Спосіб може бути використаний в області медицини, зокрема в трансплантології, і забезпечує збереження імунної системи реципієнта як до, так і після трансплантації і проведення трансплантації в більш стислі терміни. Реципієнту проводиться передпідготовки з подальшою власне пересадкою органів і тканин. При цьому в стадії передпідготовки у реципієнта виділяють еритроцити крові, які потім навантажують антигенами гістосумісності першого класу, отриманими від донора, парентерально вводять реципієнту ці навантажені еритроцити, а в стадії власне пересадки використовують того ж донора. 1 табл.
Винахід відноситься до області імунології і може бути використано як при трансплантації органів і тканин людини, так і в перспективі при лікуванні онкологічних хворих.
Відомо, що звичайні трансплантації, навіть з передпідготовки, призводять до наступних ускладнень: 1) відторгнення пересадженого органа (що у випадку з життєвоважливі органами може призвести реципієнта до летального результату); 2) зміни імунологічного статусу хворого через реакцій - трансплантат проти господаря або господар проти трансплантата, що в свою чергу призводить до виникнення різних ускладнень і вторинних інфекцій, з якими організм вже не може впоратися; 3) токсичного ураження органів (серце, печінку, нирки) реципієнта, а також самого трансплантата в результаті проведеної "медикаментозної захисту трансплантата" з метою досягнення гальмування його відторгнення.
Відомі способи трансплантації острівців підшлункової залози при діабеті, коли з метою гальмування відторгнення алогенних тканин реципієнта (людини) вводили розчин людського антітімоцітарний глобуліну, наприклад: \ Hu Y.-F. Gu Z.F. Zhang H.D. et al. "Lslet transplantation in patients with type i diabetes in China." ( "Diabetes" 1989, vol. 38 Suppl. 1 p. 316).
Недоліком методу є порушення системи імунологічного розпізнавання у реципієнта, короткочасність дії такої "захисту" для пересаджених тканин і порушення з боку системи згортання крові.
Всі пацієнти, крім одного дитини, отримували підтримуючу хіміотерапію і / або радіотерапію до інфузії аллогенного кісткового мозку (приблизно за 6-7 днів до трансплантації), як профілактичну передпідготовки проти відторгнення. Донори для 3 пацієнтів були фенотипически підібрані за всіма HLA-A, B, Dr, Dw loci локусам, 9 інших донорів були слабо сумісні з реципієнтом і чітко підбиралися лише по одному локусу HLA-A або B і Dw loci. Після проведеної трансплантації всім хворим проводилась профілактика реакції трансплантат - проти господаря, яка включала в себе дачу метотрексату і преднізону в поєднанні з циклоспорином-A (6 пацієнтів), антітімоцітарний глобуліну (5 пацієнтів) або анти-CD5 іммунотоксінов з А-ланцюгом рицину (1 пацієнт).
Цей спосіб обраний нами як прототип і має такі недоліки.
1. Необхідність побору гістосумісності донора, хоча б по одному локусу HLA.
2. Застосування хіміо- і / або радіотерапії в якості "передпідготовки" реципієнтів за 6-7 днів до трансплантації, що призводить додатково до ураження клітин крові і клітин шлунково-кишкового тракту.
3. Використання сильних імуносупресорів, здатних порушити клітинний розподіл, таких як циклоспорин-А, метотрексат та ін.
4. Видалення імунокомпетентних клітин (Т-ряду) антітімоцітарний глобуліном або анти-CD5 іммунотоксінов з A-ланцюгом рицину у реципієнтів. Ця маніпуляція призводить до порушення міжклітинних взаємодій і послаблює антиінфекційних захист організму.
5. Вкрай низька тривалість "життя" дітей (близько 2 років) після таких складних і небезпечних для дитячого організму процедур.
