Поліамін, виділений зі сперми і сечі - пригнічує ріст грампозитивних бактерій
Важливі для захисту фізіологічні чинники: Температура тіла - багато мікробів погано ростуть при 37 ° С
Гормональний баланс (надлишкове виділення гормонів - стероїдів - різко знижує захисні функції організму)
Вік: діти до трьох років та літні люди - старше 75 років - більш схильні до інфекцій через ослаблення імунітету.
Подолавши захисні механізми бар'єрних органів, мікроорганізми стикаються зі спе-зованих факторами другого ешелону оборони - гуморальними і клітинними механізмами неспецифічного (вродженого) імунітету.
Комплемент, путнього активації, функції. Значення в противоинфекционной захисту. Методи визначень активності і показники.
Система комплементу - сукупність білків сироватки крові, пов'язаних каскадом послідовної активності при їх взаємодії з комплексом антиген-антитіло - (класичний шлях), або зі структурами полисахаридной природи (альтернативний шлях).
Класична система комплементу складається з 9 компонентів (від CI до С9) і трьох регулюючих гомеостаз системи білків (інгібітора CI естерази, інактиватора СЗБ і інактиватора С6). Третій компонент (СЗ) є центральним білком всієї системи і його кількість в сироватці становить приблизно 75% всієї маси білків комлемента.
Альтернативний шлях активації включає білки (фактори) У і Д, а також пропердіі. Для функціонування класичного шляху активації комплементу необхідні іони Ca 2+. a альтернативного Mg 2+.
Процес актіваціітомплемента протікає стадийно з утворенням ферментних комплексів, які діють на наступний компонент. При цьому з нативних молекул окремих компонентів утворюються багато біологічно активні сполуки, які відіграють важливу роль у розвитку запалення, імунної відповіді, алергії, а також в резистентності до інфекції. Для здійснення бактеріолізу або цитолізу потрібна активація компонентів комплементу від СЗ до С9 за класичним або альтернативного шляху. У ролі опсонінов виступають великі фрагменти СЗБ, С4б - адсорбируясь на поверхні клітин, вони підсилюють фагоцитарну реакцію, сприяють імунної прилипання комплексу АГ-АТ-комплемент до поверсності імунокомпетентних клітин (В-лімфоцити). Нізкомолекулярниё фрагмента -поліпептіди - СЗа, С5а сприяють вивільненню біогенних амінів (гістаміну, серотоніну) із стовбурових клітин, викликають скорочення гладкої мускулатури, підвищують судинну проникність, викликають хемотаксис нейтрофілів і моноцитів у вогнище запалення. Компоненти CI-C4 нейтралізують деякі віруси. Синтез білків комплементу здійснюється клітинами системи мононуклеарних фагоцитів, фібластов, печінкою. У людини зустрічаються генетичні дефекти по більшості компонентів комплементу. Клінічно вони проявляються у формі синдрому системного червоного вовчака, рецидивних піогенними інфекцій, набряком.
Дані про функціональну активність білків комплементу та їх концентрації дають дуже важливу інформацію про протікання захворювання, можуть бути використані для оцінки тяжкості перебігу, ефективності терапевтичних заходів, прогнозу захворювання.
МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ СИСТЕМИ КООМПЛІМЕНТА
I. Визначення загальної гемолітичної активності класичного шляху. Сироватку крові розводять фізіологічним розчином 1:10 і вносять у пробірки в обсязі від 0,05 до. 0,5 мл. Обсяг проб доводять до 1,5 мл фізіологічним розчином і вносять по 1,5 мл гемолітичної системи (суміш рівних обсягів 3% суспензій баранячих еритроцитів і гемолітичної сироватки). Пробірки інкубують при 37 ° С 45 хвилин, - охолоджують при 4 ° С для зупинки реакції і центрифугують при 1500 оборотів 4-5 хвилин. Після центрифугування визначають обсяг сироватки, що викликає лізис 50% сенсибілізованих еритроцитів (умовну гемолитическую одиницю активності комлемента - СН 50), потім розраховують кількість СН 50 на мл цільної сироватки. У здорових людей титр комлемента (СН 50 на мл) становить приблизно 40-60 СН 50.
Гемолітичну активність альтернативного шляху комлемента определятт також, але замість сенсибілізованих баранячих еритроцитів використовують несенсибілізовані кролячі еритроцити і фізіологічний розчин, що містить іони Mg, але без Са для блокування класичного шляху активації.
2.0пределеніе функціональної активності окремих компонентів. Цей метод дозволяє визначити чисельність функціонально активних молекул в I мл сироватки крові. Для цього до сенсибілізованим еритроцитів додають реагент на певний компонент комплементу (як реагент використовують або суміш компонентів комлемента, виключаючи шуканий, або сивоттку крові, позбавлену активності цього компонента. Сироватку для титрування компонентів класичного шляху розводять в 40-50-раз, а альтернативного - в 5-7 разів. Таким чином можна уста-новить дефект певних компонентів і визначити профіль комплементу при різних захворюваннях.
3. Імунохімічної визначення концентрації компонентів комплементу. Даний метод дослідження дозволяє визначити концентрацію кожного з білків комплементу, використовуючи антисироватки (антитіла) до них. Концентрація білків виражається в г \ л. Для визначення використовують .метод радіальної іммунрдіФФузіі в ar ap ^ B ^ Mjgjie ^
4 Визначення активності комплементу і його компонентів методом радіального гемолізу в агарових гелі. Гемолітичну систему змішують з розплавленим агаром в співвідношенні 1: 7 і швидко вили-ють в стерильні чашки Петрі. Після застигання в агарі проробляють лунки діаметром 4.мм- (до 15 лунок на 1-ій чашці). Лунки заповнюються випробуваними сироватками і поміщають чашки в холодильник при 4 ° С на 21 годину для дифузії білків комплементу в агар. Потім чашки поміщають в термостат на 60 хвилин для прояву зон гемолізу. Критерієм активності комплементу служить
квадрат діаметра зон гемолізу.
Фагоцитоз. Фагоцити. Стадії фагоцитозу. Механізми внутрішньоклітинної бактерицидну дію. Результати (завершений, незавершений фагоцитоз). Хемотаксинами, опсоніни, походження і роль в протиінфекційного імунітету.
Фагоцитоз - поглинання фагоцитом великих макромолекулярних комплексів, бактерій. Клітини-фагоцити нейтрофіли і моноцити / макрофаги. Фагоцитувати можуть також еозинофіли (найбільш ефективні при антітельмінтном імунітет). Процес фагоцитозу підсилюють, обволікаючі об'єкт фагоцитозу.
Опсоніни - білки, які посилюють фагоцитоз: IgG, білки гострої фази (С-реакгівний протеїн, маннансвязивающій лектин); ліпополісахарідсвязивающій протеїн, компоненти комплементу -СЗЬ, С4Ь; сурфактантної протеїни легких SP-A, SP-D.
Моноцити складають 5-10%, а нейтрофіли 60-70% лейкоцитів крові. Поступаючи в тканину моноцити формують популяцію тканинних макрофагів: купферовские клітини (або зірчасті ретикулоендотеліоцитів печінки), мікроглія ЦНС, остеокласти кісткової тканини, альвеолярні і інтерстиціальні макрофаги. Фагоцити направлено переміщуються до об'єкта фагоцитозу, реагуючи на хемоатграктанти: речовини мікробів, активовані компоненти комплемемента (С5а, СЗа) і цитокіни. Плазмалемма фагоцити охоплює бактерії або інші корпускули і власні пошкоджені клітини. Потім об'єкт фагоцитозу оточується плазмалеммой і мембранна Везикула (фагосома), занурюється в цитоплазму фагоцити. Мембрана фагосоми зливається з лизосомой, рН закісляется до 4,5; активуються ферменти лізосоми. Фагоцитований мікроб руйнується під дією ферментів лізосом, катіонних білків дефензіни, катепсина G, лізоциму і ін. Чинників. При окислювальному (дихальному) вибуху в фагоціте утворюються токсичні антимікробні форми кисню - перекис водню Н202, супероксіданіон 02-, гідроксильний радикал ОН, синглетний кисень. Крім цього антимікробну дію мають окис азоту і радикал NO-. Макрофаги виконують захисну функцію ще до взаємодії з іншими імунокомпетентними клітинами (неспецифічна резистентність). Активація макрофагів відбувається після руйнування фагоцітіруемий мікроба, його процесингу (переробки) і презентації (поданні) антигену Т-лімфоцитам. Фагоцитоз може бути завершеним, що завершується загибеллю захопленого мікроба, і незавершеним, при якому мікроби не гинуть. Прикладом незавершеного фагоцитозу є фагоцитоз гонококів, туберкульозних паличок і лейшманий.
9. Методи визначення показників фагоцитозу.
ДОСЛІДЖЕННЯ фагоцитарної КЛІТИН
Вивчення фагоцитарних клітин здійснюється декількома методами:
А. Прямим морфологічним методом. Мікроби змішуються з фагоцитами в пробірці або в організмі лабораторних тварин, через 15-120 хвилин з суміші готуються мікропрепарати на предметних стеклах, фарбуються за Романовським-Гімзою і підраховуються число фагоцити-ючий фагоцитів і число фагоцитованих мікробів. За ним проводять розрахунок наступних показників:
Фагоцитарної ПОКАЗАТЕЛЕЛЬ = 100% * (число фагоцитуючих фагоцитів / загальне число фагоцитів)
Фагоцитарне число = (число фагоцитованих мікробів / число активних фагоцитів)
ПОКАЗНИК завершення фагоцитозу =
(ФЧ (через 15хв) -ФЧ (через 120мин)) / ФЧ (через15мін) * 100%
Б. Непрямими методами
Вони засновані на визначенні функціональної активності різних стадій фагоцитарного процесу:
визначення хемотаксического індексу дозволяє встановити здатність фагоцитів до спрямованого пересуванню в сторону хемоаттрактанта -актівірованного комплементу, екстракту мікробів, казеїнату натрію і ін. Підраховується відношення кількості фагоцитів, що проникають через мікропористі фільтри в досвіді і в контролі;
атракція фагоцитуючими об'єкта до поверхні фагоцити визначається зі зміни ступеня метаболізму фагоцити, яка сумарно визначається в тесті хемілюмінесценціщбактеріцідность, фагоцитів визначається за активністю бактерицидних систем, укладених в гранулах клітин:
перекису водню - пероксидази, супероксидних іонів -супероксіддесмутази, лізоциму та ін. Переваривающая здатність фагоцитів оцінюється за активністю
лізосомальнихферментів, кислої і лужної фосфатаз, катепсина і ін.