Дослідженню підлягає вода:
1) централізованого водопостачання;
2) з колодязів різного типу;
3) відкритих водойм (річок, озер, морів);
4) плавальних басейнів;
Примітка. Проби хлорованої води беруть у флакони з дехлоратори (гипосульфитом).
Відбір проб води. З відкритих водойм воду беруть з допомогою спеціальних бутлів або батометрів, забезпечених грузилами. Пробу води рекомендують брати на глибині 10-15 см від поверхні (так як поверхня піддається впливу атмосферних чинників) і на відстані 1,5 м від берега (вода у самого берега може бути забруднена мікрофлорою грунту).
Для відбору проб водопровідної води використовують стерильні флакони місткістю 500 мл, закриті ватно-марлевими пробками і покриті паперовими ковпачками.
Кран попередньо обпалюють тампоном, змоченим спиртом, після чого воду спускають протягом 10-15 хв і набирають у флакони. Заповнені флакони закривають стерильними пробками.
Примітка. Досліджують 333 мл води (табл. 54).
Таблиця 54. Емпірична таблиця ГОСТ 16963-73
У розподільній мережі водопроводу відбір проб води здійснюють в залежності від кількості населення, що проживає в зоні обслуговування.
Стандартні методи дослідження регламентовані для води центрального водопостачання (ГОСТ 18963-73) і передбачають:
1. Визначення загального числа мікроорганізмів (в 1 мл досліджуваної води повинно бути не більше 100).
2. Визначення колі-індексу та колі-титру (колі-індекс 3, колі-титр 333 і вище; для Москви і Ленінграда колі-індекс не більше 2, а колі-титр більше 500).
3. Дослідження за епідеміологічними показниками на патогенну мікрофлору (патогенних мікроорганізмів не повинен бути виявлено).
Визначення загального числа бактерій
Відповідно до Держстандарту 18963-73 загальне число бактерій - це та кількість мікроорганізмів, яке міститься в 1 мл досліджуваної води, здатних протягом доби при температурі 37 ° С утворювати колонії, видимі неозброєним оком (або при збільшенні за допомогою лупи).
Перший день дослідження
При дослідженні водопровідної води засівають 2 чашки. В одну з них вносять 1 мл нерозведеної води, в іншу 1 мл води, розведеної в 10 разів (т. Е. 0,1 мл вихідної проби).
При дослідженні більш забрудненої води засівають 1 мл води, розведеної в 100 разів. Це відповідає 0,01 і 1 мл .Вода, розведеною в 1000 разів (0,001 мл) і т. Д. Для отримання таких обсягів готують послідовно десятикратні розведення, по 1 мл кожного розведення вносять в чашку і заливають тонким шаром (12-15 мл ) розтопленого і охолодженого до 45 ° С поживного агару. Для рівномірного розподілу досліджуваної води залиті агаром чашки перемішують шляхом обертання їх. Після застигання агару посіви ставлять в термостат та інкубують при температурі 37 ° С 24 год.
Другий день дослідження
Чашки з посівами виймають з термостата і підраховують число вирослих колоній. Враховують тільки ті чашки, де число колоній знаходиться в межах 30-300. Якщо колоній трохи, їх підраховують неозброєним оком або за допомогою лупи.
Якщо колоній багато, то підрахунок можна вести за допомогою спеціального приладу для рахунку мікробних колоній (рис. 54).
Мал. 54. Прилад для рахунку колоній мікроорганізмів. 1 - столик для чашки Петрі; 2 - голка з пружинним пристроєм; 3 - показник лічильника; 4 - тумблер для включення імпульсного лічильника; 5 - тумблер для включення лампи освітлення лічильника
Підрахована кількість колоній множать на розведення і дізнаються число мікробів в 1 мл досліджуваної води.
визначення БГКП
Наявність БГКП (бактерій групи кишкової палички) є показником фекального забруднення, інтенсивність якого характеризують:
Колі-індекс - кількість кишкових паличок, виявлених в 1 л води.
Коли-титр - найменшу кількість води, в якому виявляють присутність кишкової палички *.
* (Колі-титр та колі-індекс - це один показник, по-різному виражений.)
Для виявлення у воді БГКП можна користуватися двома методами: титраційна (бродильним) і методом мембранних фільтрів.
Для дослідження води використовують середу накопичення глюкозопептонную (ГПС) середу Ейкман з індикатором і бродильними трубками. Середовище готується концентрованої (в 10 разів) і нормальної концентрації - для посіву 1 мл води.
Перший день дослідження
Досліджувану воду засівають по 100 мл у 3 колби, по 10 мл у 3 пробірки (з концентрованою середовищем) і по 1 мл в 3 пробірки (з середовищем нормальної концентрації) - всього 333 мл. Посіви інкубують в термостаті при 37 ° С 24 год.
