А. Бактеріологічний (за класичною схемою з подальшою
біологічної пробою - див. нижче).
Для виявлення токсину і його типу в реакції нейтралізації.
Для виявлення токсину двом мишам вводять досліджуваний фільтрат в кількості 0,5 мл внутрибрюшинно, іншим двом мишам вводять суміш, що складається з 0,5 мл фільтрату і 0,2 мл суміші діагностичних моновалентних Протиботулінічні сироваток типу А, В, С, Е (з'єднують по 0,5 мл сироватки кожного типу). Перед введенням суміш випробуваного матеріалу і сироваток витримують при кімнатній температурі протягом 30 хвилин. Спостереження за тваринами ведуть протягом 4 днів. При наявності токсину гинуть перші дві миші, інші залишаються живі.
При виявленні токсину ставлять розгорнуту реакцію нейтралізації для визначення типу токсину. Для цього в 5 пробірок розливають по 2,4 мл випробуваного фільтрату і в кожну пробірку додають по 0,6 мл сироватки окремо типу А, типу B, типу С і типу Е. У 5-ю пробірку додають 0,6 мл фізіологічного розчину. Суміш після 30 хвилин витримки при кімнатній температурі вводять внутрішньочеревно по 1 мл 2 мишам з кожної пробірки окремими шприцами. Спостерігають за тваринами протягом 4 днів. При наявності токсину виживають миші, що отримали суміш токсину і гомологичной сироватки, інші миші гинуть. Тип сироватки, нейтралізуючу токсин, вказує на типову приналежність токсину.
В. Прискорені методи діагностики ботулізму
а) виявлення токсину за допомогою РПГА (на еритроцитах адсорбируют антитоксин)
б) виявлення токсину за допомогою реакції пригнічення фагоцитозу. Ботулінічний токсин різко пригнічує фагоцитарну здатність лейкоцитів у зв'язку з наявністю у токсину лейкотоксіческіх властивостей. При цьому фагоцитарний показник зменшується в 3, 5, 10 і навіть 20 разів. При додаванні до крові, що містить токсин, гомологичной антитоксичної сироватки фагоцитарная здатність лейкоцитів відновлюється.
Тема: МІКРОБІОЛОГІЧНА ДІАГНОСТИКА анаеробної інфекції (газова анаеробна інфекція)
1. Морфологія анаеробних бактерій. Мікроскопія препаратів-мазків з культур патогенних анаеробів.
2. Вивчення особливостей росту культур анаеробів на різних поживних середовищах.
3. Мікробіологічний діагноз анаеробних інфекцій. Розбір методів діагностики газової гангрени. Посів досліджуваного матеріалу за способом Вейон-Віньяль, Фортнера, на середу Кітт-Тароцці. Реєстрація результатів посіву матеріалу, що містить анаеробні мікроби, макро- і мікроскопія виросли культур.
4. Прискорене виявлення С. реrfringens. Демонстрація зростання на середовищі Вільсон-Блера, середовищі Кітт-Тароцці і на молочному середовищі.
5. Демонстрація імунопрепаратів, що застосовуються для профілактики і лікування анаеробних інфекцій.
1. Морфологія анаеробних бактерій. Мікроскопія препаратів-мазків з культур патогенних анаеробів.
Готові препарати-мазки з чистих культур патогенних анаеробів забарвити за Грамом, промікроскопувати. Препарати замалювати. Звернути увагу на характер розташування суперечка, ставлення до фарбування.
2. Вивчення особливостей росту культур анаеробів на різних поживних середовищах.
Демонстрація зростання анаеробів на середовищах Вілліса-Хоббс, Китта-Тароцці, Вільсон-Блера, Цейсслера, на молоці.
3. Мікробіологічний діагноз анаеробних інфекцій. Розбір методів діагностики газової гангрени.
Для виділення чистих культур анаеробів береться ранові відокремлюване. Дослідження починається з попередньої мікроскопії вихідного матеріалу. Для цього готують мазки і фарбують по Граму. Звернути увагу на наявність капсул. Препарати замалювати.
Посів проводиться на регенеровану, тобто попередньо прогріту на киплячій водяне бані протягом 10-20 хв для звільнення від розчиненого в ній кисню, середу Кітт-Тароцці. Пастерівської піпеткою взяти краплю гною і, нахиливши пробірку з середовищем Кітт-Тароцці, по верхній стінці обережно ввести краплю гною на дно пробірки так, щоб не потрапило повітря.
Зареєструвати результати посіву матеріалу, що містить анаеробні мікроорганізми. Приготувати препарат-мазок, забарвити за Грамом і замалювати.
4. Прискорене виявлення С. реrfringens. Демонстрація зростання на середовищі Вільсон-Блера, середовищі Кітт-Тароцці і на молочному середовищі.
Посів ранового на середу Вільсон-Блера. Середа Вільсон-Блера попередньо розплавляється і видається студентам в пробірках. Перед посівом її необхідно охолодити до температури 40-45 ° С. Ранові відокремлюване попередньо розвести в стерильному фізіологічному розчині. Для цього краплю досліджуваного матеріалу внести в пробірку з фізіологічним розчином. Потім після перемішування з цієї пробірки краплю внести в пробірку з середовищем Вільсон-Блера, ретельно перемішати шляхом вдування і видування вмісту і швидко набрати середу в трубки Вейон-Віньяль. Трубки покласти в горизонтальному положенні і дати їм охолонути. Кінці трубок закрити ватою.
6. Демонстрація препаратів, що застосовуються для профілактики і лікування анаеробних інфекцій.