Цитопатична ефекти оцінюють при мікроскопії клітинних культур. За ступенем ураження клітин виділяють віруси з високою або помірною Цитопатогенні. Розмножити-ня вірусів в культурах клітин супроводжується порушеннями морфології клітин моношару. Деякі віруси викликають характерні цитопатична зміни, що (з урахуванням клінічес-кой картини захворювання) дозволяє швидко поставити попередній діагноз. Наприклад, розмноження параміксовірусів (віруси кору, паротиту, PC-вірус) супроводжується появою третьому характерних гігантських багатоядерних клітин; аденовіруси викликають утворення скопле-ний великих круглих клітин, а при репродукції герпесвірусів клітини округлої форми дифузно розташовуються по всьому моношар.
Бляшкоутворення. «Бляшки» називають негативні колонії - ділянки зруйнованих клітин, що виглядають як зони просвітління на монослоях клітин, покритих шаром агару. У деяких випадках дозу і Цитопатогенні вірусу висловлюють в бляшкообразующіх єдині-цах (БОЮ).
Тельця включень. Багато віруси викликають появу в заражених клітинах характерних утворень - скупчень вірусних білків або частинок, видимих в світловий мікроскоп. Тельця включень можуть розташовуватися як в цитоплазмі (тільця Гварнері при віспі), так і в ядрах клітин (аденовіруси).
Відсутність цитопатичної ефекту. Деякі віруси (наприклад, вірус краснухи) не виявляють цитопатического ефекту. Їх можна виявляти по інтерференції іншого вірусу, здатного викликати дегенерацію заражених клітин.
Феномен гемадсорбції. Багато заражені вірусами клітини набувають здатність сорбувати на своїй поверхні різні еритроцити. Феномен гемадсорбції має загальні механізми з гемаглютинації і проявляється на ранніх термінах, до прояву цитопатичної-го ефекту, при його відсутності або слабкої вираженості.
«Кольорова реакція». У культуральне середовище, використовувану для підтримки клітин, вно-сят індикатор. Зростання клітин супроводжується накопиченням метаболітів, зрушенням рН середовища і зміною забарвлення індикатора. Зараження культур вірусом різко пригнічує клітинний ме-метаболізм, і середовище зберігає первісний колір.
Експрес-діагностика. Для швидкої ідентифікації вірусної інфекції розроблені мно-гочісленние методи експрес-діагностики, засновані на виявленні вірусних Аг. Наприклад, для раннейдіагностікі ВІЛ-інфекції широко використовують ІФА, що виявляє поверхневі Ar вірусу.
Кількісне визначення вірусів проводять двома шляхами - вивченням інфекційності і кількісним визначенням вірусних Аг. Визначення титру інфекційності вірусів в значній мірі залежить від методу кількісного дослідження; у бактеріофагів ставлення інфекційність-частка становить приблизно 1 (тобто кожна вірусна частка здатна викликати інфекцію), для вірусів тварин дане відношення складає 1:10 (іноді вище через вірусінгібірующего дії факторів резистентності).
Визначення інфекційності вірусів. Найбільш доступна форма кількісного визначення - підрахунок числа вірусних «бляшок». Прямі тести на інфекційність застосо- ють для встановлення інфекційної дози (ID) або летальної дози (LD) досліджуваного вірусу (зазвичай висловлюють в lg). ID50 - розведення, інфікується 50% клітин; LD50 - розведення, що вбиває 50% уражених клітин або тварин.
Виявлення вірусних Аг і вірусних частинок. Найбільш поширений метод - реакція кількісної гемаглютинації. Метод заснований на здатності вірусів Сорбує-тися на поверхні еритроцитів тварин і людини. Кількісну електронну мік-роскопія застосовують для підрахунку загального числа вірусних (але не інфекційних) часток в досліджуваному об'єкті (наприклад, культуральної рідини).
Вивчення морфології вірусів можливе лише за допомогою електронної мікроскопії, одна-ко найчастіше цей метод недоступний через відсутність такого дорогого і складного приладу. Більш того, багато збудники морфологічно подібні, що знижує цінність цього методу. Найбільш поширений метод мікроскопії вмісту везикул і тканинних екстрактів, об-працювати барвниками (негативний контрастування), з подальшим підрахунком ДНК-або РHK-вірусів. Електронна мікроскопія дозволяє швидко виявити орто- і параміксовіруси у виділеннях дихальних шляхів, герпесвіруси в рідині везикул і ротавіруси в фекаліях.
Серологічні методи ідентифікації
При більшості вірусних інфекцій розвиваються імунні реакції, що застосовуються для діагностики. Клітинні реакції зазвичай оцінюють в тестах цитотоксичності лімфоцитів відносно інфекційних агентів або заражених ними клітин-мішеней або визначають спо-можності лімфоцитів відповідати на різні Аг і мітогени. У роботі практичних лаборато-рій вираженість клітинних реакцій визначають рідко. Більшого поширення знайшли ме-тоди ідентифікації противірусних AT.
РН заснована на придушенні цитопатогенного ефекту після змішування вірусу зі специфічними AT. Невідомий вірус змішують з відомими комерційними антисироватки і після відповідної інкубації вносять в моношар клітин. Відсутність загибелі клітин вказує на невідповідність інфекційного агента і відомих AT.
Гальмування гемаглютинації. РГГА застосовують для ідентифікації вірусів, спосіб-них агглютинировать різні еритроцити. Для цього змішують культуральну середу, со-тримає збудник, з відомою комерційної антисироватки і вносять в культуру клітин. Після інкубації визначають здатність культури до гемаглютинації і при її відсутності роблять висновок про невідповідність вірусу антисироватки.
Гальмування цитопатичної ефекту інтерференцією вірусів. Реакцію тор-можения цитопатического ефекту за рахунок інтерференції вірусів застосовують для Ідентифіка-кации збудника, интерферирующего з відомим Цитопатогенні вірусом в культурі чув-ствительность клітин. Для цього в культуральне середовище, що містить досліджуваний вірус, вносять комерційну сироватку (наприклад, до вірусу краснухи при підозрі на неї), інкубують і заражають другу культуру; через 1-2 дня в неї вносять відомий Цитопатогенні вірус (наприклад, будь-який ЕСНО-вірус). При наявності цитопатогенного ефекту роблять висновок про те, що перша культура була заражена вірусом, що відповідав застосованим AT.
Пряма імунофлюоресценція. Серед інших тестів найбільшого поширення знайшла реакція прямої імунофлюоресценції (найбільш швидка, чутлива і відтворена) .Наприклад, ідентифікація ЦМВ по цитопатогенного ефекту вимагає не менше 2-3 тижнів, а при використанні мічених моноклональних AT ідентифікація можлива вже через 24 год. Маючи набір подібних реагентів , їх можна вносити в культури, заражені вірусом, інкубувати, відмивати не пов'язаної реагент і дослідити за допомогою люмінесцентної мікроскопії (по-зволяет виявити наявність флюоресценції заражених клет к).