Мікроскопічна діагностика трихофитии, мікроспорії і фавуса
Гриби дивляться в нефарбованих, так званих нативних препаратах. Для просвітлення препаратів, т. Е. Для розчинення рогових мас, користуються 10-30% розчином їдкого лугу (КОН або NaOH). Найкраще працювати з 20% розчином. Можна просвітлювати препарати в нашатирному спирті.
При приготуванні мікроскопічного препарату волосся підігрівати не рекомендується, так як при цьому може порушитися взаємини гриба з волосом і тим самим ускладниться діагностика. Очищений від лусочок і кірок волосся прояснюють в 20% розчині лугу за 5-10 хв (трохи довше - при фавусе). Луска і кірки можна підігріти, але не до кипіння лугу.
При дослідженні грубих рогових мас, особливо з долонь і підошов, а також рогових мас з нігтьових пластинок рекомендують користуватися методом збагачення, запропонованим Н. А. Черногубова. За цією методикою патологічний матеріал збирають у маленьку пробірку Відаля (або центрифужную пробірку), заливають 20% розчином лугу на 1-2 мм вище рівня патологічного матеріалу і кип'ятять до утворення однорідної гомогенної маси. Потім досліджуваний матеріал центрифугують або добу відстоюють. Осад піддають дослідженню за звичайною методикою. Можна користуватися спрощеною модифікацією цього методу, коли замість кип'ятіння пробірку з матеріалом, залитим 10-20% розчином KOH або NaOH, залишають на добу при кімнатній температурі. Потім пастерівської піпеткою осад переносять на предметне скло і мікро-скопіюють.
Взяття патологічного матеріалу. Успіх мікроскопічної діагностики багато в чому залежить від правильності збору патологічного матеріалу для мікроскопічного дослідження. Нерідко підозрілий матеріал, зібраний в амбулаторії, посилають на дослідження поштою; в цьому випадку матеріал для дослідження треба відбирати ретельніше.
Якщо є поразка тільки гладкої шкіри в вигляді вогнищ округлих обрисів з гіперемійованим валиком по периферії, на якому можуть розташовуватися бульбашки, скоринки, а в центрі вогнищ відбувається дозвіл процесу; що полягає в утворенні різного типу лущення, то зішкріб (скальпелем, браншей ножиць) слід робити з периферії вогнищ, гле найлегше виявити нитки міцелію або спори гриба. При ураженні нігтьових пластинок рогові маси для дослідження зрізають ножицями (якщо вражений вільний край нігтя) або беруть з середніх і глибоких шарів нігтьової пластинки скальпелем або бормашиною, Поразка гладкої шкіри або нігтьових пластинок дозволяє оголити нитки міцелію або спори гриба, але не представляється можливим визначити, який гриб спричинив захворювання. При ураженні волосся на голові по відношенню гриба до волосу дуже часто, але не завжди можна встановити збудника захворювання і намітити правильний план лікування та план проведення протиепідемічних заходів. Ось чому особливо важливо знати, який матеріал слід брати для дослідження при грибковому ураженні волосистої частини голови. Так, при поверхневій трихофітії слід знаходити коротко (на 1-2 мм над загальним рівнем шкіри) обламані і мають вигляд ком, гачків, знаків питання ( «пеньки») волосся. Іноді вони приховані під лусочками, після зняття яких можна виявити уламки волоса. При хронічній трихофітії в потиличній і скроневих областях слід шукати волосся, обламані на одному рівні з гладкою шкірою ( «чорні точки»), і дістати їх з фолікула гістологічної голкою або краєм скальпеля. При інфільтративно-нагноительной трихофитии волосистої частини голови на дослідження слід брати волосся по периферії вогнищ, так як в центрі вогнища гній лізує гриби. Але по периферії вогнищ поряд з ураженими можуть бути і здорове волосся. Остаточну відповідь дається після дослідження великої кількості препаратів. При мікроспорії, обумовленої пухнастим і іржавим мікроспорумамі, досліджують високо обламані волосся (5-8 мм від загального рівня шкіри), біля основи яких нерідко видно білястий чехлик, що складається із спор гриба. При скутулярной, сквамозної і импетигинозная формах фавуса волосистої частини голови на дослідження беруть довгі, що не обламані, але витончення волосся, що втратили природний блиск і нагадують перуку або клоччя. Слід брати волосся, не пронизують в центрі скутули, а що знаходяться поруч з нею або далеко від неї.
