Сеча, яка містить жовчні пігменти, набуває характерну зеленувато-бурого забарвлення ( «колір пива»). Відрізнити цю забарвлення від кольору насиченою сечі дуже просто: при збовтуванні сечі, що містить жовчні пігменти, піна виявляється також пофарбованої в жовтий колір, в сечі ж насичено-жовтою (концентрованої) піна залишається білою.
Реакції, які звичайно використовуються для визначення жовчних пігментів, мало чутливі і нерідко при безсумнівною білірубінурія виявляються негативними. Наявність жовчних пігментів все ж виявляється в таких випадках при мікроскопічному дослідженні, так як формені елементи при цьому виявляються забарвленими в жовтий колір.
Реакція на білірубін Гмелина (Gmelin) в видоизменении Розенбаха проводиться таким чином. Профільтровивается кілька порцій сечі через один і той же фільтр; фільтрувальна папірець виймається з воронки і розправляється на тарілці або чашці Петрі. На неї наноситься крапля концентрованої азотної кислоти, що містить азотної. При позитивній реакції серед виходять навколо краплі концентричних кольорових кілець обов'язково має бути зелене (так як синє і фіолетове кільця виходять і при окисленні інших пігментів). Слід пам'ятати, що зелені кільця дає також антипірин.
Кілька більш чутлива проба Розіна з йодною настоянкою. На 10-15 см3 сечі, налитої в пробірку, нашаровується близько 1 см 1% спиртового розчину йоду. При цьому на кордоні між рідинами виходить зелене кільце.
Жовчні кислоти (глікохолевой до таурохолевая) містяться, мабуть, в сечі у випадках механічної та паренхіматозної жовтяниці і відсутні при гемолітичних жовтяниці. Все ж клінічна цінність визначення жовчних кислот в сечі поки спірна.
Частина проб заснована на тому, що наявність в сечі жовчних кислот зменшує поверхневий натяг її. Так само як реакція Гея (Hay) з сірчаним кольором: сеча наливається в широкий циліндр; для порівняння в другій циліндр наливається свідомо нормальна сеча; на середину поверхонь тієї та іншої сечі впадає по щіпці сухого сірчаного кольору. У нормальній сечі порошок залишається на поверхні, в присутності жовчних кислот частки його опускаються на дно.
На цьому ж принципі заснований і так званий сталагмометріческій спосіб (грец. Stalagma - крапля і metron - міра). Справа в тому, що розмір краплі прямо пропорційний поверхневому натягу рідини, і, отже, при зниженні його число крапель в одному і тому ж обсязі збільшено. Для дослідження служить сталагмометра Траубе, що представляє собою точно калібровану, частіше вигнуту під прямим кутом трубку з розширенням між двома мітками, що вказують точний її обсяг. На приладі вказані його ємність і кількість крапель води, що випливають з нього при 15 ° С. Відзначається зазвичай відносне поверхневий натяг у вигляді дробу, де чисельник буде число крапель досліджуваної рідини, а знаменником - число крапель дистильованої води, взятої в тому ж обсязі.
Поверхневий натяг сечі виявляється зниженим не тільки при наявності жовчних кислот, а й при цілому ряді процесів, що протікають з розпадом білків.
Индикан (або індоксіл-сірчана кислота) в нормальній сечі міститься в незначній кількості і звичайними реакціями не відкривається. Джерелом його служить один з продуктів розпаду білків - триптофан; в кишечнику він переходить в індол, який всмоктується в кров і по ворітної вени потрапляє в печінку; тут індол окислюється в індоксіл і, з'єднавшись з сірчаною кислотою, дає індоксіл-сірчану кислоту, що видаляється нирками. Так як для освіти індікана потрібні білки, то природно, що при рясної білкової їжі індіканурія вище, ніж при вуглеводної. На посилене утворення його впливають також різні ненормальні гнильні процеси в кишечнику, а також порушення рухової здатності кишечника - тривалі запори, стенози, непрохідність кишок. Крім того, підвищена індіканурія спостерігається і при гнильних процесах, що локалізуються поза кишечника, - при гнійному плевриті. гангрени легкого, гнильному бронхіті. розпадається ракової пухлини і т. д.
