НАКАЗ МОЗ СРСР від 31.07.78 N 720 "ПРО ПОЛІПШЕННЯ МЕДИЧНОЇ ДОПОМОГИ ХВОРИМ З гнійної хірургічної ЗАХВОРЮВАННЯМИ І ПОСИЛЕННЯ ЗАХОДІВ ПО БОРОТЬБІ З внутрішньолікарняних інфекцій"
Додаток N 2. Інструкція про бактеріологічний контроль КОМПЛЕКСУ санітарно-ГІГІЄНІЧНИХ ЗАХОДІВ У ЛІКУВАЛЬНО-ПРОФІЛАКТИЧНИХ УСТАНОВАХ (ВІДДІЛЕННЯХ ХІРУРГІЧНОГО ПРОФІЛЮ, у палатах та відділеннях реанімації ТА ІНТЕНСИВНОЇ ТЕРАПІЇ)
1.1. Інструкція по бактеріологічному контролю комплексу санітарно-гігієнічних заходів і контролю стерильності виробів медичного призначення призначена для працівників бактеріологічних лабораторій і дезінфекційних станцій системи Міністерства охорони здоров'я, які здійснюють бактеріологічний контроль.
<*> - Інструкція розроблена Всесоюзним науково-дослідним інститутом дезінфекції та стерилізації Міністерства охорони здоров'я СРСР.
1.2. Бактеріологічні лабораторії санітарно-епідеміологічних і дезінфекційних станцій проводять контроль не рідше двох разів на рік, бактеріологічні лабораторії лікувальних установ контролюють санітарно-гігієнічний режим (забрудненість різних об'єктів і повітря) один раз на місяць, а контроль стерильності інструментів, перев'язувального матеріалу, операційної білизни, рук хірургів і шкіри операційного поля (вибірково) - 1 раз на тиждень.
1.3. Об'єктами дослідження при проведенні бактеріологічного контролю є:
- різні об'єкти зовнішнього середовища;
- системи переливання крові багаторазового використання.
- зонди, катетери, бужі, гумові рукавички і др.ізделія з гуми і пластикатів;
- хірургічний шовний матеріал, підготовлений до використання;
- руки хірургів і шкіра операційного поля.
2.1. Дослідження мікробного обсіменіння повітряного середовища.
2.1.1. Бактеріологічне дослідження повітряного середовища передбачає:
- визначення загального змісту мікробів в 1 куб. м повітря.
- Визначення змісту золотистого стафілокока в 1 куб. м повітря.
2.1.2. Відбір проб повітря для бактеріального дослідження проводять в наступних приміщеннях:
- відділеннях і палатах реанімації та інтенсивної терапії та ін. приміщеннях, що вимагають асептичних умов.
2.1.3. Проби повітря відбирають аспіраційних методом за допомогою апарату Кротова.
Швидкість протягування повітря становить 25 л на хвилину. Кількість пропущеного повітря має становити 100 літрів для визначення загального вмісту бактерій і 250 літрів для визначення наявності золотистого стафілокока. Дослідження повітря седиментаційним методом допускається у виняткових випадках.
2.1.4. Для визначення загального вмісту бактерій в 1 куб. м повітря забір проб проводять на 2% поживний агар. Посіви інкубують при температурі 37 ° С протягом 24 годин, потім залишають на 24 години при кімнатній температурі, підраховують кількість колоній, що виросли і проводять перерахунок на 1 куб. м повітря. Якщо на чашках поживного агару виросли колонії цвілевих грибів, їх підраховують і роблять перерахунок на 1 куб. м повітря. У протоколі кількість цвілевих грибів вказують окремо.
Примітка: При перенесенні апарату Кротова з одного приміщення в інше його поверхню обробляють дезинфікуючим розчином. Столик, внутрішні стики і кришку приладу з внутрішньої і зовнішньої сторони протирають спиртом (70 град.).
2.1.5. Для визначення наявності золотистого стафілокока забір проб проводять на желточно-сольовий агар (ЖСА). Чашки поміщають в термостат при 37 ° С на 24 години і витримують ще 24 години при кімнатній температурі. Колонії, підозрілі на стафілокок, підлягають обов'язковій мікроскопії та подальшої ідентифікації.
