Температура дозируемой рідини і дозатора повинна бути однаковою
- Встановити необхідний обсяг рідини за допомогою операційної кнопки (не можна встановлювати значення обсягу за межі діапазону дозатора)
- Одягти наконечник і змочити його перед дозуванням 3-5 разів рідиною, яку будуть відбирати.
- Натиснути великим пальцем на операційну кнопку до першої зупинки.
- Опустити наконечник дозатора в розчин на глибину 2-3 мл і повільно звільнити кнопку (під час набору рідини дозатор тримати вертикально)
- Виштовхнути розчин з наконечника дозатора в пробірку шляхом натискання операційної кнопки до упору великим пальцем (дозуючи рідина, потрібно торкатися наконечником стінки пробірки, не допускаючи розбризкуючи і збиваючи дозується рідина)
- Зняти наконечник натисканням великого пальця на удалитель наконечника
- По закінченню роботи дозатор встановити в штатив
- Встановити необхідний обсяг рідини за допомогою операційної кнопки (не можна встановлювати значення обсягу за межі діапазону дозатора)
- Одягти наконечник і змочити його перед дозуванням 3-5 разів рідиною, яку будуть відбирати.
- Натиснути великим пальцем на операційну кнопку до упору.
- Опустити наконечник дозатора в розчин на глибину 2-3 мл і повільно звільнити кнопку (під час набору рідини дозатор тримати вертикально)
- Виштовхнути розчин з наконечника дозатора в пробірку шляхом натискання операційної кнопки до першої зупинки великим пальцем (дозуючи рідина, потрібно торкатися наконечником стінки пробірки, не допускаючи розбризкуючи і збиваючи дозується рідина)
- Зняти наконечник натисканням великого пальця на удалитель наконечника
- По закінченню роботи дозатор встановити в штатив
1 літр = 1000 мл
1 моль = 1000 ммоль
1 ммоль = 1000 мкмоль
Якісні реакції на білок (кольорові)
Ці реакції застосовуються для розпізнавання білкових речовин і визначення їх амінокислотного складу в різних біологічних рідинах, а саме:
- Визначення кількості білка в плазмі крові
- Визначення амінокислот в крові і сечі
- Для виявлення спадкових або набутих порушень обміну речовин у новонароджених
До кольоровим реакцій відносяться:
- Біуретова реакція. Це якісна реакція на пептидний зв'язок. Ця реакція є універсальною для всіх білків, так як вона відкриває наявність не менше 2-х пептидних зв'язків в білку. В основі биуретовой реакції лежить здатність пептидних зв'язків в лужному середовищі утворювати з сульфатом міді CuSO4 забарвлене комплексне з'єднання, колір якого залежить від довжини поліпептидного ланцюга. Розчин білка (нативного) дає синьо-фіолетового забарвлення.
- Ксантопротеиновая реакція. Це якісна реакція на циклічні амінокислоти, що містяться в білку. При додаванні до розчину білка концентрованої азотної кислоти HNO3 і нагріванні з'являється жовте забарвлення, яке в присутності лугу переходить в оранжеве. Сутність цієї реакції полягає в тому, що при наявності циклічних амінокислот у білку з'являється жовте забарвлення за рахунок нітровані бензольного кільця з утворенням нітросполук, що випадають в осад.
- Реакція Фоля. Ця якісна реакція на сірковмісні амінокислоти в білку (цистеїн, цистин, метіонін). Сутність цієї реакції полягає в тому, що амінокислоти містять сульфгідрильні групи -SH, піддаються лужному гідролізу з утворенням сульфіду натрію Na2S, який з солями свинцю утворюють осад сульфіду свинцю PbS чорного або бурого кольору. Ця реакція протікає в два етапи: на першому етапі відбувається відщеплення SH-групи амінокислоти і перехід сірки з органічної сполуки в неорганічне; на другому етапі якісне виявлення іонів сірки в розчині.
- Нінгідринова реакція. Ця реакція характерна для аміногруп -NH2 в альфа-положенні і обумовлена наявністю альфа-амінокислоти в молекулі білка. При нагріванні білка з водним розчином нингидрина відбувається розпад амінокислот на вуглекислий газ і аміак, відповідний амінокислоті альдегід і відновлений нингидрин, який потім конденсується зі своєю окіслонной формою і аміаком з утворенням забарвленого продукту, т. Е. З утворенням продута конденсації нингидрина з амінокислотою фіолетово синього або червоно-фіолетового кольору. Цей продукт називається дікетогідрінділідена-дікетогідріндаміна (Діда). Цю реакцію широко використовують в біохімічної лабораторії для кількісного визначення амінокислоти в біологічних рідинах (кров, сеча, спинномозкова рідина та ін.), А також для кількісного визначення білків і пептидів.
Лабораторна робота «Хімія білків»
Мета: вивчення складу білків. Кольорові реакції на виявлення білків і амінокислот
Досліджуваний матеріал: яєчний білок 1% розчин
Приготування досліджуваного матеріалу: білок курячого яйця фільтрують через марлю і потім розводять дистильованою водою у співвідношенні 1:10
Обладнання: водяна баня, термостат
Лабораторний посуд: штатив із пробірками, крапельниці.
Досвід №1. Біуретова реакція на пептидний зв'язок.
Принцип реакції: в основі реакції лежить здатність пептидних зв'язків в лужному середовищі утворювати з сульфатом міді комплексне з'єднання синьо-фіолетового кольору.
Реактиви: 1% розчин сульфату міді, 10% розчин гідроксиду натрію
Хід роботи: У пробірку внести п'ять крапель розчину яєчного білка, потім додати 1 краплю розчину сульфату міді, 3 краплі (надлишок) розчину гідроксиду натрію і перемішати. Вміст пробірки придбає синьо-фіолетове забарвлення
Завдання: Уявити пройдений досвід у вигляді малюнка і зробити висновок.
Досвід №2. Ксантопротеиновая реакція на циклічні амінокислоти
Принцип реакції: нітрування бензольного кільця циклічних амінокислот у білку азотною кислотою при нагріванні з утворенням нітросполук, яке випадає в осад жовтого кольору.
Реактиви: розбавлена азотна кислота
Хід роботи: у пробірку внести п'ять крапель розчину яєчного білка, потім додати три краплі азотної кислоти і нагріти на водяній бані. З'явиться осад жовтого кольору.
Завдання: Уявіть проведений досвід у вигляді малюнка і зробіть висновок. Напишіть рівняння реакції нітрування тирозину.
Досвід №3. Реакція Фоля на сірковмісні амінокислоти
Принцип реакції: амінокислоти містять сульфгідрильні групи -SH, піддаються лужному гідролізу при нагріванні з утворенням сульфіду натрію Na2 S, який з солями свинцю утворюють осад сульфіду свинцю PbS чорного або бурого кольору.
Реактиви: 5% розчин ацетату свинцю, 30% розчин гідроксиду натрію
Хід роботи: У пробірку внести п'ять крапель розчину яєчного білка, додати 1 краплю розчину ацетату свинцю, 5 крапель розчину гідроксиду натрію і нагріти на водяній бані. Після інтенсивного кип'ятіння з'являється чорний або бурий осад.
Завдання: Уявіть пройдений досвід у вигляді малюнка і зробіть висновок. Напишіть рівняння протікають реакція на цистеїн.
Лабораторна робота. Тема «Хімія білків»
Мета: Вивчення властивостей білків. реакції осадження
Білки в розчині зберігаються в нативному (природному) стані за рахунок факторів стійкості, а саме: заряду білкової молекули і наявності гідратної (водної) оболонки навколо її. В основі реакцій осадження лежить зняття заряду з білкової молекули і видалення водної оболонки навколо її.
Досвід №1. Зворотне осадження білків «висолювання»
Принцип методу. Оборотне осадження білків полягає в тому, що при видаленні факторів осадження, білки, що випали в осад знову розчиняються у воді і набувають свої нативні властивості, що підтверджує биуретовая реакція.
Висолювання проводять за допомогою нейтральних розчинів концентрованих солей лужних і лужно-земельних металів. Випадання різних білків в осад залежить від молекулярної маси і величини їх молекул, від їх заряду.
При Висолювання в першу чергу в осад випадають великі і щільні молекули білка (глобуліни) при меншій концентрації солей, а альбуміни висаліваются більш концентрованими розчинами солей.
Досліджуваний матеріал: нерозведений яєчний білок.
Реактиви: насичений розчин хлориду натрію, порошок хлориду натрію, 1% розчин сульфату міді, 10% розчин гідроксиду натрію.
