Ісяублмі.-C А "Н і е (і) 624562
Винайдений іноземних мов (й) Дополййтельпий до патенту (І) Зааалапо 03.08.72 + 3> 1818168/13 (5в) М. Кл, (23) ПРіоРітат04 08 71 (32) А 61 К 3S / 46
Ласло Фойер (внр) (72) Лвтори ееаобрфтеіна
Хнноін Дьедьсер-ЕШ Ведьесеті Термеко Кьяра РТ (ВНР) (73) Заавтвтель (54) СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ БЕШЕСТВА, ОБЛАДАЮШЕХО
Винахід відноситься до фармацевтичної промисловості і стосується отримання лікарських препаратів.
Відомий спосіб отримання гормонального препарату з околощітовндной залози шляхом екстракції водою і при необхідності проведення очищення з використанням методів гель-фільтрації, хроматографії н фракціонування розчинниками t l), Однак препарат, отриманий відомим способом, є полипептидом, підви- ® ет рівень кальцію в крові.
11елью винаходу є отримання речовини, що володіє гормональним дією небелкового характеру, який підвищує рівень кремнію в крові.
Ця мета досягається тим, що околощн- N товндную залозу ссавців висушують, подрібнюють, потім екстрагнруют водою, отриманий водний екстракт відокремлюють від твердих частинок, осаджують з нього білки і поліпептнди трихлороцтової кислотою, потім видаляють надлишок трнхлоруксусной кислоти серією екстракцнй водним розчином діалкілового ефіру н цільової продукт необхідно чистити, крім того водну екстракцню ведуть при температурі 20 †"-60 С.
Спосіб здійснюється наступним чином.
Виділену з ссавців околощнтовідную залозу сушать і розмелюють, в разі необхідності знежирюють, екстрагують водою і піддають лнофілізаціі отриманий розчин. В якості вихідного матеріалу для отримання речовини застосовують. також культури речовини і клітинні культури, які походять від околощітовідной залози ссавців.
Виготовлений таким шляхом концентрат (водний розчин) нли ліофілізований порошок) ярнгоден для отримання фармацевтичних препаратів.
Готують більш активні препарати, які містять біологічно активна речовина в більш концентрованою або більш чистій формі н дезактивують супутній кальційактівний гормон.
Водні екстракти звільняють від білків і полінептідов причому до екстракту додають осаднтель білка н застосовують. отриманий розчин після відділення осаду.
Як осадителя білка застосовують трихлоруксусную кислоту, сульфосаліцилову кислоту. Білки можна видалити при допомозі рас: ворітелей і висолювання.
Відділення білкових речовин, поліпептидів і інших фракцій осушествляет і за допомогою гель-фільтрації, речовина отримують з високою чистотою. Очищення концентрату біологічно активної речовини здійснюють і іншими способами, наприклад, хромотографии, діалізу, екстракції, осадження, адсорбції або комбінації цих способів.
Для руйнування кальційактівного парагормона обробляють речовинами, які легко реагують з білковими речовинами або з поліпептидами. Для цього застосовують азотної кислоти, окис етилену, формалін.
Ін'єкційні розчини отримують з водних розчинів з концентрацією 0,05†"
5 мг / мл, з видаленням білкових речовин.
Готують ін'єкційний розчин стерильним фільтруванням. Мазі готують з концентрацією біологічно активного, вешества 0,01 †"I г / кг. Для цього використовують гідрофільні і гідрофобні основи мазей. Також готують свічки, для яких використовують масло какао або для синтетичних †"карбовакс. Концентрація біологічно активного вешества в свічках становить 0,05--5 мг в залежності від чистоти концентрату.
Готують також косметичні препарати, які в якості біологічно активного вешества містять речовину, що володіє гормональним дією. Ці косметичні препарати виготовляють з твердих або рідких концентратів вешества з відомими розчинниками, добавкою присадок, наповнювачів, розріджувачів і ексципієнтів в формі мазей, розчинів, кремів, емульсій; порошкоподібних сумішей, складів для розпилення.
50 концентрації інших мікроелементів, наприклад, CL (, F і інших.
B клінічної терапії речовина надає сприятливу дію на синдром
Сьегрена, на Rhino-laringo-pharingitis sicea, склеродермії, шкірний грибок, променеву еритему та інші хвороби.
Приклад 1. IO г підданого лиофилизации і розмеленого порошку залози обезжиривают відомим чином. Порошок перемішують з 25 мл ацетону при .До; ч (кімнатній температурі і фільтрують на скляному фільтрі. Потім добре віджатий порошок залози знову змішують з 25 мл хлороформу при кімнатній температурі і фільтрують на скляному фільтрі. Операцію повторюють. Потім віджате речовина знову суспендують в 25 мл абсолютного ацетону при кімнатній температурі і відсмоктують на скляному фільтрі. Отриманий порошок залози сушать у вакуумі при кімнатній температурі. Вага сухої речовини 7 †"9 г в залежності від вмісту жиру в вихідну речовину. Потім 10 г знежиреного, безводного порошку залози тричі екстрагують в 100 мл дистильованої води при кімнатній температурі протягом однієї години.
Між стадіями екстракції порошок залози відокремлюють від екстракту центрифугуванням.
Екстракти до переробки зберігають в атмосфері азоту при температурі 3 †"5 С. Водні витяжки мають позитивну реакцію щодо нингидрина, біурета і трихлороцтової кислоти. Потім водні витяжки збирають і закопують водний
50 / р-ний розчин трихлороцтової кислоти при постійному збовтуванні до тих пір, поки кінцева концентрація трихлороцтової кислоти не складе 15%. Після одночасовой витримки при 3 †"5 С осад трихлороцтової кислоти піддають центри фугування.
Верхній шар являє прозорий блідо-жовтий водний розчин, що дає негативну реакцію на біурет і трихлор оцтову кислоту, позитивну реакцік> па нпнгідрін.
Надлишок трихлороцтової кислоти v,: èляют послідовної екстракції при кімнатній температурі водним ефірним розчином. Екстракцію проводять 17 †"15 разів, щоб повністю видалити трихлоруксусную кислоту. Після останньої екстракції водна фаза повинна мати величину рН 4,5 †"5.
Водну фазу звільняють від, ефіру при помо (ци водострумного насоса при температурі не вище 30 С протягом 6 год. Звільнення від ефіру контролюють відсутністю запаху. Після цього водний розчин піддають ліофілізації і зберігають в закритому посуді. Препарат гігроскопічний. Вихід в перерахунку на загальний вага порошку залози (перед знежиренням) становить IOâ € "
15 / о (в залежності від вмісту жиру).
ример 2. За прикладом з водного екстракту знежиреної околощітовідной жсл зи готують екстракт, яка не содер> кит білка і осадитель. 5 г інертного до трихлоруксусной кислоті ліофілізату піддають гель-фільтрування | про на колонії з сефадексом G †"15. Маса колони 4,3 Х
Х! 44 см. Елюентом є вода. Швидкість потоку 6 мл / год. Розмір фракції 15 мл.
10 мкг / кг ваги тіла. Це речовина міститься в двох перших верхніх частинах гель-фільтрування. Поділ фракцій роблять у такий спосіб.
Спектрофотометрическое вимір абсорбції при> 80 нм, потім при 234 і 360 нм, після цього вимірюють електричну провідність, потім якісне дослідження на хлорид-іон з реактивом †"нітратом срібла.
Вимірюють величину рН з'єднаних фракцій. относягціхся до окремих вершин. Потім проводять дослідження з реактивом-Нінг рином і досліджують неозброєним оком на опалесценцію і забарвлення.
Вихід основної фракції числа туб 46†"
83 в перерахунку «а сухий необез> Кирену порошок околошітовідной залози становить приблизно 2 вЂ" 2,5 / р.
