Для індикації вірусів у інфекційному матеріалі можуть бути використані наступні методи і критерії:
Мікроскопічний: виявлення вірусних включень в препаратах, забарвлених але Муромцеву, Морозову, Романовським, Пігаревскому, Павловському, оброблені флюорохромами.
Вірусологічне виділення вірусів в культурах клітин, в курячих ембріонах, на лабораторних тварин (стан, симптоми).
У культурі тканин: реакція гемаглютинації (РГА), реакція гемадсорбції (РГадс), цитопатогенну дію (ЦПД), кольорова проба, метод бляшок.
Ідентифікація вірусів здійснюється за допомогою серологічних (імунологічних) методів:
реакція гальмування гемаглютинації (РГГА),
реакція гальмування гемадсорбції (РТГадс),
реакція зв'язування комплементу (РСК),
реакція нейтралізації цитопатогенного дії (РН),
реакція імунофлюоресценції пряма і непряма (РІФ, РНІФ),
реакція преципітації в гелі (РП),
реакція нейтралізації кольорової проби.
Культивування вірусів в курячих ембріонах
Беруть 7-11 денні курячі ембріони, перевіряють їх життєздатність на овоскопі, на ньому ж у ембріона простим олівцем обводять повітряну камеру - головний орієнтир для подальших маніпуляцій.Стерільним тампоном з йодом протирають верхню (тупу) частина яйця, потім 60 ° спиртом.
Зараження нерозкриті ембріона
А) У хоріон аллантоісную порожнину. Роблять по межі повітряної камери яйця під кутом 45 ° до його поверхні на глибині 0,3-0,5 см. Після введення вірусного матеріалу отвір заливають розплавленим парафіном, і ембріон в спеціальних лотках поміщають в термостат-інкубатор пріt ° +40; + 42С ° і вологості в 60%.
Б) У амнион і курячий зародок: Інфікують товстої тупою голкою для спінномозговихпункцій. Маніпуляцію виконують в темній кімнаті під контролем очі, обережно впираючись в ембріон.
Після зараження отвір парафінують, а інкубацію ембріона продовжують.
Зараження розкритого ембріона:
Виконують після зняття вигнутими ножицями кришки яйця над його повітряної камерою, яку знімають дуже обережно.
А) Зараження в амниотический мішок виконують після його підтягування стерильним пінцетом.
Б) Зараження в жовтковий мішок проводять також.
В) обох випадках дефект в шкаралупі яйця закривають: або поверненням знятого тупого кінця шкаралупи, або кришечкою від скляного бюкса. Їх краю для пріданіягерметічності заливають парафіном. Поміщають в термостат-інкубатор.
Контрольні спостереження ведуть за критеріями:
рухливість ембріона, як показник життєздатності;
поява на оболонках ембріона бляшок з просяне зерно з внутрішньоклітинних вірусних включень;
загальноприйнята індикація та ідентифікація вірусу (Додаток 3).
РЕПРОДУКЦІЯ ВИРУСОВ З РІЗНИХ геном