Збудниками черевного тифу і паратифів (А, В) є бактерії роду Salmonella, до складу якого входять два види: Salmonella enterica з 6 підвидами (включаючи збудники черевного тифу, паратифів, сальмонельозів - всього понад 2400 сероварів) і Salmonellabongori (рідко зустрічаються сальмонели). збудник черевного тифу позначається як Salmonella серовара typhi (Salmonella enterica spp. enterica ser. typhi, колишнє назва-ня Salmonella typhi), паратифів А -Salmonella серовара ParatyphiA, паратифів В-Salmonella серовара Paratyphi В.
Методи мікробіологічної діагностики черевного тифу і паратифів представлені в схемі 9.
Вибір матеріалу і методи мікробіологічної діагностики цих захворювань залежить від стадії патогенезу. На першому тижні захворювання і протягом усього гарячкового періоду збудник можна виділити з крові (гемокультура), з кінця другої і на третьому тижні - з сечі (урінокультура) і випорожнень (копрокультура). Високий відсоток висівання збудника відзначається при дослідженні кісткового мозку (виділення міелокультури). Вдається виявити сальмонели в скаріфікатов розеол (розеоло-культура), лікворі, вмісті дві-надцатіперстной кишки, секційному матеріалі. У реконвалесцентів досліджують випорожнення і жовч (виділення білікультури). Починаючи з другого тижня захворювання проводять серологію-чеський дослідження. Мікроскопічне дослідження матеріалу від хворого не проводиться, тому що всі ентеробактерії (як патогенні, так і непатогенні, наприклад, E.coli) за морфологічними властивостями ідентичні (рис. 14).
Бактеріологічне дослідження є основним лабораторним методом діагностики черевного тифу і паратифів.
Раннім і надійним методом бактеріологічної діагностики є виділення збудників з крові (гемокультура) .Взятую в асептичних умовах кров (15-20 мл) засівають на 10% жовчний бульйон або середу Рапопорт (10% жовчний бульйон, 1% маніту або 2% глюкози, 1 % індикатора Андреде; в середу поміщений поплавок для уловлювання газу) в співвідношенні крові і середовища 1:10 накопичення сальмонел. Посіви інкубують при 37 0 С 18 -24 год. При наявності сальмонел маннит або глюкоза розщеплюється з утворенням кислоти і середовище приобрета-ет червоний колір; поява в поплавці газу свідчить про газоутворення - характерній ознаці паратіфозних бактерій.
Схема 9.Мікробіологіческая діагностика черевного тифу і паратифів.
Мал. 14. а - кишкова паличка (E.coli ув. Х1350), б - збудник черевного тифу (S.typhi. Ув. Х630) в мазках з чистої культури. Забарвлення по Граму. Грам безладно розташовані палички середніх розмірів.
Копрокультури виділяють шляхом посіву фекалій на середу Плоскірєва, Ендо, вісмут-сульфіт агар і середовища накопи-лення (селенітовий, магниевую, тетратіонатную, Кауфмана, Мюллера) з подальшою 18 -24-годинний инкубацией при 37 ° С.
На 2-й день на середовищах Плоскірєва, МакКонкі або Ендо виростають безбарвні (лактозоотріцательние) колонії, а на вісмут-сульфіт-агарі - чорні. Колонії сальмонел па-ратіфа А пофарбовані взелений колір, так як не утворюють сірководень. З типових колоній готують мазок, фарбують за Грамом і після мікроскопії залишок колонії пересівають на середовище Ресселя або Олькеницкого. При відсутності типових колоній на ті ж середовища засівають матеріал з середи збагачення.