Визначення індікана засноване на наступному принципі: міцна соляна кислота розкладає індоксіл-сірчану кислоту на її складові частини, а звільнився індоксіл окислюється тими чи іншими речовинами в синє індиго, яке розчиняється в хлороформі.
Частіше за інших завдяки своїй простоті застосовується реакція Обермейера. Реактивом служить міцна соляна кислота (уд. Вага. 1,19), в 1 л якої розчиняються 2 г полуторахлорістого заліза (ferrum sesquichloratum). Так як реактив дуже димить, реакцію краще проводити в витяжній шафі. Сеча повинна бути добре профільтрована. До 4-5 см3 її додається рівну кількість реактиву Обермейера і 0,5-1 см3 хлороформу. Пробірка енергійно струшується. У разі позитивної реакції краплі хлороформу, що впали на дно, фарбуються в синій колір. Так як застосовуваний для цієї реакції окислювач діє дуже повільно, при малій кількості індікана реакція може виявитися позитивною не відразу, а через більш-менш тривалий термін.
Заважає реакції присутність в сечі йоду, фарбувального хлороформ в червоний колір, і брому, фарбувального його в жовтий колір.
Діазореакція Ерліха (Ehrlich). Хімічна природа речовин, завдяки яким в ряді випадків виходить позитивна діазореакція, не з'ясована остаточно. Відомо тільки, що вони являютш продуктами білкового розпаду (наприклад гістілін). Реакція виявляється незмінно позитивною при цілому ряді інфекційних захворювань-черевному і висипному тифах, кору, туберкульозі; нерідко діазореакція спостерігається при скарлатині, дифтерії, легеневому туберкульозі. і в таких випадках вона має несприятливе прогностичне значення; З не гарячкових захворювань реакція буває позитивною при лейкемиях, декомпенсованих вадах серця, при кахектіческая станах. Існує думка, що позитивної діазореакція притаманне мале діагностичне, але серйозне прогностичне значення.
Деякі лікарські речовини (фенацетин, антипірин, морфій і його похідні, сальварсан, атофан) можуть дати фарбування, схоже на таке при діазореакція. З іншого боку, речовини, що містять дубильну кислоту (танін, таннальбін), і похідні фенолу (креозот, гваякол, салол), можуть приховати позитивну реакцію там, де вона є. Тому перед виробництвом діазореакція всі зазначені ліки повинні бути скасовані.
Для виробництва реакції до 8-10 см3 сечі додається рівну кількість приготовленої суміші реактивів; рідина збовтувати до утворення піни, а потім до неї додається близько 1 см3 аміаку. При позитивній реакції сама рідина і піна фарбуються в яскраво червоний колір, в іншому випадку виходить жовте забарвлення. У сумнівних випадках пробірка залишається на добу, причому реакція оцінюється як позитивна, якщо виходить осад, верхній шар якого буде пофарбований в синій, зелений або чорний колір.
Суть реакції полягає в тому, що азотистая кислота in statu nascendi виходить при змішуванні реактивів, утворює з сульфаниловой кислотою сульфодіазобензол - речовина, яке, з'єднуючись з розташованими в сечі органічними речовинами, дає хромоген, окрашивающийся в лужному середовищі в червоний колір.
Діастаза (амілаза). У нормальних умовах діастаза, фермент підшлункової залози, міститься в сечі в невеликій кількості. При порушенні відтоку секрету підшлункової залози в дванадцятипалу кишку діастаза посилено надходить в кров і тому в більшому, ніж в нормі, кількості виводиться з сечею. Визначення проводиться за способом Вольгемута. У здорових людей кількість діастази в сечі коливається від 32 до 64 одиниць. У патологічних умовах можуть виходити значно більші цифри-до 3000 одиниць.
