Для лабораторної діагностики інфекції використовується следу4ющіе прямі методи
Полімеразна ланцюгова реакція.
Дозволяє виявити збудника безпосередньо в досліджуваному патологічному матеріалі за допомогою всіляких мікроскопів.
Мікроскопічному методу дослідження піддаються різні біологічні матеріали, отримані від хворих: кров, мазки зі слизових оболонок глотки, піднебінних мигдалин, носа, сечу, виділення уретри, спинномозкова рідина, витяжка з кісткового мозку, мазки відбитків карбункулів або фурункулів.
З отриманого біологічного матеріалу в лабораторії за допомогою різних технологій готують мазки. Після приготування мазка його висушують, фіксують і забарвлюють. Просте фарбування, для якої використовується тільки один барвник (фуксин, метиленовий синій) дозволяє ознайомитися із загальною морфологією мікроба. Складні способи забарвлення застосовуються для диференціації мікробів. Найбільше практичне значення має фарбування по Граму, Цілем-Нільсон, Нейссеру і ін. Застосовують також метод вивчення мікробів в живому, нефарбованому вигляді. Цей метод має ту перевагу, що мікроби вивчаються в непошкодженому вигляді. Метод зазвичай застосовується для визначення рухливості мікроорганізмів і для вивчення тонкої структури великих паразитів (грибів, найпростіших)
До мікроскопічним методам обстеження можна також віднести люмінесцентна-серологічний метод (імуно-флюорісценція), який знайшов застосування в основному для діагностики вірусних інфекцій. Використовуються специфічні діагностичні антитіла, мічені флюоресцирующими фарбами. З'єднання мічених антитіл з антигенами мікроорганізмів дає можливість судити про наявність і локалізації антигену (токсину). Результат реакції враховується при розгляданні препарату в люмінесцентному мікроскопі. Метод цей має високу чутливість і характеризується універсальністю застосування для виявлення різних антигенів, як в живих, так і в мертвих клітинах. Найбільш часто цей метод лабораторної діагностики застосовують при вірусних інфекціях, інші методи мікроскопічного дослідження вірусів застосовуються порівняно рідко.
Крім знаходження мікроорганізмів, для діагностики інфекцій, вивчають сторонні включення в окремих клітках, скупченні вібріонів і продуктів реакції клітин - тільця Бабеша-Негрі при сказі і т.д.
Використовується так само люмінесцентна мікроскопія, що дозволяє виявити внутрішньоклітинні або внутрішньоядерні включення, що містять вірусні нуклеїнові кислоти.
Бактеріологічні методи дають можливість отримати чисту культуру збудника хвороби, що необхідно для комплексного дослідження культурних, морфологічних, біохімічних, антигенних та інших властивостей збудника. У практиці частіше доводиться мати справу з біологічним матеріалом, що містить суміш мікроорганізмів. Виділення збудника в чистому вигляді є основою бактеріологічного дослідження. Потрібно пам'ятати, що спосіб забору біологічного матеріалу для дослідження дуже сильно впливає на ефективність кінцевого результату.
Обов'язкові правила при заборі біологічного матеріалу для бактеріологічного дослідження:
1. Матеріал потрібно забирати до початку етіотропної терапії.
2. Суворо дотримуватися стерильність при заборі.
4. Домагатися мінімального проміжку часу між забором матеріалу і посівом на поживні середовища, при неможливості посіву в перші 3 години використовують консервуючі суміші (водно-гліцеринова 7: 3, Кері-Блера і ін.). При відсутності консервантів, матеріал зберігають в холодильнику або на льоду.
Бактеріологічному дослідженню піддають все біологічні матеріали.
Досліджувані матеріали висівають на живильні середовища, використовуючи спеціальну методику посіву, отримують окремі колонії, які далі пересівають в пробірки з косим агаром. Для культивування мікроорганізмів використовуються різні поживні середовища: прості (м'ясо-пептони бульйон, агар) і складні (сироваткова середа).
Для виділення та накопичення мікроорганізмів застосовують консервуючі середовища (гліцеринова суміш), середовища збагачення (лужна пептонна вода) і елективні (виборчі) середовища (жовчний бульйон). У ряді випадків поживні середовища застосовують для визначення мікроорганізмів (середовища Ендо, Левіна, Плоскарева - для діагностики кишкових бактерій).
Характер зростання мікроорганізмів (культурні властивості) є одним з критеріїв для його розпізнавання. Значення мають величина, форма, консистенція, щільність, колір, поверхні колоній на щільних поживних середовищах, а в бульйоні - наявність каламуті, осаду, плівки.
Одним з основних діагностичних методів при розпізнаванні мікроорганізмів є вивчення їх біохімічних властивостей. Особливе значення це має при діагностиці кишкових інфекцій. Вивчається здатність мікроорганізмів зброджувати вуглеводи з утворенням кислоти або кислоти з газом, розкладати білкові продукти, здатність утворювати католазу і ін.
Для виявлення всіх властивостей матеріал поміщають на диференційно-діагностичні середовища, що містять речовини, щодо яких мікроорганізми проявляють свою ферментативну активність. Додавання в середу індикаторів змінюють колір середовища дає можливість легко дізнаватися результати. Цей метод бактеріологічної діагностики називається - '' посів на строкатий ряд ».
Виявлення збудників вірусних інфекцій має свої особливості, зумовлені особливостями вірусів - внутрішньоклітинним паразитуванням. Для культивування вірусів використовують курячі ембріони і культури тканин. Найчастіше застосовують курячі ембріони на 8-12 день інкубації. Матеріал вводять в амніотичну порожнину, в жовтковий мішок або на оболонки. Заражені яйця поміщають в інкубатор на 3-10 днів. Термін інкубації залежить від вірусу, способу зараження і цілі дослідження.
Культурами тканин називають суміш клітин, які здатні існувати поза організмом. Віруси культивуються у всіх культурах тканин. У культурі тканин віруси визначаються за цілою низкою ознак і показників.
Біологічними методами називають методи зараження лабораторних тварин. Відтворення захворювання у тварин є абсолютним показником патогенності мікроорганізмів. Для дослідження біологічних властивостей паразитів використовуються тільки найбільш чутливі до них тварини (при туберкульозі - морські свинки, при пневмококової інфекції та сибірку - білі миші, при стрептококової інфекції - кролики і т.д.).
Метод зараження лабораторних тварин частіше застосовується при вірусних інфекціях. Місце введення біологічного матеріалу вибирають з урахуванням тропізму (спорідненості) досліджуваного вірусу до певних тканин тварини і людини (нейротропні - вводять в мозок, пневмотропні - в трахею і т.д.).
Після зараження тварин розмноження паразитів в них встановлюють:
1. За клінічною картиною;
2. За патофізіологічному зміни в організмі тварини;
3. За знаходженню мікроорганізмів в організмі тварини ;.
4. За знаходженню антитіл в сироватки крові тварини:
У деяких випадках лабораторних тварин використовують для виділення чистої культури, при введенні сильно забрудненого матеріалу, різними патогенними мікроорганізмами. Після смерті тварини з його організму виділяють чисту культуру. За допомогою лабораторних тварин можна також визначити вірулентність виділеного патогенного штаму мікроорганізмів.