Дана інформація призначена для фахівців у галузі охорони здоров'я та фармацевтики. Пацієнти не повинні використовувати цю інформацію в якості медичних рад чи рекомендацій.
Визначення кількості еритроцитів і лейкоцитів
Устаткування і реактиви:
1. змішувачі (меланжери) або пробірки для підрахунку еритроцитів і лейкоцитів.
2. 3% - розчин NaCl (для розведення еритроцитів) або рідина Гайема.
3. 3% розчин оцтової кислоти.
4. Рахункова камера.
Змішувачі являють собою капілярну піпетку з розширенням ампулою, містить намистинку, що сприяє змішання крові з розводящий рідиною. Змішувачі, призначені для підрахунку еритроцитів, мають капілярів тоншого калібру і більш об'ємистої ампулою на них нанесені мітки одна - 0,5 інша - перед входом в ампулу - 1.0, третій - біля виходу з ампули - 101.
При набору крові до позначки 0,5 вона виявиться розведеною в 200 разів, при досягненні до 1,0 - в 100 разів. Для розведення еритроцитів застосовують 3% розчин кухонної солі або рідина Гайема, в якій краще зберігається форма еритроцитів. Змішувач для лейкоцитів має більш широкий просвіт капіляра і меншу за величиною ампулу. Нанесені три мітки: 0,5. 1,0 і 11. Це дозволяє розвести кров у 10, або в 20 разів (найчастіше розводять у 20 раз). Для розведення лейкоцитів використовують 3 - 50% розчин оцтової кислоти. Оцтова кислота розчиняє еритроцити, що дозволяє вести підрахунок тільки лейкоцитів.
Для підрахунку формених елементів найбільш часто застосовується камера типу Бюркера з вигравіруваним на ній сіткою Горяєва. Рахункова камера складається з товстого предметного скла з особливим поглибленням. На дні поглиблення лічильної камери вигравіруваний сітка, в клітинах якої і підраховуються формені елементи. По краях поглиблення є підвищення, куди накладається покривне скло. Між нижньою поверхнею цього скла і дном поглиблення утворюється замкнутий простір, який і являє собою лічильну камеру. Глибина камери відповідає 0,1 мм. Рахункова камера типу Бюркера розділена навпіл глибокою канавкою і має на кожній половині сітку Горяєва, що дозволяє відразу вважати 2 краплі, не заповнюючи знову камери. Сітка Горяєва має 225 великих квадратів (15х15), 25 з яких поділені на малі, по 16 у кожному; є також порожні квадрати, зібрані в групи по 4 квадрата. Всього в сітці 100 великих порожніх квадратів, зібраних в 25 груп (5X5). Кожна сторона маленького квадратика дорівнює 1/20 мм, а так як висота камери становить 0,10 мм, то обсяг дорівнює 1/4000 ММЗ.
Для підрахунку еритроцитів беруть змішувач для еритроцитів, надягають гумову трубочку, легким насасиваніем набирають кров з уколу до позначки 0,5. Надлишок крові видаляють фільтрувальної папером, після чого кінчик змішувача занурюють в приготований заздалегідь флакон з 3% розчином кухонної солі або розчином Гайема і насмоктують розчин, заповнюючи всю ампулу до позначки 101. Негайно знімають гумову трубку, затискають змішувач по довжині між великим і вказівним або середнім пальцем і струшують протягом 3 хвилин. Після цього заповнюють лічильну камеру, зливають
1-2 краплі і випускають наступну краплю на сітку.
Для підрахунку лейкоцитів кров з місця уколу набирають до позначки 0,5, потім розводять 3% розчином оцтової кислоти до позначки 11. Енергійно струшують протягом 3 хвилин, після чого зливають
1-2 краплі і заповнюють лічильну камеру. При роботі з пробірками
для підрахунку еритроцитів, наливають 4 мл 3% розчину кухонної солі або рідини Гайема і в неї випускають 0,02 мл. крові,
отмеренной піпеткою від гемометра Салі. Для підрахунку білих кров'яних елементів в пробірку наливають 0,4 мл 3 - 5% розчину
оцтової кислоти і 0,02 мл крові. Енергійно струшують пробірки, потім в рідину опускають піпетку з гемометра Салі і,
набравши вміст, заповнюють лічильну камеру.
Заповнення лічильних камер:
Добре вимите і витерті шліфоване покривне скло накладають на виступаючі бічні краю. М'якоттю великих пальців покривне скло притирають, рухаючи вгору і вниз, весь час щільно притискаючи, поки не з'являться, так звані, Ньютонови кільця. Перед заповненням камери знову енергійно струшують змішувачі. випускають 2 краплі на фільтрувальний папір, а третій заповнюють щілину між камерою і покривним склом. Рідина по капілярності засмоктується між ними і заповнює простір над сіткою. Рідина при заповненні камери не повинна затікати в жолобки, якщо це стукає, то її видаляють фільтрувальної папером.
Підрахунок еритроцитів. Підрахунок проводять через 1-2 хвилини (коли еритроцити осядуть на дно камери), користуючись об'єктивом 40Х і окуляром 7X, або об'єктивом 8Х і окуляром 15Х.
Щоб не збитися з рахунку, дотримуються певної
послідовності рахунку: пересуваючи з квадрата в квадрат по
горизонталі один ряд зліва направо, наступний - справа наліво. Вважають, крім що знаходяться всередині квадрата, всі еритроцити, що лежать на двох лініях, наприклад, на лівій і верхній, і пропускають все що лежать праворуч і знизу. Вважати еритроцити треба в 5 великих квадратах, т. Е. В 80 маленьких.
Щоб уникнути неточності, внаслідок не цілком рівномірного розподілу крові в камері, вибирають для підрахунку не 5 сусідніх квадратів, а просуваються по всій сітці.
Кількість еритроцитів в 1 ММЗ (шукане) обчислюють таким чином: одиницею рахунку завжди, при кожній підрахунку, в будь-сітці служить малий квадрат. Обсяг його, як було зазначено, дорівнює 1/4000 мм 3. Порахувавши еритроцити в 5 великих квадратах (80 малих квадратів), ділять цю кількість на 80 і множать на 200 (ступінь розведення крові) та на 4000 (щоб отримати кількість
клітин у всьому кубічному міліметрі); практично, отже, отримане число множать на 10000 (додають чотири нулі).
Приклад: У 80 маленьких квадратах підраховано 480 еритроцитів. Отже, кількість еритроцитів в 1 ММЗ крові одно:
480 * 4000 * 200
------------ = 4 800 000
80
Підрахунок лейкоцитів. Для отримання досить точного результату при підрахунку лейкоцитів необхідно порахувати не менше 100 великих квадратів (= 1600. малих). Кількість лейкоцитів в 1 мм 3 отримують у такий спосіб: число, перелічене в3100 великих квадратах, ділять на 1600 (призводять до 1 малому квадрату) і множать на 20 (ступінь розведення) і на 4000; практично, скорочуючи постійні цифри формули, кількість перелічені лейкоцитів (при розведенні в 20 разів) множать на 50.
Приклад: у 100 великих квадратах підраховано 120 лейкоцитів.
Отже, кількість лейкоцитів в 1 ММЗ одно
Оцінка отриманих даних:
Нормальна кількість еритроцитів в 1 ММЗ від 4500000 до 5000000. У нормі середня кількість лейкоцитів в 1 мм 3 від 5000 до 9000 (крайні межі 4000 - 9000).
Обчислення колірного показника:
Для обчислення колірного показника користуються такою формулою:
знайдене кількість Нв знайдене число еритроцит.
------------------------. -------------------------
нормальна кількість Нв нормальне число еритроцит.
Практично визначення колірного показника виробляють шляхом ділення відсотка (одиниць) гемоглобіну на подвоєні дві перші цифри числа еритроцитів. Якщо ж кількість еритроцитів менше 1000000, то відсоток Нв ділиться на подвоєну першу цифру числа еритроцитів.
Мазок крові роблять зазвичай слідом за наповненням обох змішувачів. Витирають палець і користуються свежевиступівшей краплею крові. Кров беруть на предметне скло, яке має бути ретельно знежирена. Потім шліфованим предметним склом,
або товстим покривним склом, яке ставлять на перше предметне скло під кутом 45 'в безпосередній близькості від краплі крові, щоб вона розтікалася тонким шаром по ширині шліфованого скла, роблять на ньому мазок. Добре зроблений мазок жовтуватого кольору, просвічує. Слідом за цим мазок фіксують.
Фіксація мазка робиться для того, щоб ущільнити протоплазму формених елементів крові і зробити мазок більш стійким. Висохлий на повітрі мазок занурюється для фіксації в банку з метиловим спиртом на 1 - 3 хв. або в суміш Нікіфорова, що складається з рівних частин етилового спирту та ефіру, на 10-20 хвилин. Після закінчення фіксації мазки виймають пінцетом і ставлять у вертикальному положенні на фільтрувальний папір для висушування.
0крашіваніе мазка проводиться, як правило, за допомогою суміші декількох фарб. Найбільш широко застосовується фарбування мазка за Романовським - Гімзою. Перед вживанням фарбу розводять дистильованою водою з розрахунку 1 - 2 краплі на 1 мл води. Мазки укладають на містки з скляних паличок, що спираються на краю кювети, і заливають барвником в максимальній кількості, яка може втриматися на склі. Тривалість забарвлення 30 хвилин. Після фарбування барвник змивають струменем води, а мазки ставлять вертикально на фільтрувальний папір для просушування.
1. Предметні скла (знежирені).
2. 1% розчин брілліанткрезілблау (спиртової).
3. Шліфувальне предметне скло.
4. Чашка Петрі.
5. Фільтрувальний папір.
6. Скляна паличка.
7. Іммерсійна масло.
На знежирене абсолютно чисте предметне скло наносять скляною паличкою краплю 1% алкогольного розчину фарби брілліанткрезілблау. Шліфувальні предметним склом
цю краплю розмазують так само, як при готуванні звичайного
мазка крові. Після підсихання барвника на нього наносять краплю
крові і роблять тонкий мазок, який відразу поміщають у вологу камеру (чашка Петрі з вкладеним в неї шматочком мокрій фільтрувального паперу). Через 3-5 хвилин мазок виймають, висушують на повітрі і досліджують під мікроскопом з иммерсией.
Під мікроскопом еритроцити при цій забарвленням жовтувато-зеленуватого кольору; в окремих же еритроцитах помічається синя
сіточка, іноді мізерна і ніжна, іноді рясна, зерниста -
це і є ретикулоцити.
Підрахунок ретикулоцитів проводиться так:
Підрахунок лейкоцитарної формули: