Відомо, що захворювання, викликані мікроорганізмами, широко поширені. Інфекційні агенти грають роль майже в 75% хвороб людини. До них відносяться: бактерії, гриби, віруси і паразити.
Діагностика інфекційних захворювань є однією з найскладніших проблем в клінічній медицині. Відзначаються тенденція до підвищення питомої ваги стертих і, навпаки, важких, а також атипових, затяжних форм інфекційних хвороб, наростання частоти змішаних інфекцій бактеріальної та бактеріально-вірусної етіології. Ці особливості пов'язані зі зміною всіх взаємозалежних факторів, що беруть участь в розвитку інфекційної хвороби. Іншим став мікроорганізм-збудник, змінився макроорганизм, значно змінилися і умови зовнішнього середовища. Причинами цього є зміни загальної і специфічної реактивності організму, імунізація населення, широке впровадження в практику антибактеріальних препаратів (1,2).
Лабораторні методи дослідження при ряді нозологічних форм відіграють провідну, а в цілому ряді клінічних ситуацій вирішальну роль не тільки в діагностиці, а й у визначенні кінцевого результату захворювання. Роль діагностики полягає в тому, що ранній, точний, вичерпний і максимально конкретний діагноз є основою для проведення раціональної та ефективної терапії, дозволяє в більшості випадків передбачити можливі варіанти подальшого перебігу та результатів захворювання, служить початковим моментом в проведенні своєчасних і спрямованих протиепідемічних та профілактичних заходів .
Діагностика інфекційних захворювань майже завжди передбачає використання комплексу лабораторних методів.
В сучасних умовах діагностика інфекційних хвороб зберігає всі свої традиційні риси, що сформувалися за останні десятиліття. У той же час вона характеризується безперервним вдосконаленням вже знайдених прийомів і методів розпізнавання хвороб і пошуками нових, більш ефективних, в тому числі експресних.
Розрізняють такі методи мікробіологічної діагностики бактеріальних інфекцій: бактериоскопический (мікроскопічний), бактеріологічний (культуральний), біологічний (експериментальний), імунологічний (серологічний), алергічний.
Основним методом є бактеріологічне дослідження. Він полягає в посіві досліджуваного матеріалу на живильні середовища, виділення чистої культури збудника і його ідентифікації. Визначення виду збудника проводять за рядом ознак: морфології, тинкторіальними властивостями (здатність забарвлюватися різними барвниками), культуральними властивостями (характер росту на штучних поживних середовищах), біохімічними властивостями (ферментація вуглеводів і білків). Остаточну приналежність виділеної культури до певного виду мікроорганізмів встановлюють після вивчення антигенної структури, використовуючи різні імунологічні реакції (аглютинації, преципітації, нейтралізації і ін.). В цілому бактеріологічний метод дослідження є багатоетапний бактеріологічне дослідження, яке триває від 18- 24 годин до декількох діб.
Бактеріологічний метод має безліч переваг. Одним з перших є вивчення з його допомогою якісного складу мікрофлори досліджуваного біологічного матеріалу. Для постановки діагнозу важливе значення має кількість мікроорганізмів в 1 г досліджуваного речовини і 1 мл рідини, так зване загальне мікробне число, що вимірюється в колініеобразующіх одиницях (КУО / г або КУО / мл). Для цього проводять посів певної кількості досліджуваного матеріалу на щільні поживні середовища, після інкубації в термостаті підраховують кількість колоній, що виросли (колонія - це видиме ізольоване скупчення представників одного виду мікроорганізмів, що утворюється при розмноженні однієї колонієутворюючих одиниць на щільному живильному середовищі).
До найбільш вражаючих результатів, досягнутих мікробіологією, відносяться створення і впровадження в практику антибіотиків. У зв'язку з широким розповсюдженням лікарсько-стійких форм бактерій, для призначення раціональної хіміотерапії необхідно визначення антибіотикограми - чутливості до антибактеріальних препаратів виділеної чистої культури збудника. Для антибіотикограми використовують або метод паперових дисків, або метод серійних розведень.
