Аденоматозу ОВЕЦЬ І КІЗ
4.1. Тимчасові Методичні вказівки ПО ЛАБОРАТОРНОЇ ДІАГНОСТИКИ аденоматозу ОВЕЦЬ І КІЗ
1. Загальні положення
1.1. Аденоматоз овець і кіз - вірусна, повільно протікає хвороба, що характеризується утворенням у легенях железістоподобной тканини (пухлини).
1.2. Лабораторні дослідження на аденоматоз включають в себе виявлення специфічних антитіл в сироватках крові хворих тварин в реакції радіальної імунодифузії (РІД); виявлення патологоморфологічний змін в легенях гістологічним методом.
1.3. У лабораторію для дослідження на аденоматоз направляють сироватку крові в кількості 3. 5 мл від хворої тварини, патологічний матеріал від полеглих або убитих тварин (шматочки ураженої тканини легені).
2. Виявлення специфічних протівоаденоматозних антитіл в реакції радіальної імунодифузії
2.1. Для дослідження використовують неінактівірованние сироватки, які дозволяється зберігати (до постановки з ними реакції) при температурі 4. 8 ° С не більше 2. 3 діб або при -20 ° С протягом місяця (при одноразовому заморожуванні).
2.2. Для постановки РІД застосовують 2,6% -ний гель агару (харчової по ГОСТ 16280-70), приготований на 7,2% -ому розчині хлористого натрію. Для цього до 100 мл 7,2% -ного розчину хлористого натрію додають 2,6 г агару. Суспензія нагрівають на слабкому вогні до зникнення крупинок, а потім отриманий розчин агару в гарячому вигляді розливають в стерильні пробірки по 6 мл.
2.3. Реакцію ставлять на скляній пластинці розміром 9x12 см. Перед постановкою компоненти набору для діагностики аденоматозу овець і кіз розчиняють стерильним 0,85% -ним розчином хлористого натрію, рН 7,2. 7,4. Для цього в ампулу (флакон) з антигеном додають 4 мл, а в ампули (флакони) зі специфічною гіперімунною і нормальної сироватками - по 0,5 або 0,25 мл розчину (в залежності від обсягу сироваток, зазначеного на етикетках).
2.4. Агаровий гель, розлитий в пробірки, розплавляють на водяній бані, охолоджують до 50 ° С, швидко змішують з 4 мл специфічного антигену, підігрітого до цієї ж температури, і виливають на теплу скляну пластину, встановлену строго горизонтально. Кінчиком стерильного скальпеля його рівномірно розподіляють по пластині і залишають для застигання при кімнатній температурі.
2.5. У застиглому агарі пробійником роблять лунки діаметром 3 мм, дотримуючись між ними відстань не менше 7 мм. На одній пластині можна зробити 54 лунки (6 - по ширині і 9 - по довжині, використовуючи трафарет для їх розміщення). Агар з лунок видаляють за допомогою голки.
2.6. Постановка реакції. Лунки заповнюють досліджуваними нерозведеними сироватками до зникнення меніска. Не можна допускати розтікання сироватки по поверхні агару. Для кожної сироватки використовують нову пастерівську піпетку.
Для контролю на кожній пластині перші дві лунки заповнюють специфічної і нормальної (негативною) сироватками. Потім пластини поміщають у вологу камеру (великий стерилізатор, дно якого покривають ватою, змоченою 0,5% -ним розчином фенолу) і інкубують при 37 ° С протягом доби.
2.7. Облік реакції проводять через 24 год в світлі освітлювача, маючи на увазі, що при позитивній реакції навколо лунки утворюється каламутне (молочного кольору) кільце преципітації, яке може бути у вигляді обідка, широкого кільця або обідка, віддаленого від лунки на деякій відстані. При негативних результатах досліджень кільце преципітації не утворюється.
У контролі з позитивною (специфічної) сироваткою має спостерігатися чітке кільце преципітації. З нормальної (негативною) сироваткою кільце преципітації має бути відсутнім. При отриманні незадовільних результатів в контролі дослідження повторюють.
3. Патологоанатомические дослідження
3.1. Поступив патологічний матеріал (шматочки легенів) ущільнюють в целлоидин, парафіні або використовують метод заморожування, готують гістосрези і фарбують їх гематоксилін-еозином.
3.2. В позитивних випадках при мікроскопічному дослідженні препаратів з уражених ділянок легень виявляють структури, подібні до аденокарциномой: замість плоских епітеліальних клітин альвеол і бронхіол - кубічні і циліндричні (пухлинні) клітини, а також в просвітах альвеол і бронхіол - сосочковідние розростання пухлинної тканини, що утворюють структури, нагадують залозистий орган. Просвіти альвеол і бронхіол бувають заповнені розрісся папілломатозних епітелієм. Сполучнотканинна основа слизової оболонки бронхів і перибронхиальная тканину потовщені за рахунок інфільтрації її лімфоцитами, плазмоцитами і фібробластами, в затяжних випадках - склерозірована.
3.3. Виявлення в гістопрепараті з легких железістоподобних структур, подібних за будовою з аденокарциномою, є підставою для постановки патогістологічного діагнозу на аденоматоз.
4. Діагноз на аденоматоз овець і кіз вважається підтвердженим лабораторними дослідженнями при виявленні в патологічному матеріалі характерних для цієї хвороби патогистологических змін і позитивних результатів дослідження сироваток крові від цих же тварин або від тварин з цієї ж групи в реакції радіальної імунодифузії.
5. При оздоровленні неблагополучних господарств хворих аденоматозом овець і кіз виявляють шляхом серологічних досліджень.
6. Терміни досліджень: серологічних - 2. 3 діб, патоморфологічних - 10. 14 діб.
Аденоматоз овець і кіз (довідка)
Захворюваність адематозом досягає 20% і вище, летальність - до 100%.
2. Симптоми хвороби. Інкубаційний період - не менше 3. 4 міс .; хвороба відрізняється тривалим перебігом і симптомами ураження легень (кашель, задишка); заражені ягнята відстають у рості і розвитку, хворі тварини слабшають, при випасанні відстають від стада.
Підвищення температури тіла не відмічається.
3. Патологоанатомічні зміни. При розтині полеглих від аденоматозу або убитих тварин характерні і постійні зміни відзначають лише в легких у вигляді різної величини і форми щільних вогнищ блідо-рожевого кольору, різко обмежених і піднімаються над навколишньою тканиною. Іноді вони зливаються між собою, охоплюючи значну частину легені. Найчастіше вражаються діафрагмальні і середостіння частки. Змінені ділянки на розрізі мають гладку або зернисту (саловідную), блискучу поверхню. При їх стисненні виділяється тягуча рідина блідо-жовтого кольору. В трахеї і бронхах міститься велика кількість пінистого слизового ексудату. Бронхіальні і середостінні лімфатичні вузли бувають, як правило, збільшені в 3 4 рази, на розрізі соковиті, малюнок - згладжений.
Іноді в бронхіальних лімфатичних вузлах виявляють метастази.
Аденоматоз легких внаслідок ускладнення вторинної бактеріальної мікрофлорою часто супроводжується розвитком фибринозной, катаральної або гнійної пневмонії, абсцесів. Ступінь вираженості описаних вище змін залежить від стадії розвитку хвороби.
4. Діагноз на аденоматоз легенів встановлюють на підставі клінічних, епізоотологічних даних, а також результатів патоморфологічних і серологічних досліджень (1).
Тимчасові методичні вказівки з лабораторної діагностики аденоматозу овець і кіз
Вид документа: