Діагноз на криптоспоридіоз встановлюють на підставі лабораторних досліджень фекалій (прижиттєво) і патологічного матеріалу (посмертно) з урахуванням епізоотологічних, клінічних і патологоанатомічних даних.
Для дослідження в лабораторію направляють:
свіжі проби фекалій масою близько 10 г з прямої кишки, взяті від 10-20 підозрюваних в захворюванні тварин, проби досліджують в день відбору;
проби патматеріалу від трупів - зіскрібки і мазки-відбитки з уражених місць кишечника або ділянки тонкого кишечника, які необхідно досліджувати не пізніше 6 годин після загибелі тварини.
Приготування мазка зі свіжих фекалій. На знежирене предметне скло наносять краплю фекалій, розбавляють краплею фізіологічного розчину, розподіляють тонким шаром (без натиску!). Отриманий мазок висушують при кімнатній температурі.
Застосування флотаційних методів. Пробу фекалій масою 3 г поміщають в стакан об'ємом 50 мл, заливають невеликою кількістю насиченого розчину хлориду натрію (400 г на 1 літр гарячої води, щільність розчину 1,18 г / мл) або сульфату цинку (400 г на 1 л води, щільність розчину 1,24 г / мл) або сумішшю Павласека (хлорид цинку - 220 г, хлорид натрію - 210 г, вода - 800 мл). Ретельно розмішують паличкою, додають розчин до країв склянки, фільтрують через сито і відстоюють протягом 15-20 хв. Потім металевою петлею знімають 15-20 крапель з поверхневою плівки, переносять на предметне скло, роблять тонкий мазок і висушують на повітрі.
Фіксація мазків. На висушений мазок наносять кілька крапель етилового (метилового) спирту і фіксують протягом 10-15 хвилин до повного випаровування спирту. Потім мазок забарвлюють одним із таких способів.
Забарвлення мазків за Цілем-Нільсеном. Для приготування карболового фуксину Циля в ступку вносять фуксин основний - 2г, додають 2-3 краплі гліцерину, розтирають, ретельно перемішують при поступовому додаванні спирту етилового 96 ° - 12 мл, карболової кислоти - 5 г і води дистильованої - 100мл. Розчин зливають в склянку з щільною пробкою, поміщають на добу в термостат при температурі 37 ° С і фільтрують через паперовий фільтр.
Зафіксовані мазки забарвлюють протягом 20 хв в розчині карболового фуксину, промивають в проточній воді, злегка висушують і наносять на скло 7-10% розчин сірчаної кислоти на 30-60 секунд для знебарвлення. Потім промивають в проточній воді і дофарбовують мазок 5% розчином малахітового зеленого протягом 1-2 хвилин.
Забарвлення мазків сафранін по Кюстера. Готують окремо 3% розчин сафраніну і 5,6% розчин КОН в дистильованої воді. Перед застосуванням готують робочий розчин: беруть 5 крапель свіжоприготованого розчину сафраніну і змішують з 1,5 мл розчину КОН.
Фіксований мазок забарвлюють робочим розчином сафраніну протягом 5 хв, промивають водою, знебарвлюють 0,5% розчином сірчаної кислоти протягом 15 секунд, промивають водою, дофарбовують 5% розчином малахітового зеленого на 10% етиловому спирті протягом 10-15 секунд, промивають водою , висушують на повітрі.
Забарвлення мазків за Романовським-Гімзою. Робочий розчин фарби готують із розрахунку 1-3 краплі готової фарби на 1 мл води (рН = 7,0-7,2). На один препарат використовують 3-4 мл розведеної фарби.
Фарбують фіксовані мазки протягом 20-30 хв, після чого їх промивають дистильованою водою і висушують.
Оцінка результатів забарвлення. Висушені мазки переглядають під великим збільшенням мікроскопа, з використанням иммерсионного об'єктива.
- за Цілем-Нільсеном - кислотостійкі ооцисти криптоспоридий округлої форми. 4-5 мкм, яскраво-червоного кольору різних відтінків; вони добре помітні на загальному зеленому тлі мазка.
- по Кюстера - ооцисти фарбуються в блідо-рожевий колір.
- за Романовським-Гімзою - округлі ооцисти не фарбується або фарбуються слабо, всередині них по периферії помітні спорозоїти подовженої форми, злегка зігнуті, блідо-блакитного кольору з червоною гранулою.
Оцінка інтенсивності інвазії в середньому по 10 полях зору мікроскопа:
+ - низька (1-3 ооцисти);
++ - середня (до 25 ооцист);
+++ - висока (понад 25 ооцист).
Посмертний діагноз на криптоспоридіоз представляє певні складності: у зв'язку з дрібними розмірами ооцист, їх зовнішньою схожістю на мазках-відбитках з краплями жиру, еритроцитами та ін. А також швидким аутолизом. Обов'язкова умова - недопущення заморожування і відтавання проб патматеріалу. Мазки-відбитки і зіскрібки фіксують етанолом і забарвлюють за Цілем-Нільсеном, потім переглядають під великим збільшенням мікроскопа, з використанням иммерсионного об'єктива (5; 13).
У досліджуваних мазках ооцисти криптоспоридий слід відрізняти від інших збудників, що викликають ентерити молодняка. Ооцисти еймерій в мазках - різної форми, значно більші за криптоспоридий, всередині бувають помітні 4 спороцисти, що містять по 2 спорозоїта. Яйце гельмінта - велике, овальне, кругле або бочонковідниє, з оболонкою складної будови (1).