Хід роботи: у пробірку налити 30 крапель нерозведеного яєчного білка і додати 30 крапель насиченого розчину хлориду натрію. Утворюється осад. Через 5 хвилин відфільтрувати осад. Скляною паличкою зняти осад з фільтру в пробірку, розчинити його, додавши п'ять крапель дистильованої води, і провести біуретову реакцію. У пробірку з фільтратом додати порошок хлориду натрію до повного насичення розчину, тобто до тих пір поки не припиниться розчинення солі. Утворюється осад. Осад відфільтрувати, зняти з фільтра, розчинити у воді і провести з ним біуретову реакцію.
1. Як називається оборотне осадження білків?
2. Вкажіть які білки випадають в осад у першу чергу?
3. Що сталося з яєчним білком в процесі висолювання?
4. Яка реакція доводить, що білок не втратив свої нативні властивості при висолювання, як ця реакція проводиться і що вона визначає в білку?
5. Розчини солей яких металів використовують при висолювання?
6. За рахунок яких чинників стійкості білки зберігаються в нативному стані?
Досвід №2 «Необоротне осадження при кип'ятінні»
Принцип методу. Необоротне осадження білків полягає в тому, що при видаленні факторів осадження білки втрачають свої нативні властивості в зв'язку з глибоким порушенням структури білків (вторинної та третинної), тобто відбувається денатурація білків.
Найбільш повне і швидке осадження спостерігається в ізоелектричної точці, тобто при значенні pH середовища, коли сумарний заряд білкової молекули дорівнює нулю.
При нагріванні білка понад 50-60º настає теплова денатурація, яка полягає в розгортанні поліпептидного ланцюга і руйнуванні гідратної оболонки. При цьому розчин білка мутніє.
Курячий білок володіє кислими властивостями, має негативний заряд і осідає в слабокислою середовищі (ізоелектрична точка його дорівнює pH 4,8).
У сильнокислой і лужної середовищі денатурований білок в осад не випадають, так як в сильнокислой середовищі білок набуває позитивний заряд, а в лужному середовищі негативний заряд білка збільшується.
Досліджуваний матеріал: 1% розчин яєчного білка
Обладнання: водяна баня, штатив із пробірками, крапельниці.
Реактиви: 10% розчин гідроксиду натрію, 1% і 10% розчини оцтової кислоти
Хід роботи: У штативі встановити чотири пробірки, пронумерувати і долити в кожну пробірку по 10 крапель 1% розчину яєчного білка. Потім на водяній бані: першу пробірку нагріти до кипіння, в другу пробірку додати одну краплю 1% розчину оцтової кислоти і нагріти до кипіння, в третю пробірку додати одну краплю 10% розчину оцтової кислоти і нагріти до кипіння, в четверту пробірку додати одну краплю 10 % розчину гідроксиду натрію і нагріти до кипіння. Проаналізувати вміст усіх пробірок після їх нагрівання. (Перша і друга пробірки - білок згорнувся, в третій і четвертій - немає.)
Завдання: Вкажіть в якій пробірці білок випав в осад, а в яких пробірках осадження білка не спостерігалося. Поясніть і зробіть висновок.
Досвід №3. Необоротне осадження білків солями важких металів
Принцип методу: Білки при взаємодії з солями свинцю, міді, ртуті, срібла денатуруються і випадають в осад. В основі цього процесу лежить адсорбція металу на поверхні білкової молекули з утворенням нерозчинного комплексу.
При надлишку деяких солей (сульфату міді), спостерігається розчинення утвореного осаду. Це пояснюється тим, що на поверхні денатурованого білка відбувається накопичення іонів металу і появу позитивного заряду на білковій молекулі. При надлишку солей срібла, ртуті розчинення білка не відбувається.
Досліджуваний матеріал: 1% розчин яєчного білка
Реактиви: 10% розчин сульфату міді, 5% розчин ацетату свинцю, 5% розчин нітрату срібла.
Хід роботи: у штативі встановити три пробірки, пронумерувати і долити в кожну пробірку по п'ять крапель 1% розчину яєчного білка. Потім в першу пробірку додати 1 краплю розчину сульфату міді, в другу пробірку 1 краплю розчину ацетату свинцю, в третю 1 краплю розчину нітрату срібла.
Спостерігайте за випаданням осаду в пробірках. Потім до утворився опадів додати: в першу пробірку 10 крапель сульфату міді, в другу пробірку 10 крапель розчину ацетату свинцю, в третю пробірку 10 крапель розчину нітрату срібла. Спостерігайте, в яких пробірках відбувається розчинення осаду (розчиняється тільки в першій).
Завдання: Вкажіть при дії надлишку яких солей металу відбувається розчинення осаду. Поясніть і зробіть висновок.