Мета запропонованого способу - усунення зазначених вище недоліків. Поставлена мета досягається тим, що в способі трансплантації органів і тканин шляхом проведення реципієнту передпідготовки з подальшою власне пересадкою відповідних органів і тканин в стадії передпідготовки у реципієнта виділяють еритроцити крові, які потім навантажують антигенами гістосумісності першого класу, отриманими від донора, парентерально вводять реципієнту ці навантажені еритроцити, а в стадії власне пересадки використовують того ж донора.
У пропонованому способі успіх трансплантації органів і тканин досягається при повному збереженні імунної системи реципієнта як до, так і після трансплантації, абсолютно безпечною для нього передпідготовки (що клінічно підтверджено) і відсутністю необхідності ретельного підбору донора.
Пропонований спосіб полягає в наступному.
1. передпідготовки, коли у реципієнта беруть з вени кров (у людини приблизно 5-10 мл). Виділяють еритроцити. Одночасно від донорів трансплантуються тканини або органів звичайним способом виділяють розчинні антигени гістосумісності 1 класу, наприклад, за способом Стромінжера (Strominger JL / Structure of products of the major histocompatibility complex in man and mouse / Prog. Immunol. N 4, p. 541-554 1980), якими потім і "навантажують" еритроцити реципієнта. (Існують різні способи "навантаження" клітин чужорідними антигенами - так, наприклад, "з'єднували" еритроцити вола та моноклональні антитіла / Berthold F. Schumacher R. Schneider A. et al./ Removal of neuroblastoma cells from bone marrow by a direct monoclonal antibody rosetting technique / Bone Marrow Transplantation 4, 273-278, 1989). Потім, такі "навантажені" еритроцити вводять реципієнту, для імунної системи якого не тільки самі еритроцити, але і всі захоплені ними антигени (в тому числі і розчинні антигени гістосумісності 1 класу донорів) сприйматимуться як "свої", так як тепер вони не підуть по ендосомальному шляху, характерному для всіх екзогенно потрапили антигенів, а будуть сприйматися як "внутрішні", ендогенні антигени, проти яких не повинні вироблятися антитіла.
2. Здійснення власне трансплантації клітин або тканин від нерідного донора. Цю процедуру проводять за звичайними відпрацьованим методикам через 7 днів після здійснення передпідготовки.
Пропонований спосіб дозволяє подолати бар'єри гістосумісності не тільки між двома генетично близькими видами організмів, при збереженні імунітету реципієнта, що було продемонстровано в експерименті, а й здійснити в клініці ксенотрансплантацію острівців підшлункової залози від дорослого кролика хворим з тяжкою формою цукрового діабету. Імовірно, це може бути пов'язано з тим, що після проведення передпідготовки антигени гістосумісності майбутнього донора будуть експресувати ні з антигенами гістосумісності другого класу, що характерно для всіх екзогенно надійшли "чужих" антигенів, а минуть ендосомальний шлях в імунокомпетентних клітинах і будуть експресуватися, як " свої ", внутрішні антигени, з комплексом гістосумісності першого класу. Це і повинно привести до подальшого приживлення трансплантованого органу або тканини.
Приклад 1. Здійснення алогенних трансплантацій мишачої гібридоми ІКО 31, (яка пасерують виключно на мишах Balb / c) на мишей - гібридах F1 (CBA C57 BL / 6).
Від самців F1 (CBA C57 BL / 6j) проводили забір крові. За стандартною методикою виділили фракцію еритроцитів. Кінцевий обсяг - 1,5 мл. Виділяли розчинні антигени гістосумісності 1 класу від мишей Balb / c і навантажували ними еритроцити самців F1 (CBA C57 BL / 6j). До них додавали 9 мл середовища 199 і все це вводили внутрішньочеревно (в / б) по 1 мл 10 мишам F1 (CBA C57 BL / 6j).
Через 7 діб обробленим таким чином гібридам F1 (CBA C57 BL / 6j) вводили внутрішньоочеревинно по 15 млн. Клітин гібридоми ІКО 31, (пассіруемих виключно на мишах лінії Balb / c) в обсязі 3,5 мл.