На 3-й день дослідження враховують характер росту на середовищі Ресселя або Олькеницкого (фарбування стовпчика середовища Ресселя в синій колір, середовища Олькеницкого в жовтий в результаті ферментації глюкози в анаеробних умовах; скошена частина середовища не змінена - відсутність ферментації лактози), готують мазок для перевірки чистоти виділеної культури, виконують пересів в середовища «строкатого» ряду для вивчення біохімічних властивостей (див. табл. 10), після чого
ставлять орієнтовну, а потім розгорнуту РА. Орієнтовну РА ставлять з сумішшю О-сироваток, що включає аглютиніни до О-антигенів 2, 4, 7, 8, 9, 3-10. При відсутності РА з цією сумішшю використовують суміш монорецепторними О-сироваток до рідкісних груп сальмонел (антитіла до антигенів 11, 13, 15, 19, 23 і т.д.) При отриманні позитивних результатів культуру відчувають окремо з кожною з О-сироваток, що входять до складу суміші. Після цього культуру агглютинируют з Н-сироватками 1 фази (a, b, i, c, d, g, m) а потім 2 фази (1,2; 1,5), встановлюючи антигенну формулу виділеної сальмонели відповідно до схеми Кауфмана- Уайта (таблиця 9). Ця схема розроблена на підставі вивчення у сальмонел О і Н антигенів і застосовується з метою антигенної ідентифікації патогенних сальмонел.
Таблиця 9. Антигенна структура сальмонел (скорочена схема Кауфмана-Уайта)
Позначення: (+) - наявність властивості, (-) - відсутність властивості, К - утворення кислоти, КГ - утворення кислоти і газу.
Аналогічно проводиться дослідження випорожнень уперебо-лівші черевним тифом і паратифом осіб, а також у працівників детс-ких установ, харчування та водопостачання з метою виявлення бактеріоносіїв.
Серологічне дослідження. Для серологічної діагности-ки черевного тифу і паратифів ставлять ре-акцію Відаля (розгорнута РА) з метою визначення відповідних антитіл в крові хворого. Антитіла до збудників черевного тифу, Параті-скіфів А і В виявляються в сироватці крові хворих з 8- 10-го дня захворювання. Досліджувану сироватку крові розводять дворазово в 6 паралельних рядах пробірок від 1: 100 до 1: 1600 на обсязі 1 мл, куди вносять по 2 краплі ОН і О- черевнотифозними, паратифозної Аі паратифозної В діагностикумів. О-діагностикуми отримують кип'ятінням або обробкою спиртом суспензії соот-відних культур, ОН діагностикуми - обробкою формаліном. Для контролю антигену діагностикуми вносяться в тій же дозі в 1 мл фізіологічного розчину, а для контролю сироватки ис-товують сироватку в розведенні 1: 100 без додавання діагностикумів.
О-антитіла мають діагностичне значення, вони з'являються в крові на другому тижні захворювання і зникають до його кінця, а Н-аглютиніни наростити-ють до кінця захворювання. і діагностичної цінності не мають. Н-антитіла можуть виявлятися також у перехворілих і вакцинованих. Ряд черевнотифозних вакцин викликає також вироблення Vi - і Про антитіл. Діагностичний титр О-антитіл в реакції Відаля у неімунізованих осіб 1: 100, а при відсутності типової клінічної картини - 1: 200. Однак титр антитіл у хворих може бути нижче діагностичного в зв'язку з раннім призначенням антибіотиків або наявністю у хворого вторинного імунодефіциту. Таким чином, негативна реакція Відаля не виключає тіфопаратіфозних захворювання. З іншого боку, підвищені титри О-антитіл можуть бути обумовлені щепленнями. Тому при підозрі на черевний тиф або паратифи доцільно досліджувати сироватку крові якомога раніше (до появи антитіл), а потім в динаміці (з інтервалом 7-12 днів) для виявлення наростання титру антитіл більш ніж в 4 рази. Якщо сироватка крові хворого агглютинирует одночасним-аме два або три види діагностикумів, враховують титр аглютинації: специфічна аглютинація відбувається зазвичай з більш високими, а групова - з більш низькими разведениями сироватки.
Більш чутливі РНГА з еритроцитарними груповими (А, В, С, Д, Е) і монорецепторними діагностикумами, а також ІФА, які ставлять з парними сироватками в динаміці захворювання.
Vi-антитіла частіше виявляються у бактеріоносіїв сальмонел брюш-ного тифу, тому що Vi-антиген сприяє тривалій персистенції збудника в організмі. При обстеженні осіб, підозрілих на носійство черевнотифозних паличок, застосовується РНГА з еритроцитарних Vi-діагностикумом для визначення відповідних антитіл і їх тотожність-ності до класу IgG.