З желточно-сольового агару знімають в першу чергу колонії стафілокока, які утворюють райдужний віночок навколо колонії (позитивна лецітовітеллазной реакція), подальшому вивченню піддають також пігментовані колонії і з негативною лецітовітеллазной реакцією. Підозрілі колонії пересівають на чашки з кров'яним або молочним агаром. Подальше вивчення їх проводять за схемою.
Схема бактеріологічного дослідження на стафолококков.
Посів на елективні середовища (желточно-сольовий, молочно-сольовий або молочно-желточно-сольовий агар). Засіяні середовища витримують в термостаті при 37 ° С протягом 2 діб, або одну добу в термостаті і додатково 24 години на світлі при кімнатній температурі.
2-3. Другий-третій день.
Отвивки на скошений агар для подальшого дослідження не менше 2-х колоній, підозрілих на стафілокок. Для дослідження отвівают насамперед колонії, що дають позитивну лецітовітеллазной реакцію. При відсутності на чашках таких колоній подальшому дослідженню піддаються пігментовані колонії, схожі за морфологією зі стафілококом. При одночасній наявності на чашках колоній стафілокока, що відрізняються по пігменту, слід отвівают не менше двох колоній різного виду.
Пробірки з посівом поміщають в термостат при 37 ° С на 18-20 годин.
4. Четвертий день.
Після добової інкубації у виділених штамів перевіряють морфологію, тинкторіальних властивості (забарвлення по Граму) і наявність плазмокоагулирующей активності. Слід зазначити, що характер росту культури на скошеному агарі в ряді випадків дає можливість "передбачити" приналежність її до виду золотистого стафілокока або епідермального стафілокока. Перші, як правило, дають рясний рівномірний, соковитий зростання, другі - дуже убогий і нерівномірне зростання по ходу посіву.
Забарвлення по Граму проводять загальноприйнятим методом. Під мікроскопом забарвлені по Граму стафілококи мають вид фіолетово-синіх коків, що розташовуються гронами або невеликими купками ( "мереживо").
Плазмокоагулирующей активність перевіряють у реакції коагуляції плазми (РКП).
З урахуванням результатів РКП і лецітовітеллазной активності в 70-75% випадків, на четвертий день дослідження може бути підтверджена приналежність виділеного штаму до виду золотистого стафілокока і виданий відповідний відповідь. На схемі представлені можливі варіанти поєднань результатів визначення плазмокоагулирующей і лецітовітеллазной активності.
Якщо культура має тільки плазмокоагулирующей або тільки лецітовітеллазной активністю, то для остаточної відповіді потрібно визначення інших ознак патогенності (ферментації маніту в аеробних умовах - АФМ або ДНКазной активності).
У цих випадках відповідь видають в залежності від результатів, отриманих при визначенні названих ознак.
У разі необхідності на 4-ий день дослідження може бути поставлена реакція визначення ДНКазной активності або анаеробної ферментації маніту.
Визначення антібіограмми проводять тільки після виділення чистої культури, за показаннями (вибір способу лікування і т.д.).
Виділені культури золотистого стафілокока підлягають фаготіпірованію.
Облік результатів фаготипирования, визначення чутливості до антибіотиків, ДНКазной активності. Остаточна видача відповіді.
Критерії оцінки мікробного обсіменіння повітря в хірургічних клініках
2.2. Дослідження мікробного обсіменіння об'єктів зовнішнього середовища.
2.2.1. Бактеріологічне дослідження мікробної обсіменіння предметів зовнішнього середовища передбачає виявлення стафілокока синьогнійної палички, бактерій групи кишкових паличок і аероманад (строго за показаннями). Забір проб з поверхонь різних об'єктів здійснюють методом змивів.
2.2.2. Взяття змивів виробляють стерильним ватним тампоном на паличках, вмонтованих в пробірки, або марлевими серветками, розміром 5х5 см, простерилізованих в паперових пакетах або в чашках Петрі. Для зволоження тампонів в пробірки з тампонами наливають по 2,0 мл стерильного фізіологічного розчину. При використанні серветок стерильний фізіологічний розчин розливають в стерильні пробірки по 2,0 мл. Серветку захоплюють стерильним пінцетом, зволожують фізіологічним розчином з пробірки, після протирання досліджуваного об'єкта поміщають в ту ж пробірку.
2.2.3. При контролі дрібних предметів змиви забирають з поверхні всього предмета. При контролі предметів з великою поверхнею змиви проводять в декількох місцях досліджуваного предмета площею приблизно в 100-200 кв. см.
2.2.4. Для виділення стафілококів роблять посів безпосередньо на чашку Петрі з желточно-сольовим агаром (див. Схему дослідження на стафілокок). Крім того, в якості середовища накопичення використовують бульйон з 6,5% хлористого натрію, бульйон з 1% глюкози, розлиті в пробірки по 0,5 мл, в які засівають по 0,2-0,3 мл змивний рідини. Засіяні пробірки інкубують при 37 ° С протягом 20-24 годин, після чого роблять висів на ЖСА (див. Схему дослідження на стафілокок).
2.2.5. Для виявлення бактерій групи кишкових паличок виробляють посів на середу збагачення, для чого тампон (марлеву серветку) занурюють в 10-20% жовчний бульйон або середу Кесслера. Через добу інкубування при 37 ° С роблять пересівання на середу Ендо. Підозрілі колонії на середовищі Ендо микроскопируют і пересівати на 2-у бродильно пробу - середу Гіссен з глюкозою. Середу витримують 24 години при 43 град.С.
Примітка: При використанні свинячий жовчі для приготування жовчного бульйону, концентрація жовчі повинна бути в 20 разів менше.
2.2.6. Для виявлення синьогнійної палички спеціальні посіви можна не проводити. Зазвичай колонії синьогнійної палички вдається виявити на кров'яному агарі або на середовищі Ендо. Колонії, підозрілі на синьогнійну паличку, пересівають на скошений агар, що містить 2-5% гліцерину або маніту. Колонії синьогнійної палички дають на поверхні скошеного агару рясний ріст із зеленуватим відтінком, маслянистої консистенції з характерним медовим запахом. Виділену культуру забарвлюють по Граму, микроскопируют, визначають гемолітичні властивості шляхом висіву на чашку з кров'яним агаром.
Орієнтовний перелік об'єктів, що підлягають бактеріологічному контролю:
А. Наркозно кімната
1. Інкубаційна трубка
2. Маска наркозного апарату
3. Трійник наркозного апарату
4. Гофрована трубка
7. Дихальний мішок
8. Руки лікарів анестезіологів - реаніматологів, сестер
Змішують всі компоненти середовища, крім глюкози і тиогликолевой кислоти.
Цистин попередньо розчиняють в невеликій кількості дистильованої води при поступовому додаванні 10-20% розчину їдкого натру до його повного розчинення. Суміш подщелачивают 10% розчином їдкого натру до рН 8,0-8,2, кип'ятять в котлі з паровою сорочкою або на відкритому вогні при постійному перемішуванні до розплавлення агар-агар 5-10 хвилин. Можна автоклавувати 20 хвилин при 100 град. потім додають гарячу воду до початкового об'єму, додають глюкозу і тіогліколевую кислоту, фільтрують через полотно, встановлюють рН 7,2-7,3. Додають розчин резазуріна, змішують і розливають в стерильні пробірки по 20 мл. Стерилізують 20 хвилин при 120 град.
Тіогліколевую середу можна зберігати до посіву, оберігаючи її від світла, при кімнатній температурі протягом не більше 7 діб з дня приготування.
Примітка: 1. Допускається приготування середовища без розчину резазуріна натрію.
2. Допускається застосування інших сортів агару, але з заздалегідь витітрованним кількістю.
- Головна
- НАКАЗ МОЗ СРСР від 31.07.78 N 720 "ПРО ПОЛІПШЕННЯ МЕДИЧНОЇ ДОПОМОГИ ХВОРИМ З гнійної хірургічної ЗАХВОРЮВАННЯМИ І ПОСИЛЕННЯ ЗАХОДІВ ПО БОРОТЬБІ З внутрішньолікарняних інфекцій"