В якості контролю використовували необроблених самців F1 (CBA C57 BL / 6j) і звичайних для цієї гібридоми самок Baib / c. Їм теж вводили по 15 млн. Клітин гібридоми ІКО 31 в / б в обсязі 3,5 мл.
Через 10 днів (як завжди) у всіх самок Balb / c розвинувся асцит і вони стали гинути (позитивний контроль). У всіх, попередньо оброблених самців F1 (CBA C57 BL / 6j) асцит стали з'являтися лише через 20 днів після початку експерименту (дослідна група), вони були перевірені в лабораторії А.Ю. Баришнікова (Онкологічний Науковий Центр РАМН), де було показано, що це дійсно гібридомної клітини ІКО 31 і вони працюють в розведенні 1: 10000. У контрольних мишей (негативний контроль) не відзначалося будь-яких відхилень з боку внутрішніх органів весь період спостереження (7 місяців). (Дані представлені в таблиці).
Приклад 2. Здійснення ксеногенної трансплантації людині острівців підшлункової залози від дорослого кролика.
Робота проведена на базі НИИТ і ІС (Науково-дослідний інститут трансплантації і штучних органів) на хворих з важкою формою цукрового діабету.
У хворого з ліктьової вени забирали кров - 8 мл. Виділяли еритроцити. Від конкретного кролика (для кожного хворого - свій) виділяли розчинні антигени гістосумісності 1 класу. З'єднували з еритроцитами (кінцевий об'єм суміші близько 6 мл). І такі "навантажені" еритроцити в обсязі 6 мл (близько 50000000 еритроцитів) вводили під захистом розчинуновокаїну в прямий м'яз живота. Це введення не викликало ніяких ускладнень у хворого (згортання-протизгортальна системи крові, функція нирок, серця, печінки і т.д.) були відсутні і алергічні прояви. Через 7 днів цього хворому була здійснена трансплантація острівців підшлункової залози, попередньо прокультивувати за методикою М.М. Скалецького (лабораторія культур тканин НИИТ і ІС) 2 діб.
Приклад 3. Хвора Л. 45 років. Діагноз: цукровий діабет, важка форма з порушеннями функції печінки, ангіопатія верхніх і нижніх кінцівок. Хворіє на діабет 25 років. В анамнезі - коматозні стану. Трансплантації острівців підшлункової залози раніше не проводилися.
У хворої з ліктьової вени забирали кров - 8 мл. Виділяли еритроцити. Від конкретного кролика (Для кожного хворого - свій) виділяли розчинні антигени гістосумісності 1 класу. З'єднували з еритроцитами (кінцевий об'єм суміші близько 6 мл). І такі "навантажені" еритроцити в обсязі 6 мл (близько 50000000 еритроцитів) вводили під захистом розчинуновокаїну в прямий м'яз живота. Це введення не викликало ніяких ускладнень у хворої (згортання-протизгортальна системи крові, функція нирок, серця, печінки і т. Д.) Були відсутні і алергічні прояви. Через 7 днів цієї хворої була здійснена трансплантація острівців підшлункової залози, попередньо прокультивувати за методикою М.М. Скалецького (лабораторія культур тканин НИИТ і ІС) 2 діб.
Через 2 місяці після проведення трансплантації її ефективність оцінена як позитивна. У хворої пройшли нейропатії, на 50% знижена потреба в екзогенному інсуліні. Відзначено поліпшення з боку функції печінки. Хвора працює і по теперішній час (відмовилася від "відкритого лікарняного листа").
Вищенаведені дані свідчать про те, що метод є універсальним, придатний як для алогенних, так і ксеногенних трансплантацій, а імунологічно є абсолютно безпечним.
Спосіб трансплантації органів і тканин шляхом проведення реципієнту передпідготовки з подальшою власне пересадкою відповідних органів і тканин, що відрізняється тим, що в стадії передпідготовки у реципієнта виділяють еритроцити крові, які потім навантажують антигенами гістосумісності першого класу, отриманими від донора, парентерально вводять реципієнту ці навантажені еритроцити, а в стадії власне пересадки використовують того ж донора.