Найбільш широке застосування цитохимические дослідження клітин крові знайшли при диференціюванні різних форм гострого лейкозу.
В основі цитохімічних досліджень клітин крові і пунктату кісткового мозку лежить здатність деяких речовин і ферментів вступати в реакцію з деякими барвниками, даючи специфічне забарвлення. За присутності в клітці досліджуваного речовини, ступеня активності певного ферменту дозволяють робити певні діагностичні висновки про приналежність клітин до того чи іншого паростку.
Можливість проведення цитохімічної характеристики елементів гемопоезу можливе тільки з моменту морфологічно розпізнаються проліферуючих клітин - це стадія освіти еритробластів, мієлобластів, монобластов, лимфобластов. Перевага віддається реакцій, які мають діагностичне або диференційно-діагностичне значення.
Першою морфологічно розпізнається клітиною гранулопоеза є мієлобласти. в якому можна виявити всі цитохимические ознаки, властиві цьому ряду:- при визначенні активності пероксидази і хлорацетатестерази в цитоплазмі мієлобластів виявляється позитивна реакція;
- PAS-реакція дає дифузне фарбування цитоплазми;
- фарбування Суданом чорним В дає помірну суданофілію;
- інтенсивність дифузійної забарвлення цитоплазми мієлобластів при виявленні активності кислої фосфатази коливається від слабкої до помірної;
- в мієлобласти не виявляється активність лужної фосфатази (як і у всіх пролиферирующих клітинах гранулоцитарного ряду);
- реакція при визначенні активності неспецифічної естерази слабо позитивна і не відзначено зниження фторидом натрію.
Найбіднішими в цитохімічним щодо клітинами є лімфоцити. Тільки невелика частина лімфоцитів містить виявляється глікоген, кислу фосфатазу і кислу альфа-нафтілацетатестеразу, що дає можливість розмежувати різні види лімфоцитів. У лімфоцитах ніколи не визначається активність пероксидази, також немає ліпідів.
При цитохімічним дослідженні прийнято користуватися полуколичественной оцінкою результатів (принцип Астальдо), яка заснована на виявленні різного ступеня інтенсивності специфічного забарвлення:- (-) - негативна реакція;
- (+) - слабоположітельная реакція;
- (++) - позитивна реакція;
- (+++) - різко позитивна реакція.
Щоб висловити результати кількісно, підраховується 100 клітин певного виду, при цьому проводиться їх диференціація за ступенем інтенсивності забарвлення. Після цього кількість клітин з однаковою інтенсивністю забарвлення підсумовується і з отриманого числа віднімається кількість клітин, які не мають забарвлення. Результат виражається у відсотках.
Результат можна висловлювати у вигляді середнього цитохимического коефіцієнта (СЦК). Для цього знову ж підраховується 100 клітин певного виду, диференціюючи їх за ступенем інтенсивності забарвлення. Після цього кількість клітин з однаковим ступенем забарвлення множиться на число плюсів, які відповідають цій групі і все підсумовується, після чого ділиться на 100.
Для попереднього прикладу СЦК = (5 · 0) + (10 · 1) + (30 · 2) + (55 · 3) / 100 = 2,35
Слід сказати, що норми для цитохимических показників клітин повинні розроблятися індивідуально для кожної окремо взятої лабораторії в залежності від наявності реактивів і ступеня їх чистоти.
Цитохімічні особливості бластів, що лежать в основі диференціальної діагностики гострих лейкозів:
Форма гострого лейкозу