Останнім часом для експрес-діагностики вірусних інфекцій використовують також ряд методів, спрямованих на виявлення вірусів або їх компонентів в різних видах клінічного матеріал. По суті їх можна віднести до методів вірусологічної або серологічної діагностиці; їх відрізняє висока специфічність і чутливість.
Реакція імунофлюоресценції. РИФ застосовують в прямому і непрямому варіантах (див. Підрозд. 1.4.5) для виявлення вірусу в матеріалі, отриманому від хворих, в інфікованих культурах клітин і організмі тварин (табл. 3.2).
Імунна електронна мікроскопія. ІЕМ дозволяє виявити специфічно пов'язані з антитілами вірусні частинки. Перевагою цього методу є одночасна концентрація вірусу і його ідентифікація за допомогою специфічної сироватки. Запропоновані модифікації ІЕМ передбачають обробку вірусосодержащего матеріалу антисироваткою у високому титрі, додавання до осаду фосфорно-вольфрамової кислоти або уранілацетатом з подальшим нанесенням на плівку (підкладку) і висушуванням. При електронній мікроскопії видно скупчення вірусних частинок.
ІЕМ використовують також для виявлення в біологічному матеріалі поліовірусов, цитомегаловірус, вірусів гепатиту А і В, некультивованих аденовірусів в тканини мигдаликів, некультивованих ентеро і ротавірусів у фекаліях, вірусів віспи в Оспен детрит.
Таблиця 3.2 Діагностика вірусних інфекцій за допомогою РІФ
Матеріал для иммунофлюоресцентного дослідження Вірусна
інфекція
від хворих для експрес-діагностики з інфікованих культур клітин і тварин для виявлення та ідентифікації вірусу Грип
парагрип
аденовірус
ная
респіратор
но-сінці
тіальная
кір
Спущені епітеліальні клітини носових ходів, шматочки легень і трахеї, отримані при аутопсії
те ж
Зішкріб з кон'юнктиви Те ж
Епітеліальні клітини в осаді сечі, змиви з глотки, лейкоцити крові, біопсійні і секційні препарати мозку
Первинні культури клітин нирок мавп, епітеліальні клітини носових ходів від експериментально заражених тхорів
Культури клітин нирок мавп, ембріонів людини, СОЦ, нер-2
Культури клітин (Held, нер-2, КВ та ін.)
Культури клітин (нер-2, Не1а \ диплоїдні людини) Краснуха
Ентеровірус - ная
Секційні препарати міокарда (Коксакі), епітеліальні клітини в осаді сечі
Культури клітин нирок кролика, мавп, RK, Vero, SIRK, ВНК-21 Культури клітин нирок мавп
Культури клітин нирок мавп паротит
сказ
Герпетіче
ська
Біопсійні препарати мозку
Мазки з вмісту везикул, зіскрібка везикул і рогівки, секційні і біопсійні препарати мозку
Культури клітин нирок мавп, амніону людини, курячих фібробластів
Мазки-відбитки мозку і слинних залоз інфікованих мишей
Культури диплоїдних клітин WI-38, фібробластів; зрізи тканини мозку заражених мишей Вірусна
інфекція Матеріал для иммунофлюоресцентного дослідження від хворих для експрес-діагностики з інфікованих культур клітин і тварин для виявлення та ідентифікації вірусу Цітомегало- вірусна Вітряна віспа
натуральна
віспа
арбовірусная
Гепатит В Ротавірусна Лейкоцити крові
Мазки з вмісту везикул
Зіскрібки з макули і папул, мазки з вмісту везикул
Лейкоцити крові (при кримської геморагічної, денге, колорадській лихоманки)
Біопсійні і секційні препарати печінки
Клітини шлунка і кишок у фекаліях Культури диплоїдних кле-ток R7-38, фібробластів Те ж
Культури клітин епітеліального походження Hela, Veroі ін.
Культури клітин ембріона курки, нирок ембріона свині, ВНК-21, СНЕВ, ПЕС; препарати слинних залоз переносників, Гемолімфа кліщів Зустрічний іммуноелектрофорез.
РВІЕФ в вірусологічної діагностики широко застосовується для виявлення в сироватках хворих не антитіл, а поверхневих антигенів (наприклад, HBsAg у хворих на гепатит В), а також для виявлення інших вірусних антигенів, що мають негативний заряд.
На скляну пластину наносять шар агару. Після затвердіння в ньому вирізають два паралельних ряди лунок. Антигени поміщають в лунки, розташовані ближче до катода, а антитіла - в лунки, що знаходяться ближче до анода, і проводять електрофорез. HBsAg, маючи негативний заряд, пересувається до аноду, а антитіла - до катода. Потім скла поміщають у вологу камеру і через 12 - 24 год враховують результати реакції за освітою ліній преципітації між шуканим антигеном і антитілом.
Реакція гемадсорбції на твердій основі. РГадсТО можна вважати поєднанням ІФА з РНГА. Висока чутливість реакції дозволяє застосовувати її для експрес-діагностики вірусних інфекцій.
Методика. Лунки полістиролів панелей одноразового використання обробляють імунним глобуліном (імунною сироваткою) і вносять в них суспензію досліджуваного матеріалу, що містить антиген.
Через 30 - 60 хв лунки багаторазово промивають буфером, додають суспензію еритроцитів, покритих специфічним імуноглобуліном, і через 30-60 хв визначають наявність гемаглютинації.
Якщо в матеріалі міститься специфічний антиген, він з'єднується з сироваткою, адсорбированной на поверхні лунок, і, в свою чергу, пов'язує імуноглобуліни на поверхні еритроцитів. В результаті відбувається агрегація еритроцитів (гемагглютинация). В описаній модифікації реакція застосовується для виявлення антигенів ротавірусів та інших вірусів у фекаліях хворих.
Молекулярно-біологічні методи. ПЛР і інші методи генодиагностики, що застосовуються для експрес-діагностики вірусних інфекцій, детально описані в підрозділ. 1.7.
Вибір перерахованих вище методів лабораторної діагностики окремих вірусних інфекцій визначається характером забо-левания, клінічними особливостями течії, біологічно-ми властивостями збудника, періодом хвороби і можливостями лабораторії.