Визначення індікана в сечі
Индикан є калиевую або натрієву сіль індоксіл сірчаної кислоти, що утворюється в печінці при знешкодженні індолу. Індол, в свою чергу, утворюється в кишечнику з триптофану при гнитті білків.
У сечі здорової людини индикан міститься в незначних кількостях і звичайними лабораторними тестами не визначається.
проба Обермейера
Принцип методу. В результаті гідролізу ефірного зв'язку сильною кислотою индикан перетворюється в індоксіл, який, окислюючись хлоридом заліза (III), перетворюється в синє індиго.
Реактиви. 1) ацетат свинцю [Pb (СН3 СОО) 2 × ЗН2 O], 100 г / л розчину; 2) концентрована соляна кислота з відносною щільністю 1,19; 3) хлорид заліза (FeCl3 × 6Н2 O); 4) реактив Обермейера: 0,4 г FeCl3 × 6Н2 O розчиняють в 100 мл концентрованої соляної кислоти; 5) хлороформ; 6) тіосульфат натрію (Na2 S2 O3 × 5Н2 O), 200 г / л розчину.
Хід визначення. В пробірку вносять 4 мл сечі, додають 0,4 мл розчину ацетату свинцю для осадження жовчних пігментів, солей і інших речовин, що заважають реакції. Фільтрують. 1-2 мл фільтрату змішують з рівним об'ємом реактиву Обермейера і через 5 хв додають 0,5-1 мл хлороформу, пробірку закривають пробкою і обережно перемішують вміст, неодноразово перевертаючи пробірку. Якщо шар хлороформу забарвлюється в синій або червоний колір, його відсмоктують і додають до нього 2-3 краплі розчину тіосульфату натрію.
Оцінка результатів. Після додавання розчину тіосульфату натрію забарвлення не зникає - проба позитивна.
проба Яффі
Принцип методу. В результаті гідролізу ефірного зв'язку сильною неорганічної кислотою индикан перетворюється в індоксіл, який, окислюючись перманганатом калію, перетворюється в синє індиго.
Реактиви. 1) 2% розчин перманганату калію (КMnO4): 2 г перманганату розчиняють в 98 мл дистильованої води; 2) концентрована соляна кислота; 3) хлороформ (СНСl3); 4) тіосульфат натрію (Na2 S2 O3 × 5Н2 O) кристалічний.
Хід визначення. У хімічну пробірку наливають 5-6 мл звільненій від білка профільтрованої сечі, додають рівний об'єм концентрованої соляної кислоти і 2-3 мл хлороформу. До вмісту пробірки по краплях (!) Додають 2% розчин перманганату калію (надлишок перманганату призводить до окислення індиго в ізатин жовтого кольору). Пробірку закривають пробкою і обережно змішують вміст шляхом багаторазового (15-20 разів) її перевертання. При енергійному струшуванні може утворитися стійка емульсія, що перешкоджає поділу рідини на шари. Пробірку встановлюють в штатив і через кілька хвилин враховують реакцію по фарбуванню шару хлороформу, що знаходиться на дні.
Оцінка результатів. При наявності індікана в сечі хлороформ забарвлюється в фіолетовий або синій колір. При недостатньому додаванні перманганату калію (слабке окислювання), прийомі хворими препаратів йоду шар хлороформу забарвлюється в рожево-червоні відтінки. Диференціюють забарвлення, зумовлену прийомом лікарських засобів, за допомогою тіосульфатние проби: при додаванні до проби кристалів тіосульфату натрію рожево-червоний відтінок зникає, забарвлення, що залежить від індиго, залишається.
У деяких випадках і у здорових осіб хлороформ може змінити колір в блідо-блакитний колір, що також приймають за норму.
Клінічне значення. Индикан в сечі виявляється при непрохідності кишечника, спастичних колітах, перитоніті, коли створюються умови для посилення гнильних процесів в кишечнику, а також при посиленому розпаді білків в організмі.