Ентеровіруси - мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень

Сторінка 75 з 91

У цю групу входять віруси незначні за своїми розмірами. До ентеровірусів відносяться вірус поліомієліту, Коксакі, ECHO, вірус ящура і ін. Ентеровіруси складають одну групу, так як мають ряд загальних властивостей: морфологія, малі розміри, наявність інфекційної РНК, стійкість до ефіру, локалізація в кишечнику хворих людей і вірусоносіїв (кишкові віруси ).

А. Вірус поліомієліту

Вірус стійкий до кислоти шлункового соку (виявляється в екскрементах хворих).
Крім мавп, експериментальний поліомієліт отримано також у щурів, хом'яків і білих мишей.
Патогенез і клініка. Джерелом інфекції є хвора людина, особливо заразливий в кінці інкубаційного і в розпалі гострого періоду хвороби. Хворі люди і вірусоносії виділяють вірус з випорожненнями. Збудник поліомієліту короткочасно також знаходиться на слизовій оболонці носоглотки хворого (останні дні інкубації і перші дні хвороби). Передається поліомієліт переважно аліментарним, а також повітряно-крапельним шляхом. Є дані, що підтверджують передачу заразного початку через воду, молоко і мухами.
Вхідними воротами інфекції є слизові оболонки верхніх дихальних шляхів і травного тракту. Інкубаційний період може тривати від 2-3 днів до 3 тижнів. Захворювання починається раптовим підвищенням температури і загальними інфекційними симптомами, до яких нерідко приєднуються катаральні явища з боку слизових оболонок (ангіна, кашель, нежить, біль у горлі). Основний симптом захворювання з'являється на 5-й день хвороби і полягає в розвитку паралічів, переважно нижніх кінцівок.
При благополучних випадки паралічі іноді проходять, але частіше залишаються і роблять дітей інвалідами. У 10-15% випадків хвороба закінчується летально.
Крім описаної важкої форми поліомієліту (паралітичної), зустрічаються ще дві форми захворювання легші з успішним результатом: 1) абортивна і 2) Непаралітична (менінгеальна).
Імунітет. Перенесене захворювання залишає після себе міцний імунітет. У крові перехворілих виявляються специфічні нейтралізуючі вірус імунні тіла. У механізмі імунітету антитіла не відіграють істотної ролі. Захворювання може спостерігатися у осіб з великою кількістю антитіл.
Імунітет при поліомієліті обумовлений, ймовірно, не гуморальними, а іншими, можливо, місцевими тканинними факторами.
Лабораторна діагностика. Екскременти хворих і змив з носоглотки при вирусоносительстве збирають в широкогорлі невеликі флакончики і доставляють в лабораторію в посуді з льодом або в 50% гліцерині.
З випорожнень готують 10% суспензію в фізіологічному розчині, струшуючи їх в колбі з намистом протягом 5 хвилин. Центрифугують 30-40 хвилин, надосадову рідину відділяють градуйованою піпеткою і на кожен мілілітр до неї додають по 1000 ОД пеніциліну і 500 ОД стрептоміцину для знищення фекальної мікрофлори.
Через 1-2 години стояння при кімнатній температурі заражають три пробірки з культурою тканини нирковий епітелій мавп або ембріона людини, клітини Нер-2 і т. Д.). У кожну з цих пробірок вносять по 1 мл суспензії фекалій і 1 мл живильного середовища і ставлять в похилому положенні в термостат на 1 годину для контакту вірусу з клітиною. Після цього всю рідину з пробірок видаляють, щоб попередити можливість пошкодження клітин токсичними продуктами фекалій, і додають по 1,5 мл живильного середовища. Ставлять в термостат на 2-14 днів нерухомо або в обертовий барабан. Під час обертання пробірок культура тканини постійно
омивається живильним середовищем і звільняється від шкідливих продуктів обміну.
Наявність цитопатогенного ефекту (зміна форми клітин, поява зерен пігменту) вказує на присутність вірусу в досліджуваному матеріалі в тих випадках, коли Цитопатогенні ефект зберігається в наступних пасажах.
Носоглотковий змив після обробки (0,2-0,5 мл) вносять в пробірку з культурою тканини в обсязі 1,5 мл.
Для визначення типу виділеного вірусу культуральну рідину, що містить вірус, змішують з сироватками, що містять антитіла до вірусу I, II і III типів. Потім кожної сумішшю заражають культуру тканини. Якщо типова сироватка нейтралізує виділений вірус, т. Е. Клітини культури тканини залишаються неушкодженими, можна вважати, що від хворого виділено вірус відповідного типу.
Для підтвердження діагнозу поліомієліту ставлять реакцію нейтралізації парних сироваток хворого (взятих на початку і через 1-2 місяці після початку хвороби) з типовими штамами вірусу. Прогріту протягом 30 хвилин при 56 ° сироватку хворого розводять розчином Хенкса 1. 4-1. 64 і кожне розведення в кількості 0,25 мл змішують зі стандартною дозою вірусу (100 цитопатогенного доз - 0,25 мл вірусу поліомієліту) відповідно I, II і III типу. Після годинного контакту при кімнатній температурі сумішами заражають по дві пробірки культури тканини і поміщають в термостат на 4-7-9 днів. Зміна кольору середовища (з малинового на жовтий) свідчить про наявність в досліджуваній сироватці антитіл, так як сталася нейтралізація вірусу і клітини тканини, залишаючись життєздатними, дають зміна кольору індикатора в результаті дії їх продуктів обміну.
Для діагностики може бути застосована і реакція зв'язування комплементу з антигенами з типових штамів вірусу поліомієліту.
Специфічна профілактика і терапія. Специфічна профілактика поліомієліту заснована на імунізації населення вакциною. Перша вакцина була отримана в 1953 р Солка (США) з рідкої культури I, II і III типів (на ниркової тканини мавпи), інактивованої формаліном. В даний час в широких масштабах увійшла в практику жива вакцина з живого, але ослабленого вірусу (вакцина Себіна), що перевершує за своєю ефективністю вакцину Солка.

З метою екстреної профілактики і для лікування застосовують ПОЛІОМІЄЛІТНОЇ гамма-глобулін, що отримується з сироватки дорослих людей, що містить підвищену кількість антитіл проти вірусу поліомієліту.

Б. Віруси Коксакі і ECHO

Віруси Коксакі (Coxsackievirus) отримали свою назву по місту Коксакі (США), де вперше в 1948 р виділені з випорожнень хворих дітей з симптомами ураження центральної нервової системи.
Віруси ECHO (Enteric cytopathogenen human orphans) - кишкові Цитопатогенні людські віруси - виділені в 1941 р Дж. Ендерсом з співробітниками.
Віруси Коксакі і ECHO за епідеміологічними даними близькі до вірусу поліомієліту. Разом з останнім вони утворюють групу кишкових вірусів.
Віруси Коксакі і ECHO широко поширені в багатьох країнах. Їх знаходять в кишечнику (рідше в глотці) хворих людей і вірусоносіїв. Понад 5% здорових дітей до 4 років є вірусоносіями. Віруси також знаходять у стічних водах і у мух.
Віруси Коксакі і ECHO відносяться до дрібних вірусів (від 20 до 30 ммк). В їх хімічний склад входить білок і рибонуклеїнова кислота. Група вірусів Коксакі ділиться на дві підгрупи - А і В, в підгрупу А входять 24 серологічних типу, в підгрупу В-6 серологічних типів. Вірус ECHO включає близько 30 серологічних типів.
Зараження вірусами Коксакі і ECHO відбувається так само, як і іншими кишковими інфекціями, від хворої людини або вірусоносія, можливий і повітряно-крапельний шлях. Віруси Коксакі викликають гострий інфекційний процес (асептичний серозний менінгіт, енцефаліт, герпангіна і інші процеси), зазвичай протікає доброякісно, ​​виключаючи міокардит новонароджених (70% летальності).
Захворювання, що викликаються вірусами ECHO, також характеризуються різноманітною клінічною картиною, але найбільш часто спостерігаються асептичнийменінгіт і вірусний ентерит.
При вірусологічної діагностики дослідженню підлягають випорожнення, змиви з носоглотки, спинномозкова рідина, якими після обробки антибіотиками засівають культуру тканини для виявлення цитопатогенного дії і заражають новонароджених мишей. Віруси ECHO непатогенні для тварин, але в культурі тканини викликають Цитопатогенні ефект. Відмінності в патологоанатомічної картині загиблих мишей дозволяють визначити підгрупу А чи В вірусу Коксакі. Вірус Коксакі А викликає воскоподібний некроз скелетної мускулатури. Вірус Коксакі В вражає центральну нервову систему, печінку, підшлункову залозу і бурий жир.
Специфічна профілактика і терапія цих інфекцій знаходиться в стадії розробки.

В. Вірус ящура