Весь період захворювання
Матеріалом дослідження при захворюваннях, що супроводжуються діареєю або ін. Розладами шлунково-кишкового тракту (гепатит А, рота- і ентеровірусні інфекції), є свіжі порції фекалій. При захворюваннях дихат. системи (грип, парагрип, аденовірусна інф.) матеріал отримують шляхом аспірації слизу, змивів, мазки з носоглотки. При наявності везикулярной висипу (герпес) матеріал для дослідження ж-ть, аспірованої голкою з везикул. При петехиальной і макуло-папульозний висипки -проби слизу з носоглотки, фекалії. При підозрі на нейровірусние інф. (Поліомієліт, арбовірусні інф.) Слід забирати слиз з носоглотки, фекалії і спинномозкову ж-ть. Для діагностики епідемічного паротиту та сказу матеріалом служить слина. При підозрі на цітомегало- і паповавірусние інф.матеріал- сеча. Виділення вірусу з кр. при підозрі на інф. викликані арбовирусами, вірусами герпесу. Біопсія мозку може бути проведена при діагностиці герпетичного енцефаліту, ПСПЕ, прогресуючого краснушного паненцефаліта, хвороби Крейтцфельдта-Якоба, лейкоспонгіоза.
Препарати слизу з носоглотки або фекалії поміщаються в середу для транспортування, що складається з фіз. р-ра з додаванням а \ б і невеликого кол-ва сироватки тварин. Матеріали зберігаються при t 4 ° С не більш 48 годин. Більш тривале зберігання вимагає температури -70 ° С.
Індикація вірусів в культурі клпроводітся по ЦПД, РИФ, РДА, РГАдс. Багато ентеровіруси викликають раннє ЦПД (через кілька годин). Цитомегаловіруси, аденовіруси, вірус краснухи викликають ЦПД через кілька тижнів, а іноді необхідно вдаватися до отримання субкультури. Присутність синцития свідчить про наявність таких вірусів, як РС, кору, епідемічного паротиту, герпесвирусов.
Ідентифікація вірусів проводиться за допомогою серологічних методів (РГГА, РН, РТГАдс, використовуються тільки при вірусних інфекціях. РСК, РПГА, ІФА, РІА, ІФ, РП використовуються для діагностики як вірусних інф. Так і інф, викликаних іншими збудниками). На схемах 2 і 3 представлена вірусологічна діагностика ГРВІ та кишкових інфекцій.
3 група - серологічна діагностика вірусних інфекцій.
У більшості випадків для серологічної діагностики потрібні парні сироватки, взяті в гострій фазі захворювання і через 2-4 тижні. Виявлення чотирикратного і більш підвищення титру антитіл прийнято розглядати в якості діагностичної ознаки гострої вірусної інфекції.
Слиз з носоглотки, оброблена антибіотиками
Зараження курячих ембріонів
загибель, специфічні ураження ХАО
Віруси Коксакі, герпесу
Зараження культур клітин
ЦПД може бути відсутнім
Аденовірусний тип ЦПД
Пікорнавірусний тип ЦПД
Герпетічес-кий тип ЦПД
РИФ, РН, РСК, МГ, ПЛР
РИФ, РН, РСК, РГГА, МГ, ПЛР
РСК, РН по кольоровий пробі, МГ, ПЛР
РИФ, РН, РГГА, РТГАдс, ПЛР
Віруси грипу, парагрипу, епідпаротиту
РС-вірус, кору, парагрипу
Віруси простого герпесу, цитомегалії
Суспензія фекалій, оброблена антибіотиками, освітлена центрифугуванням
Зараження культур клітин
Пікорнавірусний тип ЦПД
Реовирусной тип ЦПД
Аденовірусний тип ЦПД
РСК, РН по кольоровий пробі, ПЛР
РИФ, РН, РГГА, МГ, ПЛР
РГГА, РСК, РН, МГ, ПЛР
Коксакі А, В, ротавіруси
Схема 3. Виділення вірусів з фекалій, їх індикація та ідентифікація
при кишкових вірусних інфекціях
4 група - молекулярно-біологічні методи індикації, ідентифікації і клонування вірусів. Проводяться з метою виявлення вірус-специфічних фрагментів геному вірусів в матеріалі.
Молекулярно-біологічна індикація вірусів в біологічному матеріалі (дот блот, in sinu гібридизація, сендвіч гібридизація):
- Методи молекулярної гібридизації (метод мікрогенії). Проводяться з метою виявлення вірус-специфічних фрагментів геному вірусу. Хар-ся високою чутливістю і специфічністю. Використовуються для виявлення цитомегаловирусов, вірусів герпесу, вірусів гепатиту.
- Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР): проведення індикації вірусів, ідентифікації, диференціації з родинними інф.агентамі, генотипування ізолятів вірусів і клонування фрагментів їх генома.
- Вестерн-блот - заснований на виявленні циркулюючих в крові специфічних антитіл до АГ вірусу.
- Визначення інфікованих вірусом клітин методом проточної цитофлюориметрії. Використовується при ВІЛ-інфекції, інфекційному мононулеозе, гепатит С, цитомегаловірусної інфекції.