Принцип: Мікроскопія сухих фіксованих і забарвлених мазків крові з диференціюванням різних форм лейкоцитів.
Реактиви: 1.Іммерсіонное масло
2.11- Клавішний лічильник для підрахунку лейкоцитарної формули або рахункові машинки СЛ-1
Підрахунок лейкоцитарної формули проводять за допомогою імерсійної системи мікроскопа. У зв'язку з тим, що мазку різні види лейкоцитів розташовуються нерівномірно (моноцити і нейтрофіли - переважно вздовж верхнього та нижнього поздовжнього краю препарату, лімфоцити - ближче до його центру), підрахунок лейкоцитарної формули здійснюють, користуючись наступними методичними вказівками. Під малим збільшенням мікроскопа знаходять край мазка крові поблизу утворила щіточки. У поздовжнього краю мазка наносять краплю иммерсионного масла, після чого фокусують площину препарату. Спостерігаючи в окуляр, відступають на 2-3 поля зору у напрямку до середини мазка. Потім продовжують просування препарату в тому ж напрямку на 3-5 полів зору, в кожному з них підраховуючи наявні лейкоцити. Слідом за цим просувають мазок 3-5 полів зору уздовж поздовжнього краю, змінюючи правління просування мазка під прямим кутом, повертаються до краю мазка, просуваючи при цьому мазок ще 3-5 полів зору і так далі. Зигзагоподібну лінію, по якій просувають мазок крові, називають лінією Меандру:
Підрахунок продовжують до тих пір, поки не буде пораховано 50% клітин. Потім підрахунок продовжують на протилежному боці мазка, т. Е 50 лейкоцитів вгорі і 50 лейкоцитів внизу. Так само, як описано вище, при про-тяженіі мазка підраховують всі лейкоцити, які виявляються в поле зору. Підрахунок закінчують, коли сума лейкоцитів буде дорівнює 100. Реєстрацію лейкоцитів при підрахунку виробляють за допомогою лічильника II клавішного СЛ-1, при цьому отримують загальну суму і кількість кожного виду лейкоцитів у відсотках. При відсутності лічильника реєстрацію проводять за допомогою запису на аркуші паперу. По вертикалі записують початкові літери назв лейкоцитів: метамієлоцити (мтмц.), Паличкоядерні (п.), Сегментоядерні (с.), Еозинофільні (е.), Базофільні гранулоцити (б.), Лімфоцити (лимф.), Моноцити (мон.) , плазматичні клітини (мл.). У міру підрахунку лейкоцитарної формули кожен знайдений лейкоцит реєструють паличкою або точкою, яку ставлять в горизонтальному ряду, відповідному того чи іншого виду лейкоцитів. Для полегшення подальшого підрахунку кожного виду лейкоцитів палички або точки групуються десятками:
8х '10 9 / л х 4 = 0,32 х10 9 / л примірників
Морфологічні структурні зміни лейкоцитів
Структурні зміни в лейкоцитах (токсикогенні зернистість, вакуолізація, пикноз; хроматіноліз, каріорексис, цитолиз) виявляють в забарвлених препаратах крові; деякі з них можуть бути виявлені тільки в цитоплазмі або тільки в ядрі клітин; нерідкі поєднання різний структурних змін в лейкоцитах.
Включення Князькова - Справі - великі блакитного кольору грудочки, які мають різну форму і знаходяться в цитоплазму нейтрофілів.
Тельця Амато - утворення округлої форми або у вигляді коми, блідо-блакитного кольору, що містять червоні або червоно-фіолетові гранули.
Виснаження зернистості проявляється або зменшенням, або її повним зникненням, що найбільш часто спостерігають в цитоплазмі нейтрофілів, що виходять із запального вогнища костногоо мозку при його токсичне ураження, леченном хронічному мієлоїдному лейкозі.
Невідповідність ступеня созреваніяядра і цитоплазми - може бути виявлено «молоде» ядро в дозрілої цитоплазмі і, навпаки, зріле ядро і базофильная цитоплазма в нейтрофільних гранулоцитах, що спостерігають, наприклад, при хронічному мієлоїдному лейкозі.
Вакуолізація цитоплазми і ядра у вигляді невеликого розміру безбарвних плям, кількість яких варіює від одиничних до множинних і часто округлених (в нейтрофільних гранулоцитах) гранул.
Пікноз ядра виявляється у вигляді ущільненого, інтенсивно забарвленого базіхроматіна; ядро або ділянку ядра зменшується в розмірі, стає безструктурним.
Гіперсегментація ядра - кількість сегментів в ядрі клітини варіює від 6 до 10 і більше. Крім мегалобластної анемій, гіперсегментація виявляють після впливу хімічних речовин, що проникає іонізуючого випромінювання.
Фрагментоз - від ділянок основного ядра відокремлюються фрагменти, пов'язані з ним тонкої ниткою базіхроматіна. Кількість фрагментів варіює від одиничних до множинних.
Гіпохроматоз - в зв'язку зі зміною фізико-хімічної структури хроматин не фарбується, залишається світлим; контури ядерної оболонки не виявляються.
Хроматіноліз - в зв'язку з раз-рушення хроматину весь масив ядра або його ділянка не забарвлюється, залишається світлим; контури ядерної оболонки чіткі.
Каріорексис розпад ядра на окремих-ні частки, не пов'язані між собою; частинки мають округлу форму, різну величину, здебільшого пліт-ні, інтенсивно забарвлені (пікнотичним).
Каріолізис - руйнування ядра. Зазвичай на місці ядра або зруйнований-ного його ділянки залишається безструктурне освіту.
Анізоцитоз - поява невеликих, великих та гігант-ських клітинних елементів, що найбільш характерно для нейтрофілів. Лейколіз - руйнування лейкоцита. Термін часто використовують для опису раз-порушених лімфоцитів при хронічному лимфоидном лейкозі.
Цитоліз - руйнування клітини з образо-ням безструктурної, безформною маси.
Перераховані вище структурні зміни в лейкоцитах спостерігають при запальних (особливо септичних) станах. деяких інфекційних та паразитарних захворюваннях, лейкозах. анеміях і т.д.