Людина-павук - Головний герой, звичайний підліток, але після укусу генетично мутував павука знайшов надздібності. Від свого покійного дядька Бена він дізнався, що велика сила вимагає великої відповідальності. Його справжнє ім'я Пітер Бенджамін Паркер. Закоханий в Гвен, однак зрозумів це тільки в кінці 2-го сезону. Але був він весь 2-ий сезон разом з Ліз, тому що вона не відставала від Пітера. А Гвен не сказала Гаррі Озборна, що вона любить Пітера.
Гвен Стейсі - Дочка поліцейського, однокласниця і кращий друг Пітера. Вона таємно закохана в нього і зізналася у своїх почуттях в кінці 1-го сезону. У цьому серіалі вона, фактично, замінила Мері Джейн.
Ліз Аллен - дівчина з групи підтримки, колишня подружка Флеша. Вона закохалася в Пітера і зустрічалася з ним протягом 2-го сезону. Пітер все ж порвав з нею, коли зрозумів, що любить Гвен.
другорядні герої
Тітка Мей - Улюблена тітка Пітера, яка виховала його. Після смерті її чоловіка Бена Паркера, вона стала фактично єдиним родичем Пітера. Вони дуже близькі, і Пітер завжди намагається допомогти їй.
Джей Джона Джеймсон - запальний власник газети Daily Bugle, де працює Пітер. Постійно критикує Людини-павука і намагається виставити його злодієм.
Норман Озборн - батько Гаррі і глава OsCorp. За характером досить жорстокий, ніколи не вибачається. Співпрацював з Бігменом і іншими злодіями, замішаний у багатьох злочинах в Нью-Йорку.
Джордж Стейсі - капітан поліції, батько Гвен. Він досить добродушний і вірить, що Людина-Павук захищає місто.
Чорна кішка - Вона ж Феліція Харді. Злодійка, однак закохується в Людини-Павука і допомагає йому в деяких серіях, поки не з'ясовується, що її батько - злодій який колись убив Бена Паркера