За допомогою ПЛР в біологічному матеріалі вдається виявити нуклеотидні послідовності ДНК, типові для збудника коклюшу # 151; Bordetella pertussis. На відміну від культурального методу, ПЛР дозволяє ідентифікувати етіологічно значимий мікроорганізм навіть в тому випадку, коли в біологічному матеріалі є тільки мертві бактерії. Разом з тим, при використанні даного високотехнологічного методу не виключена можливість отримання хибно-позитивних та хибно-негативних результатів.
У клінічному перебігу коклюшу виділяють катаральну, пароксизмальную стадії і стадію одужання.
У катаральної стадії захворювання носить субклінічний характер, тобто типові клінічні прояви можуть бути відсутні, і захворювання вчасно годі й розпізнати. Кашель присутній, але носить перемежовується характер. Крім того, можуть спостерігатися катаральні явища, які часом буває важко відрізнити від типових симптомів звичайної респіраторної вірусної інфекції.
У другій стадії захворювання кашель набуває пароксизмальної характер: типові пароксизми закінчуються приступом инспираторного задухи або блювотою. Захворювання може протікати і в легкій формі (без характерних нападів кашлю) у раніше щеплених дітей, підлітків і дорослих. Пароксизмальні напади кашлю частіше виникають вночі, наростають по частоті і тяжкості проявів до моменту розпалу захворювання і персистируют протягом 2-6 тижнів.
Фаза одужання, що характеризується поступовим поліпшенням стану хворого, в середньому, триває від 7 до 10 днів (4-21 день). Нападоподібний кашель стає рідше і зазвичай зникає протягом 2-3 тижнів. Однак непароксізмальная кашель може турбувати пацієнта додатково протягом 2-6 тижнів, а іноді й довше.
Невакцинованих або минулі неповну вакцинацію діти молодше 12 місяців мають найвищий ризик розвитку важких і жизнеугрожающих ускладнень, аж до летального результату. У маленьких дітей кашель може мати мінімальну інтенсивність або навіть повністю бути відсутнім, при цьому апное може служити єдиним проявом захворювання.
Для зменшення ймовірності помилкового технічного виконання і невірної інтерпретації результатів ПЛР, які можуть привести до помилкового діагнозу, CDC рекомендує наступне:
- Проведення ПЛР-діагностики доцільно тільки у пацієнтів з типовими симптомами коклюшу. Відносно людей без типової симптоматики, навіть в разі тісного контакту з хворим на кашлюк, висока ймовірність помилково-позитивних результатів. Таким чином, прийняття рішення про проведення постекспозіціонной профілактики кашлюку після підтвердженого тісного контакту з хворою людиною не повинно грунтуватися на результатах ПЛР-діагностики матеріалу, отриманого від контактної особи.
- Найбільш оптимальні тимчасові рамки проведення ПЛР-діагностики # 151; це перші три тижні з моменту початку кашлю, оскільки після закінчення цього терміну кількість бактеріальної ДНК швидко знижується, що підвищує ймовірність помилково-негативних результатів. ПЛР-діагностика після, щонайменше, 5-денного курсу антибактеріальної терапії також може супроводжуватися помилково-негативними результатами. Однак реальна тривалість можливості отримання позитивних результатів після призначення антибіотиків точно не встановлена.
- Біологічний матеріал для постановки ПЛР повинен бути отриманий шляхом аспірації або взяття мазка з задньої стінки носоглотки. Матеріал з носової порожнини, як правило, є непридатним для проведення ПЛР-діагностики через неприйнятно низького кількість ДНК бактерій в даному матеріалі.
- В процесі проведення ПЛР-діагностики необхідно максимально виключити ймовірність контамінації біологічного матеріалу молекулами ДНК B. pertussis. є складовим компонентом деяких вакцин. Випадкове потрапляння молекул ДНК B. pertussis з навколишніх поверхонь може також послужити причиною хибно-позитивних результатів. Для профілактики перехресної контамінації в процесі приготування вакцин необхідно виконання наступних заходів:
- Приготування вакцин і проведення вакцинації в місцях, максимально віддалених від місця забору зразків для ПЛР-діагностики.
- Забір матеріалу повинні проводитися в рукавичках.
- Обов'язкове проведення дезінфекції з використанням 10% гіпохлориту натрію.
- Використання полужидкой транспортної середовища або транспортування отриманого матеріалу в сухому стані без транспортного середовища.
- Оскільки ПЛР-діагностика кашлюку не є стандартизованою методикою в клінічних лабораторіях, перед проведенням ПЛР-діагностики необхідно уточнити, які саме локуси (мішені) використовуються в даній конкретній лабораторії. Інтерпретація результатів ПЛР, особливо в зразках з високими значеннями порогових циклів, повинна бути проведена з урахуванням ознак і симптомів захворювання, а також доступною епідеміологічної інформації.
Методи постановки ПЛР, використовувані локуси (мішені), а також критерії інтерпретації кінцевих результатів в різних лабораторіях значним чином відрізняються один від одного. Крім того, відсутні уніфіковані граничні значення позитивного результату. Високі значення порогових циклів ПЛР зазвичай з'являються при низьких рівнях ампліфікованої ДНК, що може свідчити про наявність інфекції, але також може бути ознакою контамінації біологічного матеріалу молекулами ДНК ззовні під час забору матеріалу. Тому надзвичайно важливим є практичне застосування представлених рекомендацій з метою уніфікації підходів до проведення ПЛР-діагностики коклюшу.
Best Practices for Health Care Professionals on the use of Polymerase Chain Reaction (PCR) for Diagnosing Pertussis.
ПЛР-діагностика, коклюш, рекомендації, CDC