5.17. Електрофорез на папері дозволяє розділяти амінокислоти відповідно до їх електричним зарядом
Найпростішим методом поділу амінокислот служить електрофорез на папері (рис. 5-13). Краплю водного розчину, що містить суміш амінокислот, наносять на смужку фільтрувального паперу, змочену буфером з даними значенням pH. Далі до цієї смужці прикладають висока напруга, що створює сильне електричне поле. Через відмінності в величинах амінокислоти переміщаються уздовж смужки в тому чи іншому напрямку і з різними швидкостями в залежності від pH буферної системи і прикладеної напруги.
Мал. 5-13. Поділ амінокислот методом електрофорезу на папері. На смужку паперу наносять краплю розчину, що містить суміш амінокислот. Їй дають висохнути, після чого цю смужку паперу змочують буфером із заданим значенням pH і завадять між охолоджуючими пластинами. Кінці смужки занурюють в кювети з електродами і включають високу напругу. У виникає при цьому постійному електричному полі амінокислоти поділяються відповідно до їх сумарним електричним зарядом при обраному pH. Амінокислоти, які при цьому значенні pH є катіони, мігрують до катода (негативного полюса), а амінокислоти, що мають форму аніонів, переміщаються до анода (позитивного полюса), як це показано на схемі, яка зображує електрофореграмме в момент часу. В кінці процесу (на схемі в момент часу) папір висушують, обприскують нингидрином і нагрівають, в результаті чого на папері проступають плями, відповідні розташуванню різних амінокислот, які можна ідентифікувати шляхом порівняння їх положення з положенням автентичних амінокислот, які використовуються в якості «свідків».
Наприклад, при pH 1,0 гистидин, аргінін і лізин несуть заряд + 2 і рухаються до негативно зарядженого катода швидше за інших амінокислот, заряд яких дорівнює + 1. З іншого боку, при pH 6,0 позитивно заряджені амінокислоти (лізин, аргінін і гістидин ) рухаються до катода, а негативно заряджені (аспарагінова і глутамінова кислоти) - до анода. Всі інші амінокислоти або залишаються на місці їх нанесення, або переміщуються лише на незначні відстані, так як крім а-аміногрупи і а-карбоксильної групи у них немає інших іонізіруемих груп; тому ізоелектричної точки всіх цих амінокислот практично не розрізняються. Про це свідчать величини наведені в табл. 5-4. Щоб встановити становище розділених амінокислот на електрофореграмме, смужку паперу висушують, обприскують нингидрином (див. Нижче) і нагрівають. Сині або лілові плями, що проступають на папері, вказують на присутність тієї чи іншої амінокислоти. При тих же умовах проводять електрофорез відомих зразків амінокислот, які служать «маркерами», що дозволяють визначити характерне для кожної амінокислоти положення на електрофореграмме (див. Рис. 5-13).