2. Методи індикації при зараженні лабораторних тварин.
3. Методи ідентифікації вірусів при зараженні лабораторних тварин.
4. Список літератури.
і експериментальна інфекція
Методи дослідження, пов'язані із застосуванням тварин, називаються біологічними, або експериментальними, а використовувані для цієї мети тварини - експериментальними, або лабораторними. Найбільш широко в мікробіологічних лабораторіях використовують кроликів, морських свинок, білих мишей і щурів.
Лабораторні тварини є донорами, у яких систематично беруть кров для отримання сироватки, плазми, еритроцитів, лейкоцитів, необхідних при постановці багатьох серологічних реакцій і для приготування кров'яних поживних середовищ. Лабораторні тварини служать також для діагностики деяких інфекційних захворювань, моделювання експериментальних гострих і хронічних інфекційних процесів, встановлення вірулентності і токсигенности досліджуваних штамів бактерій, визначення активності приготованих вакцин і дослідження їх на нешкідливість.
Способи зараження лабораторних тварин
Залежно від мети дослідження користуються різними способами зараження: внутрішньошкірним, підшкірним, внутрішньом'язовим, внутрішньоочеревинному, внутрішньовенним, пероральним або інтраназальним. При перерахованих способах, за винятком перорального і інтраназанального, зараження здійснюється за допомогою шприца.
Техніка взяття у лабораторних тварин крові
і отримання з неї окремих інгредієнтів
Невелика кількість крові одержують у кроликів, морських свинок з вен вуха, у мишей і щурів - з вен хвоста, а великі кількості - з серця. В особливих випадках вдаються до повного або тотальному, знекровлення, після якого тварина гине.
Виділення вірусів на лабораторних тваринах
В даний час лабораторні тварини застосовуються порівняно рідко для виділення вірусів з інфекційного матеріалу. Цей метод майже повністю замінений виділенням вірусів в культурах клітин і курячих ембріонах, оскільки це більш економічно, менш трудомістким і дозволяє швидко враховувати результати дослідження.
Лабораторних тварин використовують головним чином для виділення вірусів, які викликають розвиток цитопатичних змін в культурах клітин і не розмножуються в курячих ембріонах, а саме: для вірусів Коксакі А, збудників трансмісивних інфекцій і лимфоцитарного хоріоменінгіту. Для виділення зазначених вірусів застосовують білих мишей. Методи зараження тварин, облік результатів дослідження і застосовуються методи серологічної ідентифікації виділених вірусів зазначені у пунктах "Ентеровірусні інфекції», «Лімфоцитарний хориоменингит».
МЕТОДИ ІДЕНТИФІКАЦІЇ ВІРУСІВ
Для індикації вірусів у інфекційному матеріалі можуть бути використані наступні методи.
- Мікроскопічні: а) вірусоскопія; б) виявлення внутрішньоклітинних включень; в) метод іммунофлюорісценціі.
- Біологічні, що включають виділення вірусів: а) в культурах клітин;
б) в курячих ембріонах; в) на лабораторних тваринах.
- Методи гемаглютинації і гемадсорбції: а) реакція гемаглютинації;
б) реакція гемадсорбції.
Ідентифікація вірусів здійснюється за допомогою серологічних методів, що включають: а) реакцію гальмування гемаглютинації; б) реакцію затримки гемадсорбції і нейтралізації з урахуванням результатів по гемадсорбції; в) реакцію зв'язування комплементу; г) реакцію нейтралізації; д) реакцію преципітації в тілі; е) метод імунофлюоресценції.
Мікроскопічні методи. Вірусоскопія. За допомогою світлового мікроскопа можуть бути виявлені тільки великі віруси, розміри яких перевищують 150 нм. Розпізнавання вірусів, що мають менші розміри, можливо лише в електронному мікроскопі.
Для виявлення великих вірусів може застосовуватися світлова, фазово-контрастна і люмінесцентна мікроскопія. Найбільш часто використовують світлову мікроскопію забарвлених мазків і відбитків. Найкращим методом забарвлення для виявлення вірусів є сріблення по Морозову. Метод заснований на осадженні частинок срібла, що призводить до збільшення розмірів вірусів. Для забарвлення по Морозову готують мазки і відбитки з інфекційного матеріалу, джерелом якого найчастіше служить вміст шкірних висипань, мокрота, носоглоточная слиз. Віруси фарбуються в темно-коричневий колір і мають вигляд однорідних округлих утворень, розташованих поодинці або у вигляді скупчень на світло-коричневому тлі препарату.
Вірусоскопія є швидким орієнтовним методом лабораторної діагностики вірусних захворювань. Однак вона не дозволяє встановити точну природу збудника, і для його ідентифікації необхідні інші методи дослідження.