Другий день дослідження
Виймають посіви з термостата і переглядають їх.
При наявності помутніння в колбах або пробірках з них виробляють посів петлею на сектори середовища Ендо в чашках Петрі. Посіви інкубують в термостаті при 37 ° С.
Третій день дослідження
Виймають чашки з термостата. З підозрілих колоній роблять мазки. При наявності грамнегативних паличок ставлять пробу на оксидазную активність. Позитивна проба на оксидазу дає право дати негативну відповідь.
Проба на оксидазу. 1-й спосіб: із середовища Ендо знімають петлею 2-3 колонії кожного типу і наносять на поверхню фільтрувального паперу, змоченою діметілпарафенілендіаміном. Позитивна реакція характеризується посинінням штрихів, зроблених з колоній.
2-й спосіб: реактив можна нанести на ізольовану колонію на середовищі Ендо (червона колонія - синіє) (рис. 55).
Мал. 55. Визначення колі-індексу води титраційна методом
Негативна проба на оксидазу свідчить про наявність у воді БГКП. В цьому випадку обчислюють колі-індекс та колі-титр за допомогою стандартних (емпіричних) таблиць ГОСТу 16963-73 (див. Табл. 54).
Ці таблиці передбачають будь-яку можливу комбінацію обсягів посіву, з яких виділена кишкова паличка.
Метод мембранних фільтрів
Для фільтрації води можна використовувати лійку Гольдмана місткістю 700-800 мл.
Перший день дослідження
У воронку змонтованого і простерилізованого фільтрувального приладу Зейтца наливають відміряний об'єм досліджуваної води. За допомогою насоса створюють вакуум в приймальному посудині (зазвичай воду фільтрують через фільтри № 2 і 3). Після закінчення фільтрації стерильним або обпаленим у вогні пінцетом знімають фільтр і накладають його на середовище Ендо в чашці Петрі так, щоб поверхня з осілими на ній мікробами була звернена вгору (на одну чашку можна поміщати 3-4 мембранних фільтра).
Посіви інкубують в термостаті при температурі 37 ° С 18-24 ч.
Другий день дослідження
Чашки з посівами (фільтрами) виймають з термостата. Відсутність підозрілих колоній дає право дати негативну відповідь.
Обліку підлягають всі червоні і рожеві колонії з металевим блиском або без нього. З вирослих колоній роблять мазки, фарбують за Грамом (рис. 56).
Мал. 56. Визначення колі-індексу води методом мембранних фільтрів
При наявності грамнегативних паличок ставлять пробу на оксидазу. Позитивна оксидазний проба дає право дати негативну відповідь. При негативній оксидазної пробі проводять посів на напіврідку середу з глюкозою і індикатором або на середу ГПС з бродильними трубками - для виявлення ферментації вуглеводу до кислоти і газу. При наявності кислоти і газу обчислюють колі-індекс. Наприклад, на всіх фільтрах, які перебувають на середовищі Ендо, зросла 3 колонії, пропущено через фільтр було 300 мл води.
Примітка. Тітраціонний метод більш точний і може бути використаний при наявності у воді домішок. Метод мембранних фільтрів економічніше і дає можливість дати відповідь на 2-й день.
Виявлення свіжого фекального забруднення
Для визначення наявності у воді свіжих фекальних кишкових паличок виробляють посів води (3-х обсягів) на лактозопептонную середу з борною кислотою. Інкубують при 43 ° С 24 год. Наявність кислоти і газу свідчить про свіжому фекального забруднення.
За епідеміологічними показниками у воді визначають сальмонели, шигели, ентеровіруси.
Примітка. Загальноприйнятим додатковим показником фекального забруднення питної води є ентерококи. При проведенні бактеріологічного дослідження визначають все групи ентерококів, хоча санітарне значення мають переважно фекальні стрептококи, які торік є показником свіжого фекального забруднення.
1. Яка основна задача санітарної мікробіології?
2. Що таке санітарно-показові мікроорганізми?
3. Що таке колі-індекс та колі-титр?
4. Які Ви знаєте методи визначення БГКП?
Визначте загальне число мікробів в досліджуваній пробі води. Середа ГПС (Ейкман).
ГПС (Ейкман) концентрована. В 1 л води розчиняють 100 г пептона, 50 г хлориду натрію. Нагрівають суміш до кипіння, фільтрують, додають 100 г глюкози, встановлюють рН 7,4-7,6 і розливають по 10 мл у колби місткістю 250 мл, по 1 мл в 3 пробірки (концентрованої середовища) і по 1 мл в 3 пробірки зі середовищем нормальної концентрації (у всіх ємностях середу до потрібної концентрації доводять стерильною водою).
Примітка. При дослідженні особливо забруднених вод роблять великі розведення (наприклад, 10 -6. 10 -7 і т. Д.).