, вводять 0,5 мл ізотонічного розчину натрію хлориду.
Кролику для моделювання патологічних процесів ін'єктують різні розчини в крайову вену вуха. Вистригають шерсть з зовнішньої поверхні вуха над кровоносною судиною. Ваткою, змоченою 70% -ним розчином етилового спирту, протирають шкіру. Знаходять вену і притискають її двома пальцями нижче місця ін'єкції. Відень набухає, збільшується в розмірі, стає рельєфною, добре помітною. Шприц з 1 мл фізіологічного розчину тримають в правій руці (рис. 1), попередньо видаливши всі бульбашки повітря. Коротку тонку голку тримають зрізом вгору, нахиляють до поверхні шкіри і уривчастим рухом проколюють її поруч з веною. Ставлять голку полого і, користуючись рухливістю шкіри, направляють її вістря в посудину, обережно проколюючи його передню стінку (НЕ проколюючи задньої). Якщо голка потрапила в велику вену, то при слабкому зволіканні поршня в вміст шприца вливається цівка крові. Припиняють стискати вену і, повільно просуваючи поршень шприца, вводять розчин в посудину.
Рис.1. Ін'єкція в крайову вену вуха кролика
Підшкірно препарати ін'єктують мишам в області спини, кроликам в область лопатки, внутрішньом'язово - в м'язи стегна.
Для примусового введення рідини в шлунок кролику надходять у такий спосіб (рис. 2). З м'якої гуми вирізують зевник такого розміру, щоб він міг поміститися між корінними зубами. У центрі його роблять отвір, до кінців прикріплюють тасьми (2). Зевник вставляють в рот, тасьми зав'язують за вухами. Зевник можна також виготовити з дерев'яною котушки для ниток. В отвір зевник вводять гумовий зонд (1), злегка змащений вазеліном. Для заливки тварині певної кількості рідини заданої температури використовують судину Дьюара (4) і гумові кулі від пульверизатора. В горло посудини вставляють пробку, через яку проходять дві скляні трубки. Одна з'єднана з зондом через перехідний кран (3), а інша з гумовими кулями (5). Поряд з посудиною Дьюара, в залежності від обсягу вливаємо рідини можна використовувати шприц Жене або звичайний шприц, наконечник якого з'єднують з зондом.
Рис.2. Схема введення рідини кролику через стравохідний зонд:
1 - гумовий стравохідний зонд; 2 - гумовий зевник; 3 - перехідний кран; 4 - посудина Дьюара; 5 - гумові кулі для нагнітання повітря
У посудину наливають воду (50 мл), підігріту до температури 40 ° С, підвищують тиск, відкривають перехідний кран, і рідина швидко переміщається з резервуара в шлунок кролика.
В товстий кишечник препарати вводять ректально. Наконечник спринцівки, змащений вазеліном, вставляють в пряму кишку і вливають 20-30 мл теплої рідини.
Собаці внутрішньовенні ін'єкції роблять через малу підшкірну вену стегна, на обмеженому відрізку, які перетинають ззаду і згори, вперед і вниз латеральну поверхню скакального суглоба. У місці розташування судини з шкіри зістригають волосся, її поверхню змащують 5% -ним спиртовим розчином йоду, на стегно накладають гумовий джгут. Якщо собака невелика, то центральний кінець вени один зі студентів притискає пальцями (рис. 3). Голку вколюють в розширену, набряклі вену у напрямку до серця, і після зняття джгута, переконавшись, що голка знаходиться в просвіті судини, в нього повільно вводять вміст шприца.
Білим щурам і мишам ін'єкції різних препаратів в кров здійснюють через хвостову вену. Тварина поміщають в плексигласовую клітинку; для розширення хвіст опускають на 2-3 хв в теплу (40 ° С) воду, висушують його марлевою серветкою і обтирають 70% -ним розчином етилового спирту. Притримуючи кінчик хвоста лівою рукою, в праву беруть шприц, наповнений фізіологічним розчином (рис. 4). Тонкою голкою спочатку проколюють шкіру на латеральної поверхні хвоста, а потім стінку судини. При попаданні голки в просвіт вени в шприці з'являється кров, і при русі поршня потім відчувається вільний струм рідини.
Щурам, мишам і морським свинкам роблять також підшкірні і внутрішньоочеревинні ін'єкції, для чого попередньо видаляють волосся з місця уколу і протирають його 70% -ним розчинів етилового спирту.