Аскорбінова кислота. Методи визначення засновані на її редуцирующей здатності. В основу найбільш поширеного способу Тильманса покладена окислювально-відновна реакція між аскорбіновою кислотою і індикатором, так званим 2-6-діхлорфенол-індофенолу (або, як кажуть, - фарбою Тильманса). Визначення ведеться методом титрування.
Для дослідження сеча збирається за добу. Щоб уберегти аскорбінову кислоту від руйнування, необхідно збирати сечу в темну скляну (або іншу, але не металеву) посуд, в яку заздалегідь наливається кілька мілілітрів соляної кислоти (50%) для збереження кислого середовища і кілька мілілітрів хлороформу в якості протигнильними речовини. Зазвичай виділяється кілька міліграмів аскорбінової кислоти за добу.
Піровиноградна кислота. Потреба в її визначенні обумовлена тим, що нестача в організмі вітаміну B1 веде до порушення вуглеводного обміну і накопичення в організмі піровиноградної кислоти. Тому виявлення у хворого більшого, ніж в нормі, кількості піровиноградної кислоти можна з певними застереженнями оцінювати як ознака гіповітамінозу В1.
Принцип визначення заснований на тому, що пировиноградная кислота належить до числа так званих бісульфітовязивающіх речовин. Бісульфіт береться в надлишку. Техніка визначення зводиться до повторного титрування спочатку децінормального, а до кінця реакції - сантінормальним розчином йоду в присутності індикатора - крохмалю. Визначення проводиться в порції сечі, взятої з добового її кількості. За норму прийнято вважати 300-400 мг.
Мікроскопічне дослідження сечі
У сечі знаходиться в підвішеному стані більшу або меншу кількість клітинних елементів, причому деякі з них зустрічаються майже в кожній сечі, присутність інших вказує на те чи інше патологічний стан. Крім організованих елементів, в сечі можуть зустрічатися кристалічні або аморфні опади солей. Певне уявлення про кількість зважених організованих або неорганізованих елементів дає звичайний огляд сечі, так як їм обумовлена ступінь її прозорості.
Приготування осаду. Для мікроскопічного вивчення осаду його потрібно приготувати по можливості концентрованим. Найбільш примітивний спосіб - просте відстоювання сечі - застосовується рідко, так як, по-перше, вимагає порівняно довгого часу і, по-друге, не гарантує осідання всіх зважених в сечі елементів. Зазвичай для цього користуються центрифугуванням сечі в електричних, водяних або ручних центрифугах.
Центрифуги, що застосовуються в клініко-діагностичних лабораторіях, мають 4, рідше 2 металеві гільзи. У них вставляються так звані центрифужні пробірки з сечею, причому важливо дотримуватися таких правил:
1) якщо в пляшці, в якій доставлена сеча, встиг утворитися на дні осад, треба перенести його в пробірку за допомогою довгої піпетки; якщо ж сеча не встигла відстоятися, перед відливанням її в пробірку сечу потрібно гарненько перемішати;
2) вставляти пробірки слід в протилежні гільзи, попередньо ретельно врівноважити їх; якщо досліджується одна сеча, в парну пробірку, природно, можна налити воду;
3) наливати сечу в пробірку потрібно в такій кількості, щоб рівень її не доходив до країв на 2-3 см;
4) пускати центрифугу потрібно обережно, збільшуючи число обертів поступово.
Тривалість центрифугування визначається кількістю оборотів, яке може дати центрифуга. Для центрифугування сечі зазвичай застосовуються центрифуги »дають близько 1000-1500 оборотів в хвилину. Центрифугувати при цьому досить 10 хвилин.
Вийнявши пробірку з центрифуги, потрібно одним рухом перекинути її отвором вниз, щоб злити рідину; при обережному ж зливання сечі весь осад змиється нею.