Якість зображення в значній мірі залежить також від правильного освітлення. Існує кілька різних способів освітлення препарату при мікроскопії. Найбільш поширеним є спосіб установки світла по Келлер: 1). встановлюють освітлювач проти дзеркала мікроскопа; 2). включають лампу освітлювача і направляють світло на плоске (!) дзеркало мікроскопа; 3). поміщають препарат на предметний столик мікроскопа; 4). закривають дзеркало мікроскопа листком білого паперу і фокусують на ньому зображення нитки лампи, пересуваючи патрон лампи в освітлювал ?? е; 5). прибирають аркуш паперу з дзеркала; 6). закривають апертурну діафрагму конденсора. Переміщаючи дзеркало і злегка пересуваючи патрон лампи, фокусують зображення нитки на апертурними діафрагми. Відстань освітлювача від мікроскопа повинно бути таким, щоб зображення нитки лампи було дорівнює діаметру апертурними діафрагми конденсора (спостерігати апертурну діафрагму можна за допомогою плоского дзеркала, розміщеного з правого боку підстави мікроскопа). 7). відкривають апертурну діафрагму конденсора, зменшують отвір польовий діафрагми освітлювача і значно зменшують напруження лампи; 8). при малому збільшенні (10х), дивлячись в окуляр, отримують різке зображення препарату; 9). злегка повертаючи дзеркало, переводять зображення польової діафрагми, ĸᴏᴛᴏᴩᴏᴇ має вигляд світлої плями, в центр поля зору. Опускаючи і піднімаючи конденсор, домагаються отримання різкого зображення країв польовий діафрагми в площині препарату (навколо них повинна бути видна кольорова облямівка); 10). розкривають польову діафрагму освітлювача до країв поля зору, збільшують напруження нитки лампи і злегка (на 1/3) зменшують розкриття апертурними діафрагми конденсора; 11). при зміні об'єктива вкрай важливо перевірити настройку світла.
Після закінчення налаштування світла по Келлер не можна змінювати положення конденсора, розкриття польовий і апертурними діафрагми. Освітленість препарату можна регулювати тільки нейтральними світлофільтрами або зміною напруження лампи за допомогою реостата. Зайве відкриття апертурними діафрагми конденсора може привести до значного зниження контрасту зображення, а недостатнє - до значного погіршення якості зображення (появі дифракційні кілець). Для перевірки правильності розкриття апертурними діафрагми вкрай важливо видалити окуляр і, дивлячись в тубус, відкрити її таким чином, щоб вона закривала світиться поле на одну третину. Для правильного висвітлення препарату при роботі з об'єктивами малого збільшення (до 10х) вкрай важливо відкрутити і зняти верхню лінзу конденсора.
Увага! При роботі з об'єктивами, що дають велике збільшення - з сильними сухими (40х) і імерсійними (90х) системами, щоб не пошкодити фронтальну лінзу, при фокусуванні користуються наступним прийомом: спостерігаючи збоку, опускають об'єктив макровінтом майже до зіткнення з препаратом, потім, дивлячись в окуляр, макровінтом дуже повільно піднімають об'єктив до появи зображення і за допомогою мікровінта проводять остаточну фокусування мікроскопа.