Місцем для внутрішньовенного введення препаратів у птахів (курей) служить подкрильцовой вена. Утримуючи птицю в руках, на внутрішній поверхні крила знаходять судину і в цьому місці вищипують кілька пір'я. Шкіру протирають дезинфікуючим розчином. Лівою рукою в області ліктьового суглоба притискають центральний кінець судини, а в периферичний, проколів шкіру, вводять ін'єкційну голку у напрямку до серця. Переконайтеся в тому, що голка в посудині, припиняють його здавлювання і, натискаючи на поршень, вводять вміст шприца в вену. Для попередження розвитку гематоми кровоносну судину в місці уколу притискають пальцями протягом 2-3 хв.
Рис.4. Ін'єкція в хвостову вену щури
Коням, великому і дрібному рогатій худобі використовуються препарати вводять в основному в яремну вену. У верхній частині середньої третини шиї по ходу яремного жолоба вистригають шерсть. Шкіру змащують 5% -ним спиртовим розчином йоду. Нижче місця ін'єкції здавлюють вену великим пальцем лівої руки (а) або джгутом (б) (рис.5).
Рис.5. Ін'єкція в яремну вену коні:
А - перетискання судини пальцем; б - перетискання судини джгутом
Великим тваринам препарати вводять підшкірно в ті місця, де добре розвинена підшкірна клітковина, але мало нервів і великих кровоносних судин: бокова поверхня грудей, за лопатками, задня частина шиї (вище яремного жолоба), зовнішня поверхня стегна. У місці, обраному для ін'єкції, вистригають шерсть, шкіру змащують 5% -ним спиртовим розчином йоду. У стерильний або одноразовий шприц набирають потрібну рідиною. Відтягують лівою рукою шкірну складку і поздовжньо до її основи під кутом 45 ° вколюють голку, ін'єктують вміст шприца. Місце уколу знову змазують розчином йоду.
Свиням розчини препаратів вводять в кров через велику вушну вену. Перед ін'єкцією шкіру вуха протирають вологою серветкою або ватою, потім 70% -ним розчином етилового спирту. Підстава вуха здавлюють гумовим жгутиком або притискають вену пальцями. Голку вколюють у напрямку до голови (рис. 6).
Підшкірні ін'єкції роблять в області основи вушної раковини, внутрішньом'язові - в області зовнішньої поверхні стегна.
Наркотизировании і фіксація піддослідних тварин
Оснащення: шприци з голками, препарувальні голки, операційні столики для лабораторних тварин, пробкові дощечки, шпильки, 20% -ний розчин уретану (30 мл), 70% -ний розчин етилового спирту (100 мл), піддослідні тварини жаби, щура, кролики .
Постановка досвіду. Переважна кількість оперативних втручань, пов'язаних з підготовкою, а частково і з проведенням патофізіологічних експериментів, здійснюють на наркотізірованних тварин. Крім ін'еціруемих наркотичних засобів нерідко застосовують інгаляційні (вдихувані) наркотики; в цих випадках найбільш часто вживають ефір.
Котів, щурів, мишей поміщають в закриті ємності: ящик (кішок), скляний ковпак або велику воронку (рис.7), для морських свинок, щурів і мишей, куди кладуть вату, змочену ефіром для наркозу.
Рис.7. Наркотизировании миші ефіром
Для собак і кроликів готують інгаляційні маски. Про глибину наркозу судять по поведінці тварин.
Для наркозу жаб частіше використовують 10% -ний розчин етилового спирту. Цих тварин можна потім знерухомити, руйнуючи, головний (спінальна жаба) або спинний мозок. Жабу щільно загортають в марлеву серветку, двома пальцями лівої руки (мізинцем і безіменним) злегка притискають витягнуті задні лапки, але сильно не здавлюють. Потім середнім і великим пальцями підпирають голову жаби з боків, а вказівним злегка нахиляють її вниз (рис. 8, а). При правильному положенні пальців добре позначається субокціпітальное отвір між потиличної кісткою і першим хребцем.
Не відпускаючи пальців лівої руки, через отвір в череп вводять препаровальной голку і, повертаючи її в різні боки, руйнують головний мозок (рис. 8, б). Для руйнування спинного мозку голку повертають на 180 і вводять в хребетний канал. До дослідів приступають через 10-15 хв.
Рис.8. Фіксація жаби (а) і руйнування головного мозку (б)
Жаб наркотизують одним із таких способів:
Зануренням на 5-8 хв в 10% -ний розчин етилового спирту;
Інгаляцією парів ефіру під скляною лійкою;
Ін'єкцією в спинний лімфатичний мішок одного з розчинів: 5% -ного розчину хлоралгідрату (1,5-2 мл), 1% -ного розчину гексеналу (0,5 мл), 10% - ного розчину уретану (1-1,5 мл ), 25% -ного розчину етанолу (2 мл).
