Мікроскопічний метод при дизентерії не застосовує-ся з огляду на морфологічного подібності шигелл з іншими ентеробактеріями.
Бактеріологічний метод є основним методом лабораторної діагностики дизентерії. Досліджуваний матеріалзасевают на середовища Плоскірєва і Ендо в чашках Петрі, а також на селенітовий середу для накопичення, з якої через 16- 18 год роблять пересів на зазначені щільні поживні середовища. Посе-ви вирощують в термостаті при 37 0 С 18 - 24 годин.
На другий день вивчають характер колоній. Безбарвні лактозоотріцательние гладкі колонії шигел пере-сівби на одну з поліуглеводних середовищ (Олькеницкого, Ресселя, Кліглера) для накопичення чистої культури. На 3-й день враховують характер росту на поліуглеводной середовищі, а також Перес-ють матеріал на диференціальні середовища (Гисса і ін.) Для біохімічної ідентифікації виділеної куль-тури. Визначають антигенну структуру виділеної культури за допомогою ОРА з метою її ідентифікації до рівнів виду і серовар. На 4-й день враховують результати біохімії-чеський активності (табл. 14).
Таблиця 14. Біохімічні властивості шигел
Позначення: «до» - ферментація субстрату з утворенням кислоти, «+» - наявність ознаки, «-« - відсутність ознаки, «±» - непостійний ознака.
Шигели, на відміну від ешерихій, є нерухомими мікроорганізмами, вони не ферментують лактозу, глюкозу розкладають без освіти газу, не декарбоксилируется лізин. Для серотипування спочатку ставлять РА на склі з сумішшю сироваток проти пре-володіють в даній місцевості видів і варіантів шигелл, а потім РА на склі з монорецепторними видовими сироватками. Визначають також чутливість виділеної культури до полівалентна дизентерійної бактеріофагу і антибіотиків. З епідеміологи-чеський метою визначають фаговар і коліціновар виділених шигелл. Одним з властивостей шигел є їхня здатність викликати кератит у морських свинок (кератокон'юнктівальная проба)
Серологічний метод. Для визначення антитіл в крові хворих на дизентерію (зазвичай на хронічну форму) застосовують РНГА з еритроцитарної-ми шигеллезной діагностикумами. Діагностичні титри: до шигеллам Флекснера у дорослих - 1: 400, у дітей до 3 років - 1: 100, у дітей старше 3 років - 1: 200, до решти шигеллам - 1: 200. Реакцію ставлять, як правило, повторно з сиворот-кою крові, взятої не менше ніж через 7 днів; діагностичне значення має наростання титру антитіл в чотири і більше разів.
Експрес-методи при дизентерії - пряма і непряма РІФ, реакція ко-аглютинації, ІФА, РНГА з анти еритроцитарних діагностикумами для швидкого виявлення шигелл в досліджуваному матеріалі (зазвичай в фекаліях), а також ПЛР.
Самостійна робота студентів
1. Вивчити основні етапи виділення чистої культури шигел. Врахувати посіви на середовища Плоскірєва, Левіна, Олькеницкого (демонстрація). Відзначити наявність лактозоотріцательних безбарвних колоній на середовищах Плоскірєва, Левіна.
2. Провести контроль чистоти виділеної культури шигел. З середи Олькеницкого приготувати мазок, забарвити його по Граму і промікроскопувати. Промікроскопувати і замалювати де-монстраціонние препарати збудників дизентерії Sh.dysenteriae, Sh.flexneri, Sh.sonnei - грамнегативні палички із закругленими краями;
3. Ідентифікація виділеної культури шигел:
· За антигенними властивостями - постановка і облік РА на склі з сумішшю видових агглютинирующих сироваток Sh.dysenteriae, Sh.flexneri, Sh.boydii, Sh. sonnei і культу-рій, виділеної на середовищі Олькеніпкого. Облік РА на склі з видовими дизентерійними сироватками;
· По ферментативним властивостями - облік біохімічної активності і фаголізабельність виділеної культури шигел, (демонстрація).
4. Коліціногенотіпірованіе. Врахувати пробу за визначенням коліціногенотіпа виділеної культури (демонстрація). Техніка постановки описана в розділі «Генетика мікроорганізмів».
5. Визначення чутливості виділеної культури до анти-біотика методом паперових дисків (демонстрація).
6. Вивчити біопрепарати, що використовуються для діагностики, лікування і профілактики бактеріальної дизентерії та холери:
· Агглютинирующие адсорбовані сироватки до шигеллам Sh.dysenteriae, Sh.flexneri, Sh.boydii, Sh.sonnei. Використовуються для постановки реакції аглютинації при ідентифікації шигел.
· Дизентерійний бактеріофаг таблетований. Використовується для профілактики і лікування дизентерії.
· Діагностикуми еритроцитарні з шигелл Флекснера і Зонне. Використовуються для постановки РНГА при серодіагностики ді-зентеріі.
· Вакцина дизентерійна ШІГЕЛЛВАК, з липополисахарида шигелл Зонне.