Діагностика ящуру заснована на епізоотологічних даних, клінічних ознак хвороби, патологічних змінах і лабораторних дослідженнях. Підозра на ящур викликає будь-яке захворювання сприйнятливих тварин, що характеризується появою везикулярной висипу в ротовій порожнині, на кінцівках і вимені, підвищеної саливацией, чмоканням, утрудненим прийомом і пережовування корму, а при огляді ротової порожнини - виявленням афт і ерозій. Крім того, звертають увагу на тривалу кульгавість, афти на віночку і в області межкопитной щілини, іноді спадання рогового башмака, афти на сосках і болючість останніх при доїнні і ссанні з сильно вираженим захисним рефлексом.
Епізоотологічний діагноз - висока контагіозність, вибіркове ураження тільки парнокопитних. Методи лабораторної діагностики ящуру варіюють в залежності від того, чи потрібні раннє виявлення і типова (варіантна) ідентифікація вірусу (рання діагностика) або виявлення та ідентифікація специфічних протівоящурних АТ у тварин-реконвалесцентів (ретроспективна діагностика).
Виділення вірусу. Ефективність виділення вірусу з патологічного матеріалу підвищується при використанні методів очищення і концентрування віруссодержащего суспензій. Завдяки зручності виконання, економічності, а головне, можливості швидкого отримання результатів, що дозволяють одночасно визначити типову і вариантную приналежність епізоотичного вірусу, найчастіше застосовують РСК або РДСК. Однак, коли доставлене кількість вірусного матеріалу недостатньо для дослідження або РСК дає негативний результат або неспецифічну затримку гемолізу, то ставлять биопробу на ВРХ (не менше 2 голів) у віці 18 міс, введення 0,1 мл суспензії отриманого матеріалу в кілька точок слизової оболонки мови і мякишей кінцівок; загальний обсяг випробуваного матеріалу 2-3 мл. Поява афт на місці введення матеріалу з подальшим підтвердженням у РСК свідчить про наявність ВЯ. Однак метод доріг і пов'язаний з небезпекою виносу вірусу за межі установи. Тому в діагностичній практиці він застосовується дуже рідко. Найчастіше для біопроби використовують мишенят-шмаркачів 4-6-дн віку, морських свинок масою не менше 500 г і первинну культуру клітин нирок телят, поросят, ягнят, щитовидної залози великої рогатої худоби та перещеплюваних клітини - ВНК-21, ІВ-RS-2. Біопроба на мишах зручна і економічна. ІД5о випробуваного штаму на мишенята-сосунов і великій рогатій худобі однакові. Мишенята-сосуни більш чутливі до вірусу ящуру, ніж морські свинки. Однак необхідно мати на увазі, що оцінка результатів титрування на мишенята-сосунки нерідко скрутна.
Морські свинки легко заражаються при інтрадермальном введенні віруссодержащего матеріалу в плантарную поверхню задніх лапок методом тунелювання в дозі 0,2-0,5 мл. Заражають не менше 5 голів. Первинні ураження зазвичай з'являються через 2-5 дн (у міру дозрівання). Вторинні ураження - везикули в ротовій порожнині - зазвичай розвиваються при зараженні штамами, адаптованими до морським свинкам.
Для виділення вірусу найчастіше використовують культуру первинно-трипсінізірована клітин нирок свиней або телят. Спостереження за інфікованими культурами клітин ведуть 7 дн, мікроскопіруя їх щодня. Специфічна дегенерація клітин при підтвердженні її специфічності в РСК свідчить про наявність ВЯ в випробуваному матеріалі.
Індикація та ідентифікація вірусу. Як експрес-методу в даний час широко застосовується ПЛР. Це швидкий і чутливий метод виявлення ВЯ в тканинах шляхом ферментної ампліфікації РНК гена полімерази.
РСК по 100% -ному гемолизу. Застосовується для визначення типів і підтипів (варіантів) ВЯ, що викликали захворювання тварин, а також для перевірки виробничих штамів ВЯ при виготовленні вакцин і лабораторних штамів в науково дослідній роботі. Антигенну спорідненість (К) більше 70% свідчить про те, що штами за антигенними властивостями ндентічни один одному і відносяться до одного і того ж варіанту, від 10 до 70% - до різних варіантів (підтипів) і менше 10% - до різних типів.
РСК по 50% -ному гемолизу. Успішно застосовують в роботі науково-дослідних лабораторій та установ біологічної промисловості. Розроблено спосіб вивчення імунного статусу вакцинованих проти ящуру тварин в РСК. Він дозволяє фахівцям на рівні обласних ветлабораторій проводити моніторинг за імунним станом стад в простий і достовірної реакції.
РПГА. Це простий, прискорений, чутливий метод ідентифікації ВЯ. За чутливості реакція перевершує загальноприйнятий метод типування ВЯ в РСК в 8-16 разів Суть її полягає в тому, що навантажені АТ еритроцити агглютинируются при контакті з ящурного АГ гомологичного типу.
Серодиагностика і ретроспективна діагностика
Ретроспективна діагностика з метою визначення типу і варіанта ВЯ, що викликав в минулому захворювання тварин, заснована на ідентифікації АТ в РПСК, РДП і РРІД, НРІФ, реакції серозащіти на мишенята і РН в культурі клітин.
Для достовірного виявлення АТ і визначення їх типовий специфічності проби сироватки крові повинні бути взяті не раніше 7 дн з моменту появи у тварин ознак везикулярного захворювання або проведення вакцинації. На дослідження слід спрямовувати 5-10 проб сироватки від кожної вікової групи. На партію проб сироватки, що спрямовується для дослідження, оформляють супровідний документ.
Виявлення, ідентифікація типової специфічності і кількісне визначення АТ до ВЯ в РРІД, РПСК, РНСК і Ніф можуть проводитися в умовах звичайних ветеринарно-діагностичних лабораторій і не вимагає створення більш суворого санітарного режиму, оскільки проводяться з неінфекційними матеріалами.
Для виявлення інгібіторних (неповних) АТ застосовують РНСК (або РПСК). Ці АТ відрізняються високою авідності. Вони формують комплекс АГ-АТ, які не адсорбує комплемент. Зв'язуючись з АГ швидше повних АТ, вони блокують його, але не пов'язаний при цьому комплемент у присутності гемолітичної сироватки викликає лізис еритроцитів. Інгібіторні АТ виявлені зараз при багатьох інфекціях, в тому числі при ящуре. Дана реакція застосовується для визначення типів ВЯ по сироватка перехворілих тварин, а також для виявлення постінфекційних і поствакцинальних АТ.
Диференціальна діагностика. При диференціальної діагностики ящуру необхідно виключити ВС, ВБС, ВЕС, катаральну лихоманку овець. Для диференціальної діагностики в лабораторіях використовують діагностичні набори, що випускаються біологічної промисловістю, для ящуру і ВБС.
Іноді в матеріалі від людей, підозрюваних в захворюванні ящуром, виділяли збудника ентеровірусної інфекції людини - вірус Коксакі серотипу В. Вірус викликав видиме ЦПД в перещеплюваних культурах клітин протягом 24 год, маючи ікосаедрічеськая форму, розміром 20-30 нм і викликав загибель мишенят при інтрацеребральному зараженні.