Під час патофізіологічних експериментів нерідко потрібно обмежити рухову здатність тварин. Фіксують тварин, що знаходяться під наркозом, а також не сплять.
Жаб для візуального спостереження поміщають під скляну воронку або ковпак. Наркотизуйте або спинальну жабу зміцнюють на коркової (пінопласту) дощечці, приколюючи кінцівки шпильками (рис. 9).
Морських свинок, мишей і щурів спостерігають в тераріумах, під скляними ковпаками або воронками. Для більш жорсткої іммобілізації використовують клітки з плексигласу з дірчастими стінками. Наркотізірованних дрібних лабораторних тварин фіксують на спеціальному операційному столику (рис.10). Висувне (1) і шарнірне (2) пристрої дозволяють змінювати висоту і кут нахилу дошки столу. Чотири рухомих в пазах затиску (3) служать для прив'язування кінцівок за допомогою марлевих тесемок. Набір тримачів (4) забезпечує фіксацію голови піддослідної тварини.
Рис.9. Розміщення наркотизированной жаби під об'єктивом мікроскопа
Рис.10. Операційний столик для дрібних лабораторних тварин:
1 - висувний пристрій; 2 - шарнір; 3 - затискачі в пазах; 4 - тримач для голови
Більших лабораторних тварин (кроликів і кішок) в стані наркозу фіксують спиною вниз або вгору на спеціальних операційних столиках розміром 75 × 17 см (рис. 11). Кінцівки прив'язують марлевими бинтами; для фіксації голови використовують головодержатель.
Рис.11. Фіксація кролика на операційному столі
Кролів та котів, які перебувають без наркозу, зручно поміщати в гратчасті дерев'яні клітки (рис. 12). Довжина клітини 30 см, висота 18 см, ширина 15 см. В центрі передньої стінки зроблено овальний отвір, що дозволяє вивести голову кролика (кішки) за межі клітини. Дно має кілька поздовжніх вирізів для видалення сечі і фекальних мас, що виділяються під час досвіду, тому клітку розташовують на емальованому кюветі відповідного розміру. Верхня третина клітини являє собою кришку, що відкидається. Кролика (кішку) садять у клітку, голову тварини виводять назовні через отвір в передній стінці, клітку закривають.
Рис.12. Клітка для фіксації кролика
Собакам надягають намордник або накладають пов'язку, яка утримує щелепи в зімкнутому стані. Середину пов'язки розміщують на гребені носа, а кінці міцно зав'язують під нижньою щелепою. На потилиці пов'язують частини, що залишилися тасьми (бинта) (рис. 13).
Рис.13. Фіксація щелепи собаки
Інтактних, ненаркотізірованних собак на час досвіду в павловській верстат, надівши лямки на передні і задні лапи.
Собак, які перебувають в стані наркозу, фіксують на металевому або дерев'яному, покритому білою масляною фарбою пологом операційному столі з увігнутою кришкою і чотирма прикріпленими по краях скобами для прив'язування лямок. Такий стіл можна зробити в будь-який столярній майстерні. Собаку прив'язують до поверхні столу лямками (тасьма, бинт), якими кріплять передні і задні кінцівки. Голову кріплять спеціальним тримачем.
Вівцю і свиню на період досвіду можна помістити в Павловський верстат, але краще в дерев'яну або зварену з металевих смуг клітку, що відповідає розмірам тваринного з вхідний і вихідний дверцятами.
Наркотізірованних овець і свиней для проведення операцій або вивисекционно дослідів фіксують таким же чином, як і собак на вищеописаному операційному столі.
Коням на час проведення хвороботворних маніпуляцій (ін'єкції, взяття крові та ін.) На верхню губу накладають закрутку. Корові і бику здавлюють носову перегородку великим і вказівним пальцями. Для цього студент, що стоїть збоку від голови тварини, захоплює рукою найближчий ріг і повертає голову тварини, а іншою рукою здавлює носову перегородку. При більш тривалих і болісних процедур носову перегородку здавлюють спеціальними носовими щипцями.
При необхідності обмежень великих тварин в рухах, наприклад при дослідженні дихання або серцевої діяльності, користуються верстатами, в умовах господарств - стійлами.
Кур для іммобілізації поміщають в гратчасту металеву клітку (рис. 14). Голова, шия і хвіст птиці виведені назовні через овальні отвори в задній і передній стінках. Фекальні маси надходять в кювету.
Рис.14. Клітка для фіксації курей