Поставити, врахувати і оцінити результати РА на склі з досліджуваної культурою і агглютіні-рующей адсорбированной сироваткою Shigella sonnei.
Поставити, врахувати і оцінити результати розгорнутої РА з сироваткою обстежуваного з подоз-ренієм на черевний тиф і черевно-тифозним діагностнкумом.
Врахувати і оцінити результати РНГА з сироваткою обстежуваних з підозрою на бактеріоно-сітельство збудника черевного тифу і Vi еритроцитарних діагностикумів.
Ознайомитися з біопрепаратами: діагностикуми; агглютинирующие, діагностичні сироватки.
1.Постановка, учетіоценкарезультатов реакції аглютинації (РА) на склі.
Постановка: на знежирене скло нанесіть краплю діагностичної сироватки і краплю фіз. розчину для контролю. У кожну краплю внесіть петлею добову культуру мікроорганізмів і ретельно перемішайте, щоб краплі були рівномірно каламутними.
Облік: реакція враховується протягом 5 хв. неозброєним оком або за допомогою лупи. Контроль антигена - КА - рівномірний помутніння (виключається спонтанна аглютинація). Досвід - РА - позитивна: поява пластівців, добре видимих при погойдуванні предметного скла. Досвід - РА - негативна: рідина залишається рівномірно каламутною.
Оцінка результатів: відсутність спонтанної аглютинації в КА і випадку позитивної реакції свідчить про відповідність антигенів досліджуваної культури антитіл агглютинируют сироватки та приладдя культури до відповідного роду, виду, серогрупи або серовару.
Постановка, облік і оцінка результатів розгорнутої реакції аглютинації (РА).
Постановка: проводять за наступною схемою:
Примітка: стрілкою позначений перенесення розведеної сироватки з пробірки в пробірку
Облік: інкубація РА здійснюється при 37 ° С протягом 2 год, потім при кімнатній t ° 18-20 ч. Реакцію враховують неозброєним оком до струшування пробірок, а потім при їх легкому струшуванні пальцем правої руки. У сумнівних випадках використовують aгглютіноскоп або лу-пу. Досвідчені пробірки порівнюються з контролями:
КА - рівномірне помутніння, виключається спонтанна аглютинація антигену. КС - місти-моє прозоре, відсутність спонтанної аглютинації антитіл. При таких контролях результати РА, позитивні чи негативні, будуть достовірними. Інтенсивність реакції виражається плюсами:
++++ - реакція різко позитивна, весь агглютінати на дні пробірки у вигляді парасольки, рідина над ним прозора; +++ - реакція позитивна, осад виражений, Надосадова рідина злегка каламутна; ++ - часткова аглютинація з невеликим осадом, Надосадова рідина каламутна; + - сумнівна аглютинація, рідина каламутна.
При негативній реакції - аглютинації немає, зваж залишається рівномірно каламутною і з вигляду не відрізняється від вмісту пробірки з контролем антигену. Титром РА вважають максимальне (останнє) розведення сироватки з інтенсивністю реакції не менше, ніж ++.
Оцінка результатів: для підтвердження або спростування діагнозу захворювання, напів-ченний титр РА зіставляють з діагностичним титром. Наприклад, діагностичний титр РА при черевному тифі дорівнює 1: 100 у нещеплених дітей, 1: 200 у нещеплених дорослих.
3. Облік і оцінка результатів непрямої гемаглютинації (РНГА або РПГА).
Постановка: еритроцити, попередньо навантажені (сенсибілізовані) антигеном або антитілами - ерітроцітармие діагностикуми вносять в лунки плексигласу панелі, в яких приготовлені розведення сироватки обстежуваного або екстракти антигену.
Облік: результати враховують після годинної інкубації до 37 ° С. При негативному результа-ті РНГА - еритроцити осідають у вигляді щільного диска; при позитивному - осідають у вигляді дис-ка.
Достовірність результатів підтверджується контролями інгредієнтів: КЕ - контроль несенсібізірованних еритроцитів на відсутність спонтанної аглютинації; КА - контроль сенсибілізованих еритроцитів на відсутність спонтанної аглютинації; КС - контроль сироватки обстежуваного з додаванням несенсібізірованних еритроцитів на від-присутність в ній неспецифічних факторів аглютинації.
Оцінка результатів, зіставляють титр РНГА з діагностичним титром. Наприклад, в РНГА з сальмонельозний Vi-діагностикумом дорівнює 1:40.
1.Постановка, учетіоценкарезультатов реакції аглютинації (РА) на склі.
Контроль антигена (КА): спонтанна аглютинація відсутня (помутніння)
Досвід: РА + (відзначена поява пластівців, добре видних при погойдуванні предметного скла)
Значить, антигени досліджуваної культури Shigella sonnei відповідають антитіл агглютинируют сироватки.
2. Постановка, облік і оцінка результатів розгорнутої реакції аглютинації (РА).
Отримано РА- (суспензія - рівномірно каламутна, не відрізняється від КА). Таким чином, діагноз черевного тифу можна спростувати.
3. Облік і оцінка результатів непрямої (пасивної) гемаглютинації (РНГА або РПГА).
РНГА з сироватками обстежуваних і сальмонеллезнимVi-еритроцитарних діагностикумів: