Приготування тотальних препаратів без попередньої підготовки
Для збереження дрібних тварин (наприклад, членистоногих) і різних стадій їх розвитку з метою подальшого вивчення виготовляють постійні мікроскопічні препарати, без будь-якої особливої обробки, за схемою: зневоднення об'єкта й укладання його в канадський бальзам.
- Об'єкт фіксується 70% спиртом (якщо він вже був законсервований в водному розчині формаліну, то його з годину промивають водою і потім переносять години на 2-3 в 70% спирт). Препарат проколюють де-небудь гострої голкою, щоб дати можливість спирту проникнути через отвір в хітині всередину об'єкта.
- Препарат переносять послідовно в 85% і потім в 95% спирт, витримуючи в кожному з них, в залежності від величини об'єкта, годин по 6 (в 95% спирту можна залишити препарат на ніч).
- Препарат переносять на добу в абсолютний алкоголь для зневоднення. Для укладення в канадський бальзам препарат необхідно просочити наскрізь маслом; таке "просвітлення" проводиться гвоздиковим або кедровим маслом.
- У вузьку коротку пробірку з плоским дном наливають гвоздичної або кедрової олії на 1 см, обережно доливають зверху абсолютного спирту, так щоб обидві рідини не змішувалися один з одним. У спирт опускають зневоднені препарати, які затримуються в зоні зіткнення спирту з маслом. Пробірку залишають стояти в спокої до тих пір, поки препарати не опустяться на саме дно, що відбувається повільно у зв'язку з дифузією в прикордонній зоні. Піпеткою відсмоктують спирт і перекладають препарати на кілька годин в чисте масло в годинному склі.
- Після закінчення описаних процедур контролюють прозорість препарату. Годинний скло ставлять на чорну дошку стола. Препарат повинен бути невидимим; якщо на ньому видно білясті плями, значить зневоднення було неповне, і препарат необхідно повернути назад в абсолютний спирт.
- Якщо препарат прозорий, то його на шпателі переносять на середину предметного скла і поливають декількома краплями ксилолу з крапельниці, щоб змити масло.
- Погодившись з товщиною препарату, вирізують дві вузькі смужки білого картону або беруть шматочки сірників або обламують шматочки витягнутої скляної трубочки і кладуть їх але боків препарату так, щоб вони припали до самим краях покровлого скла.
- Не даючи препарату висохнути, наносять на нього паличкою канадський бальзам і накривають препарат начисто витертим покривним склом. Якщо бальзаму взято мало, то додають краплю його з краю покривного скла, під яке він втягується в силу капілярності.
- Поправляють голками положення зсунулись опорних смужок ( "ніжок") і залишають препарат на довгий час сохнути в горизонтальному положенні, подбавляя канадський бальзам в міру його всихання з країв.
- Такі ув'язнені в товстий шар канадського бальзаму препарати доцільніше зберігати в горизонтальному положенні, так як при довгому триманні їх на боці об'єкт опускається до нижнього краю покривного скла навіть через кілька місяців після його виготовлення.
- Внаслідок товщини препарату, його можна вивчати тільки при слабких збільшеннях мікроскопа.
- Якщо препарат в канадському бальзамі був абсолютно прозорий, а через деякий час він частково або повністю почорнів, при розгляданні в світлі мікроскопа, значить він не був достатньо проколот перед зневодненням (див. Вище § 1), з нього випарувався ксилол, а бальзам всередину не пройшов. Цінні препарати можна спробувати виправити за наступною схемою:
- розчинити бальзам ксилолом і витримати препарат в чистому ксилоле;
- перенести (обережно, препарат дуже крихкий) в 100% спирт для зневоднення;
- проколоти обережно препарат голкою; після добового перебування в 100% спирту повторюють послідовно § 4-9 цієї глави.
Якщо весь препарат втратив прозорість, то його з успіхом (і з деякою вигодою) можна розглядати при сильному падаючому світлі у світлого вікна, біля сильної лампи і т. П. У такому випадку з особливою ясністю видима поверхня препарату (волоски, лусочки, горбки і т. п.).
Стійкі, хоча і не так довго зберігаються препарати можна приготувати, укладаючи об'єкт в гліцерин-желатин. Якщо об'єкт зберігається у формаліні, то його добре промивають замінної водою (кілька годин); потім переносять в суміш гліцерину навпіл з водою для просочування. Спиртові препарати також попередньо переносять в воду. Препарат в гліцерині тримають кілька годин або добу до повного просочування.
Далі препарат кладуть на предметне скло і відсмоктують зайву рідину фільтрувальної папером. На покривне скло беруть шматочок гліцерин-желатину і нагрівають його на склі, щоб желатин розплавився. Корисно злегка нагріти (але не висушити) об'єкт на предметному склі. Потім покривне скло швидко перевертають і висить краплею желатину опускають на об'єкт так, щоб маса розтеклася між предметним і покривним склом і покрила собою об'єкт. Для міцності препарат з країв покривного скла обводять залізним лаком або рідким канадським бальзамом, щоб попередити висихання маси. Препарат зберігається довго. Його перевага - менша прозорість, ніж бальзамного, що іноді буває потрібно.
Гліцерин-желатин готують: розчинивши в 100 см 3 на водяній бані або в гарячій воді 10 г желатину в листах, до розчину додають 25 см 3 гліцерину і 0,1 г тимолу (розчинивши останній в воді) або кілька крапель карболової кислоти (проти цвілі ). Все перемішують і зливають в баночку з пробкою.
Особливо слід рекомендувати висновок цінних об'єктів (дрібні личинки комах, рачки) і їх частин в гумміарабіковую суміш. Живий або вбитий хлороформом об'єкт кладуть у вологому стані на предметне скло, наносять краплю гумміарабіковой суміші необхідної величини і накривають покривним склом з ніжками. Слід пам'ятати, що живий об'єкт може іноді виповзти з-під скла. Цей спосіб вигідний, завдяки швидкості приготування препарату, що укладається безпосередньо з води. Просвітлення помірне; у комах чудово виступає трахейна система (особливо в зябрах), але спостерігати її аж до капілярів необхідно найближчим часом по виготовленні препарату, так як з плином часу вона втрачає різку видимість в своїх дрібних частинах. Висихання гуммиарабика міцно зміцнює покривне скло; в разі потреби можна додатково зміцнити його кантом з канадського бальзаму або менделєєвської замазки. Недоліком гумміарабікових сумішей є те, що в них (на противагу канадському бальзаму) розсмоктується випадково потрапили бульбашки повітря (також і в гліцерин-желатині).
Існує кілька гумміарабікових сумішей.
Фаррантовская суміш, містить гуммиарабика 36,0 г, дестіллірованной води 350,0 см 3. гліцерину 350,0 см 3. Готувати її треба в холодній воді, перед вживанням повинна стояти кілька місяців. Суміш Букетана містить: дестіллірованной води 50,0 г, гліцерину 20,0 см 3. гуммиарабика 40,0 г, хлоралгідрату 50,0 см 3 і кокаїну 0,5 м Її готують у такий спосіб: спочатку розчиняють у воді гуміарабік, додають хлоралгідрат і кока; по розчиненні додають гліцерин; дають відстоятися: якщо потрібно, то фільтрують.
Спиртові препарати перед укладенням їх в гумміарабіковие суміші витримують спочатку в воді. Описана середовищі поміркованої просвітлює препарат, всі деталі якого виступають досить ясно.
Корисна також лактофеноловая суміш: кристалічного фенолу 1,0 г, мо-лочной кислоти 1,0 г, гліцерину 2,0 г, води 1,0 г. Препарат переноситься в цю суміш або з води або зі спирту. Однак суміш не твердне.
Розчленування свіжого, а також спиртового матеріалу можна робити в воді препаровальной голками, копьевідной і лопатоподібної. Дрібні об'єкти безпечніше, розчленовувати на тому ж предметному склі, на якому буде приготовлений постійний препарат. Необхідно тільки прибрати всі сторонні частинки і залишити тільки те, що потрібно. Всю зайву рідину прибирають фільтрувальної папером (необхідно остерігатися, щоб зі струмом води до фільтрувальної папері не пристав би самий об'єкт), поправляють голкою положення об'єкта і наносять на нього краплю гумміарабіковой суміші або укладають в гліцерин-желатин, як зазначено вище.
Схожі статті