Приготування препарату. Об'єкт дослідження (волосся, лусочки, кірки, рогові маси нігтьових пластинок і т. Д.) Поміщають на предметне скло. Шкірні та нігтьові лусочки роздрібнюють на ньому, а довге волосся (при фавусе) ділять на кілька коротких сегментів (дотиком ребра нагрітого скальпеля). Потім 3-4 підозрілих волоска або достатню кількість лусочок поміщають на середину предметного скла, наносять 1-2 краплі лугу. Матеріал, крім волосся, злегка підігрівають над полум'ям пальника до появи білого обідка кристалів лугу по периферії. Наклавши покривне скло, приступають до мікроскопії спочатку під малим збільшенням, а потім під великим.
Мікроскопічна картина. При ураженнях гладкої шкіри в лусочках, а також в соскобе рогових мас з уражених нігтьових пластинок виявляють нитки міцелію різної довжини і товщини, іноді розгалужені і септірованние. Нерідко знаходять суперечки круглої, квадратної, овальної або неправильної форми лежать ланцюжком (артроспори) або вільно лежать. Відповідь з лабораторії (наприклад: «в надісланих на дослідження лусочках знайдені нитки міцелію і спори гриба») дозволяє встановити грибкову природу захворювання, але не вирішити питання про вид збудника. При дослідженні волосся, уражених грибами типу Tr. endothrix ( «пеньки», «чорні точки»), волосся представляється суцільно заповненим ланцюжками з круглих або квадратних суперечка, розташованих паралельними рядами. Межі волоса чіткі. Ланцюжки з суперечка слід шукати по краю волосся. Таку картину дають дві культури гриба: Tr. violaceum і Tr. tonsurans (crateriforme). Клінічно це може бути поверхнева або хронічна трихофітія волосистої частини голови. При ураженні грибами типу Tr. ectothrix волосся зовні оповитий спорами, що лежать паралельними ланцюжками. При цьому в одних випадках суперечки дрібні, за розміром нагадують суперечки мікроспорума; це Tr. ectothrix microides (культура Tr. gypseum). В інших випадках суперечки більші, за розмірами нагадують суперечки трихофітону ендотрікс; це Tr. ectothrix megasporon (культура Tr. verrucosum, seu faviforme). При дослідженні волосся, уражених мікроспорумамі, вони представляються оповитий дуже дрібними круглими спорами, розташованими хаотично (мозаїчно), а не ланцюжками, як при ураженні тріхофітонамі. При натисканні на покривне скло можна побачити, як суперечки «сповзають» з волоса і розташовуються купками по боках волоса. Усередині нього виявляють в невеликій кількості септірованние нитки міцелію, розташовані по довжині волосся, і невеликі скупчення суперечка.
Мікроскопічна картина Tr. schonleinii в волосі досить характерна. Tr. schonleinii - ендотрікс, м. тобто розташовується всередині волосся. Однак волосся не уражений суцільно по поперечнику; ділянки здорової частини волоса чергуються з ураженими, тому волосся при фавусе не обламуються. Нитки міцелію різної довжини і товщини, розділені перегородками на неоднаковій відстані один від одного. Спори різних розмірів: круглі або багатокутної форми, великі і дрібні (все це називається поліморфізмом елементів).
Крім того, звертає на себе увагу наявність великої кількості крапельок жиру і повітря в препараті, хоча вони можуть зустрічатися і при інших грибах.