Приклад 3. Методика прикладу 2 з тією різницею, що обидва перших піку вловлюють в окремих основних фракціях. Таким шляхом отримують з 5 г несодержашего білка водного екстракту 302 мг основної фракції. і 555 мг основної фракції 11. Потім основну фракцію 11 знову піддають гельфільтрованію. 456 мг вешества наносять на колонку, вода застосовується як елюент. Розмір колонки 4,3 Х 144 см, швидкість потоку
50 мл / год, розмір фракції 10 мл, сефадексе
G †"15. Таким шляхом основну фракцію 11 поділяють на три інших верхніх частини.
SH †"СООН, вЂ" ОН. При дослідженні массспектрометром отримують такі характерні фрагменти: С7Н ,, М; 0 5; З-HgNgOg і С 4HqNO. Фракція містить і інші структури. Ця фракція має фізіологічне або терапевтичну дію вже при дозі 1 нм / кг ваги тіла. Продукт очищають хроматографією або іншими методами.
Вихід речовини 0,3 †"0,4 / q в перерахунку на сухий порошок околошітовідной залози. суха. Получак> т 1 г смолистого концентрату.
Приклад б. 50 г. ліофілізованого порошку залози знежирюють за прикладом 1.
Отриманий знежирений порошок залози (38 г) змішують з 40 мл 10О / р-ного розчину сечовини. Після одночасовой видержЗ5 ки суміш перемішують в 400 мл крижаної. оцтової кислоти і 400 мл ацетону. Її витримують протягом 1 год, потім до розчину додають інші 1200 мл ацетону і
11,2 мл нормального розчину гідроксиду натрію. Після осадження виробляють фільт40 вання через шар газу. До містить сечовину і ацетон екстракту додають 2 л ефіру. Суміш залишають на ніч і потім декантирують. Суспензію центрифугують, промивають 2 рази по 50 мл в суміші ацетону і ефіру (1: 1). Отриманий осад змішують з 200 мл IOg / О-ного розчину оцтової кислоти, осад розчиняють. потім додають
10 г хлориду натрію, з розчину випадає осад, який поглинається в 50 мл води.
Проводять діаліз 6 раз з 2 л води, зливають діалізну воду і залишок піддають
Приклад 5. 20 г порошку залози (підданого лиофилизации, незнежиреного) за прикладом 1 розчиняють у воді. Потім згущують звільнений від білка і ефіру водний розчин до 1/3 і екстрагують шляхом струшування 3 рази 1: 1 об'ємом хлороформу, а водну частину звільняють в вакуумі від хлороформу. Чи не містить хлороформу водний розчин згущують у вакуумі до
20 мл і при кімнатній температурі додають 5 обсягів ацетону. Розчин залишають на ніч на льоду. З майже безбарвної фази ацетону осаджують жовту маслянисту частина. Ацетоновий розчин відстоюють і жовте масляниста речовина сушать у вакуумі до постійної ваги. отримують
1,1 г жовтого смолистого концентрату. Ацетоновиі розчин випарюють у вакуумі до ліофілізації. Отримують 732 r твердого концентрату. Остаюшеесяв розчині після осадження хлоридом натрію і центрифугування речовина (197 мл) обробляють 40 мл
45 / р-ний трихлороцтової кислоти і потім центрифугують. Верхню фазу піддають діалізу 4 рази по 3 л води, випарюють у вакуумі і піддають ліофілізації.
Отримують 86 r концентрату.
Составнтель С. Малютнна
Замовлення 603 ць! Тнраж Т03 Передплатна
ІНІІПІ Державного коннтета З вета Мнністров СРСР яо справах нзОбретеннй н огнритнй
I l 303, Москва, Ж-35. Рауштная на6. д. 45
Фнлнал ППП «Патенту, r. Ужгород> вул. Проектна, 4
1. Спосіб яолучення Речовини, що володіє гормональним дією, який відрізняється тим, що околощнтовндную залозу ссавців висушують, подрібнюють, потім екстрагують водою, отриманий водний екстракт відокремлюють від твердих частинок, осаж8 дають нз нього білки і полнпептіди трихлороцтової кислотою, потім видаляють надлишок трнхлоруксусной кислоти серією екстракцнй водним розчином дналкнлового ефіру н цільової продукт необхідно чистити.
2, Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що водне екстракцню ведуть прн температурі 20 †"60 С.