Характеристики тканинних культур
Для культивування вірусів використовують ряд методів. Це культивування в організмі експериментальних тварин, курячих вібріон і культурах тканин (частіше - ембріональні тканини або пухлинні клітини). Для вирощування клітин тканинних культур використовують багатокомпонентні живильні середовища (середа 199, середа Голка і ін.). Вони містять індикатор вимірювання Ph середовища і антибіотики для придушення можливого бактеріального забруднення.
Культури тканин можуть бути переживають, в яких життєздатність клітин вдається зберегти лише тимчасово, і зростаючими, в яких клітини не тільки зберігають життєдіяльність, але і активно діляться.
У роллерних культурах клітини тканини фіксовані на щільному основі (скло) - частіше в один шар (одношарові), а в суспендованих - вони зважені в рідкому середовищі.
За кількістю пасажів, що витримуються зростаючої культурою тканин, серед них розрізняють:
- первинні (первинно-трипсінізірована) культури тканин, які витримують не більше 5-10 пасажів;
- полуперевіваемие культури тканин, які підтримуються не більше ніж в 100 генераціях;
- перещеплюваних культури тканин, які підтримуються протягом невизначено тривалого строку перебувають у численних генераціях.
Найчастіше використовуються одношарові первинно-перещеплюваних і перещеплюваних тканинні культури.
Цитопатична дію вірусів
Про розмноження вірусів в культурі тканини можна судити по цитопатичної дії (ЦПД):
- деструкції клітин,
- зміни їх морфології,
- формування багатоядерних симпластов або сінтіція в результаті злиття клітин.
- в клітинах культури тканини при розмноженні вірусів можуть утворюватися включення - структури, не властиві нормальним клітинам.
Включення виявляються в забарвлених за Романовським-Гімза мазках із заражених клітин. Вони бувають еозинофільні і базофільні.
За локалізацією в клітці розрізняють:
Характерні ядерні включення формуються в клітинах, заражених вірусами герпесу (тільця Каудрі), цитомегалії і поліоми, аденовірусами, а цитоплазматичні включення - вірусами віспи (тільця Гварніері і Пашена), сказу (тільця Бабеша-Негрі) та інші.
Про розмноження вірусів в культурі тканини також можна судити по методу "бляшок" (негативних колоній). При культивуванні вірусів в клітинному монослое під агаровим покриттям на місці уражених клітин утворюються зони деструкції Моносов. Так звані "стерильні плями", або бляшки. Це дає можливість не тільки визначити число віріонів в 1 мл середовища (вважається, що одна бляшка є потомство одного віріона), але і диференціювати віруси між собою по феномену бляшкообразрованія.
Наступним методом, що дозволяє судити про розмноження вірусів (тільки гемагглютинирующих) в культурі тканини, можна вважати реакцію гемадсорбції. При культивуванні вірусів, що володіють гемагглютинирующей активністю, може відбуватися надлишковий синтез гемаглютиніну. Ці молекули експресуються на поверхні клітин культури тканини, і клітини культури тканини набувають здатність адсорбувати на собі еритроцити - феномен гемадсорбції. Молекули гемаглютиніну накопичуються і в середовищі культивування, це призводить до того, що культуральна рідина (в ній накопичуються нові віріони) придбає здатність викликати гемаглютинацію.
Найбільш поширеним методом оцінки розмноження вірусів в культурі тканини є метод "кольоровий проби". При розмноженні в живильному середовищі з індикатором незаражених клітин культури тканини внаслідок утворення кислих продуктів метаболізму вона змінює свій колір. При репродукції вірусу нормальний метаболізм клітин порушується, кислі продукти не утворюються, середа зберігає початковий колір.
- Вакцина проти ВПЛ набуває популярності серед американських підлітків Новини медицини
- Багатодітна мати пожертвувала нирку жінці, була зустрінута в церкві Новини медицини
- Передозування опіоїдів в Канаді продовжують рости, але зроблений крок до подолання кризи Новини медицини
- Переваги шлункового шунтування зберігаються протягом 12-ти років Новини медицини
- Компанія з США оголосила про створення ефективних ліків від ожиріння Новини медицини
Оцініть рівень безкоштовної медицини в своєму регіоні
Може бути цікаво:
- Клітини і тканини Анатомія людини
- Гістогенез пухлини Патологічна анатомія
- Некроз Патологічна анатомія
- Стовбурові клітини отримані зі шкіри мишей Новини медицини
- Мультипотентні стовбурові клітини є в будь-якій тканині? Новини медицини