Метод паперових дисків базується на виявленні зони придушення розмноження бактерій навколо дисків, які просочені антибіотиками. У разі застосування методу серійних розведень антибіотик розводять в пробірках з рідким живильним середовищем, потім засівають в пробірки однакову кількість бактерій. За відсутності або наявності росту бактерій проводять облік результатів. За допомогою методу серійних розведень проводиться визначення мінімальної переважної концентрації (МІК) антибіотика, яка служить для розрахунку терапевтичної дози препарату.
Бактеріологічний метод дозволяють поісследовать механізми антибіотикорезистентності виділених культур (метіціллінрезістентних, продукція b-лактамаз). Також можна оцінити концентрацію антибіотика в осередку інфекційного процесу, зміна антібіотікочувствітельності в динаміці лікування.
Для лікаря-клініциста важливо знати, наскільки ефективно проведене антимікробну лікування, тому можливо оцінювати динаміку зміни якісного та кількісного складу в ході захворювання і терапії. За допомогою бактеріологічного методу дослідження можна визначити, який результат інфекційного процесу - одужання, носійство, хронізація.
Основними збудниками інфекційних захворювань в даний час виступає умовно-патогенні мікроорганізми, роль яких в генезі захворювання складно довести. Тому важливо оцінити патогенність виділеної умовно-патогенної мікрофлори.
Організм людини заселений представниками так званої нормальної мікрофлори, зміна якісно-кількісного складу котрої може грати роль в розвитку дисбіотичних порушень. Тому можна проводити дослідження мікрофлори організму людини - в нормі і при дисбіозах, межмікробние взаємини при терапії еубіотиками.
Будь-які медичні установи схильні до ризику розвитку внутрішньолікарняної інфекції. Діагностика її, визначення збудника, виявлення джерела інфекції, докази ідентичності штамів - складова частина роботи бактеріологічної лабораторії (3).
Сучасний етап розвитку мікробіології характеризується новими відкриттями, зробленими при вивченні механізмів формування патологічних станів. Основними вважають встановлення факту існування бактерій в організмі людини в складі різних спільнот, які отримали загальну назву біоплівки, і виявлення опосередкованої дії мікробів на організм людини. Властивості бактерій в біоплівки відрізняються від таких у ізольованих клітин, що позначається на всіх аспектах взаємодії мікроба і навколишнього середовища, включаючи фактори імунного захисту і антимікробні препарати (4,5).
Біоплівка - добре організоване, що взаємодіє співтовариство мікроорганізмів (Quorum sensing - почуття кворуму). 99% бактерій в природних екосистемах, 80% бактерій при інфекційних захворюваннях існують у вигляді біофільми.
Біоплівка пов'язує клітини, органічні та неорганічні субстрати, підвищує адгезію бактерій до епітелію і будь-яких поверхонь (живого і неживого походження), знижує ефективність антибактеріальної терапії, допомагає виживати бактеріям в мінливого зовнішнього середовища. Мікроорганізми в біоплівки більш стійкі до дії як антибактеріальних препаратів, так і факторів неспецифічного протиінфекційного захисту організму людини.
Механізми збільшення стійкості бактерій до антибіотиків в біоплівках пов'язані з обмеженням проникнення антибіотиків через неї, зменшенням швидкості ділення бактерій, внаслідок чого залишається менше мішеней для дії антибіотиків, генетичними змінами у персистирующих в біоплівки бактерій.
За допомогою бактеріологічного методу можна вивчати механізми захисту мікроба від імунної системи організму, стратегію виживання його в макроорганизме - персистенцию. Мікроби мають механізми захисту від імунної системи людини - антілізоцімную, антікомплементарние, антілактоферріновую активність.
Таким чином, в даний час бактеріологічний метод діагностики дозволяє досліджувати багато аспектів життєдіяльності хвороботворних бактерій, механізми їх розвитку, виживання і придушення.